田亞娜，劉廣喜，謝 梅，李建強(qiáng)，張培訓(xùn)

（1.衡水市冀州區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 053200；2.保定冀中藥業(yè)有限公司 071000）

2013 年初，我國首次發(fā)現(xiàn)人感染H7N9 流感病例，隨后在活禽市場發(fā)現(xiàn)禽間H7N9 流感病毒感染。2017 年初，部分省份發(fā)現(xiàn)家禽高致病性H7N9 流感變異毒株，并引發(fā)多起家禽疫情。 同時， 人感染H7N9 病例驟增，2017 年1～6 月份全國人感染H7N9流感病例635 例， 死亡224 例。 為做好H7N9 流感防控工作，2017 年4 月份農(nóng)業(yè)部（現(xiàn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部）發(fā)布第2516 號公告，對跨省調(diào)運(yùn)活禽前要進(jìn)行H7N9 檢測， 血清學(xué)陽性的不得出具動物檢疫合格證明。2017 年秋季以來，按照原農(nóng)業(yè)部（現(xiàn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部）的要求，我省對家禽全面實施H7N9 流感免疫。2018 年12 月份，河北省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳印發(fā) 《河北省家禽H7N9 流感防治指導(dǎo)意見（2018-2020 年）》 的通知， 通知要求， 對跨省調(diào)運(yùn)活禽要進(jìn)行H7N9 流感免疫抗體檢測，免疫抗體合格率達(dá)到70%以上，方可出具動物檢疫合格證明；對跨省調(diào)運(yùn)生長周期小于50 天的肉雞肉鴨的，應(yīng)提供H7N9 流感免疫檔案。 2017 年4 月下旬以來，我區(qū)按照上級文件精神開展了H7N9 流感血清學(xué)檢測。 2017 年4月份到2018 年12 月份檢測未免疫H7N9 亞型禽流感疫苗的商品肉雞12 個場75 批（每批30 份，以下相同）2250 份血清、商品肉鵝3 個場4 批次120 份血清，血凝抑制效價均小于4log2,全部為陰性；2019 年7～12 月份檢測4 批次青年蛋雞120 份血清，血凝抑制效價在6～10log2，免疫抗體合格率均為100%；2019 年9～11 月份檢測末次免疫H7N9 亞型禽流感疫苗3～6 月后的淘汰蛋雞5 批150 份血清，血凝抑制效價在7～10log2，免疫抗體合格率均為100%。 現(xiàn)將各類型禽免疫及抗體檢測情況報告如下。

1 被采樣禽免疫與采樣情況

1.1 2017 年4 月份到2018 年12 月份未免疫H7N9 亞型禽流感疫苗禽血清采樣情況。

1.1.1 商品肉雞免疫與采樣情況：被采樣12 個商品肉雞場，7 個場網(wǎng)上平養(yǎng)，5 個場立體籠養(yǎng)，均未免疫H7N9 亞型禽流感疫苗，40～42 日齡出欄前7～10d 抽血采樣， 共采商品肉雞12 個場75 批2250 份血清。

1.1.2 商品肉鵝免疫與采樣情況：被采樣3 個鵝場均樹林下地面平養(yǎng)， 未免疫H7N9 亞型禽流感疫苗，70 日齡出欄前7d 左右抽樣檢測，共采4 批次120 份血清。

1.2 免疫H7N9 亞型禽流感疫苗禽的免疫與采樣情況

1.2.1 跨省調(diào)運(yùn)青年蛋雞免疫情況與采樣情況：2019 年7 月到2019 年12 月，對冀州區(qū)3 個雞場的4 批青年蛋雞進(jìn)行H7N9亞型禽流感免疫抗體檢測，4 批雞的免疫與采樣情況見下表1。

1.3 淘汰蛋雞免疫與采樣情況：2019 年10 月至11 月，對冀州區(qū)5 個雞場的5 批淘汰雞進(jìn)行H7N9 亞型禽流感抗體檢測，5批雞的免疫與采樣情況見表2。

2 實驗材料與方法

2.1 檢測方法：高致病性禽流感診斷技術(shù)GB/T 18936-2003血凝和血凝抑制（HA-HI）試驗。

表1 青年蛋雞免疫與采樣情況表（每次每批30 份血清）

表2 淘汰蛋雞免疫與采樣情況表（每次每批30 份血清）

2.2 檢測儀器：離心機(jī)、96 孔90°V 型血凝板、5～50μl 多道移液器、5-50μl 單道移液器、微量振蕩器、生化培養(yǎng)箱等。

2.3 檢測試劑

2.3.1 禽流感病毒H7 亞型血凝抑制試驗抗原: 哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)， 共用3 批， 批號分別是：2017004、2017006、2018003。2017 年3 月份至2018 年12 月用于檢測未免疫商品肉雞和商品肉鵝血清。

2.3.2 禽流感病毒H7 亞型（Re-2 株）血凝抑制試驗抗原：哈爾濱國生生物科技股份公司生產(chǎn)，批號：20190415。 2019 年7月份至2019 年12 月份用于檢測免疫過重組禽流感病毒H7N9H7Re-2 株滅活疫苗的雞血清。

