李佳瑞 田志剛 彭 慧 (中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)免疫學(xué)研究所，合肥 230027)

自然殺傷(natural killer，NK)細(xì)胞是固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分，其在抵御病原微生物感染和腫瘤免疫監(jiān)視中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。與T、B淋巴細(xì)胞不同，NK細(xì)胞無(wú)須預(yù)先被抗原致敏便可快速活化，通過(guò)強(qiáng)大細(xì)胞毒效應(yīng)直接殺傷被感染的靶細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞，可在適應(yīng)性免疫應(yīng)答啟動(dòng)之前，保護(hù)機(jī)體免受病原體的感染[1]。NK細(xì)胞的活化是一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程，其功能狀態(tài)受到位于膜表面的多種活化性或抑制性受體的調(diào)控，同時(shí)也依賴多種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)[2,3]。NK細(xì)胞活化后，釋放大量穿孔素和顆粒酶直接殺傷靶細(xì)胞，或分泌多種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，例如，NK細(xì)胞釋放大量IFN-γ和TNF-α招募淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)至感染部位并增強(qiáng)免疫應(yīng)答，并誘導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)的成熟，但在慢性炎癥中也可分泌IL-10以減弱T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的活化[4,5]。因此，NK細(xì)胞在固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答過(guò)程中都具有非常強(qiáng)大的功能。

NK細(xì)胞是異質(zhì)性的細(xì)胞群體。近年來(lái)，我們及其他研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)表面分子CD49a和CD49b(DX5)能將肝臟NK細(xì)胞劃分為比例和數(shù)目相近的兩個(gè)亞群，其中CD49a-CD49b+NK細(xì)胞為參與外周血液循環(huán)的經(jīng)典NK(conventional NK，cNK)細(xì)胞，而CD49a+CD49b-NK細(xì)胞則選擇性駐留于肝竇中，我們將其定義為肝臟駐留NK(liver-resident NK，LrNK)細(xì)胞[6,7]。隨后，科研人員在皮膚、子宮、腸道、脂肪和唾液腺等許多非淋巴組織中陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了組織駐留NK(tissue-resident NK，trNK)細(xì)胞，這些新亞群的發(fā)現(xiàn)使我們對(duì)固有淋巴細(xì)胞(innate lymphoid cells，ILCs)家族乃至整個(gè)免疫系統(tǒng)有了新的認(rèn)識(shí)[8-17]。

1 LrNK細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)

1.1LrNK細(xì)胞的發(fā)現(xiàn) 肝臟是天然免疫優(yōu)勢(shì)器官，與機(jī)體的新陳代謝和免疫穩(wěn)態(tài)密切相關(guān)[18]。肝臟具有雙重血供，20%血供來(lái)自于肝動(dòng)脈，其余均由收集消化道靜脈血液的門(mén)靜脈血液提供，門(mén)靜脈血液攜帶大量來(lái)自胃腸道的微生物及其代謝產(chǎn)物、食物小分子、環(huán)境毒素至肝臟。肝竇是位于肝板結(jié)構(gòu)之間的蜂巢狀細(xì)小血管，動(dòng)脈和靜脈血匯聚于此并通過(guò)中央靜脈流出肝臟[19]。肝竇含有豐富的淋巴細(xì)胞(如NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、T細(xì)胞)和大量非淋巴細(xì)胞(如肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞、肝臟星形細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞等)[20]。血液在肝竇中流速緩慢，肝內(nèi)免疫細(xì)胞與血液充分接觸而暴露于大量抗原之中，免疫細(xì)胞對(duì)有害病原體發(fā)生應(yīng)答，對(duì)無(wú)害抗原保持耐受，從而維持肝臟穩(wěn)態(tài)[21]。NK細(xì)胞在肝臟中富集，約占人肝臟總淋巴細(xì)胞的25%～40%，因此，肝臟特有NK細(xì)胞逐漸引起關(guān)注[22-24]。

早期研究發(fā)現(xiàn)，胚胎期小鼠肝臟有一群比例很高、表型不成熟的TRAIL+CD49b-NK細(xì)胞，其在小鼠出生后仍特異性維持于肝臟之中，提示肝臟存在不同的NK細(xì)胞亞群[25,26]。在此研究基礎(chǔ)之上，我們發(fā)現(xiàn)肝臟CD49b+NK細(xì)胞和CD49b-NK細(xì)胞基因表達(dá)譜存在顯著差異，包括活化性或抑制性受體、細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)錄因子和毒性效應(yīng)分子等，其中，CD49a在肝臟CD49b-NK細(xì)胞上選擇性表達(dá)，而在CD49b+NK細(xì)胞上幾乎不表達(dá)。轉(zhuǎn)輸實(shí)驗(yàn)證明肝臟CD49a+CD49b-NK細(xì)胞表型穩(wěn)定，是不同于胸腺NK細(xì)胞或cNK細(xì)胞的特殊亞群[6,7,27,28]。

LrNK細(xì)胞和cNK細(xì)胞在諸多方面存在差異。LrNK細(xì)胞具有組織特異性，呈現(xiàn)不成熟且高度活化的表型特征，其高表達(dá)CD49a、TRAIL、CD69，低表達(dá)NK細(xì)胞成熟相關(guān)分子如CD49b、CD11b、Ly49受體家族等[6]。cNK細(xì)胞高表達(dá)T-box家族轉(zhuǎn)錄因子T-bet和Eomes，而LrNK細(xì)胞呈T-bet+Eomes-[7]。LrNK細(xì)胞脫顆粒能力弱于cNK細(xì)胞，但其高表達(dá)殺傷相關(guān)功能分子穿孔素和粒酶B，提示其具備