2.3.3 1%紅細(xì)胞懸液

按照高致病性禽流感診斷技術(shù)GB/T 18936-2003 血凝和血凝抑制（HA-HI）試驗要求制備1%紅細(xì)胞懸液。

2.3.4 被檢血清

上述1 中12 個商品肉雞場75 個批次2250 份雞血清，3 個商品肉鵝場4 批次120 份血清，3 個青年蛋雞場4 個批次120 份血清，5 個淘汰蛋雞場150 份血清，合計2640 份雞血清。

2.3.5 PBS 液

按照高致病性禽流感診斷技術(shù)GB/T 18936-2003 血凝和血凝抑制（HA-HI）試驗要求自制pH7.2 0.01mol/LPBS 液。

3 抗體檢測結(jié)果

3.1 2017 年4 月 份 至2018 年12 月 份 檢 測75 批 次2250 份商品肉雞血清，血凝抑制效價全部＜4log2，均為陰性。

3.2 2017 年5 月份至2018 年9 月份檢測3 個鵝場4 批120份血清，血凝抑制效價全部＜4 log2，均為陰性。

3.3 2019 年7 月份到2019 年12 月份檢測免疫青年蛋雞4批次120 份血清。A 雞場2 批次60 份血清血凝抑制效價均≧10 log2， 免疫抗體合格率均為100%;B 雞場血凝抑制效價在6～8 log2 ，平均血凝抑制效價為7.29 log2;C 雞場血凝抑制效價在7～10 log2 之間，平均血凝抑制效價為7.93 log2。 B、C 兩雞場免疫抗體合格率均為100%。

3.4 2019 年10 月-2019 年11 月份檢測淘汰蛋雞5 批150份血清。 D 養(yǎng)雞場H7N9 血凝抑制效價在9～10 log2，平均血凝抑制效價為9.87log2；E 養(yǎng)雞場H7N9 血凝抑制效價在7～10 log2、平均血凝抑制效價為8.87log2；F 養(yǎng)雞場H7N9 血凝抑制效價在9～10 log2， 平均血凝抑制效價為9.67log2；G 養(yǎng)雞場H7N9 血凝抑制效價在8～9 log2， 平均血凝抑制效價為9.47log2 ；H 養(yǎng)雞場H7N9 血凝抑制效價均≥10 log2 。這5 批淘汰蛋雞的免疫抗體合格率均為100%。

4 結(jié)果分析

4.1 從實驗結(jié)果3.1 和3.2 可以看出，2017 年4 月份到2018年12 份期間， 共檢測未免疫的12 個場75 批次2250 份血清，3個肉鵝場4 批次120 份血清，血凝抑制效價均小于4log2,全部為陰性。這說明，2017 年4 月份到2018 年12 月份期間冀州區(qū)內(nèi)商品肉雞和商品肉鵝未感染H7N9 亞型流感或冀州區(qū)內(nèi)無H7N9亞型流感流行。

4.2 從實驗結(jié)果3.3 可以看出，2019 年檢測的A 場2 批60份血清H7N9H7Re-2 血凝抑制效價都≥10log2，血凝抑制效價水平高，且比較整齊，說明所用疫苗質(zhì)量好，加強(qiáng)免疫效果好。 僅做過一次政府采購禽流感疫苗的B、C 兩場各30 份雞血清血凝抑制抗體效價分別6～8log2 和7～10log2, 免疫抗體合格率均達(dá)到100%，免疫抗體效價也較高。在此以前的高致病性禽流感免疫抗體檢測工作中，對于僅做過1 次高致病性禽流感疫苗免疫的雞，免疫21d 后抽血進(jìn)行免疫抗體檢測，血凝抑制效價往往水平低，參差不齊， 沒有一次血凝抑制效價全部合格的情況， 無論是H5亞型禽流感，還是H7 亞型禽流感。

4.3 從實驗結(jié)果3.4 中可以看出，D、E、F、G 養(yǎng)雞場春天3～4月份末次免疫后至10～11 月采血做H7N9 抗體檢測，各批雞平均血凝抑制效價在8.87～9.87log2， 且免疫抗體合格率均為100%，說明H7N9 免疫抗體水平高，持續(xù)時間長達(dá)6～7 月，這與開產(chǎn)前的基礎(chǔ)免疫效果分不開的。H 養(yǎng)雞場末次免疫間隔3 個月的血凝抑制效價≧10 log2，免疫抗體水平高，還有待跟蹤檢測。

4.4 本實驗僅檢測了3 個青年蛋雞場的4 批青年雞120 份血清和5 個蛋雞場的5 批150 份淘汰雞血清的H7N9 免疫抗體，檢測批次和檢測分?jǐn)?shù)均較少， 還有待于增加檢測批次和檢測數(shù)量，更進(jìn)一步摸清H7N9 免疫抗體的變化規(guī)律。 由于目前養(yǎng)雞生產(chǎn)的實際情況，也未能做對照實驗。

4.5 免疫抗體檢測結(jié)果僅能代表疫苗株的免疫抗體水平，如流行毒株和疫苗毒株不匹配， 還不能真正代表雞體對當(dāng)前流行疾病的實際免疫能力。 建議：獸醫(yī)工作者根據(jù)禽疫病流行情況及時開展疫病檢測，為動物疫病防控工作提供科學(xué)依據(jù)。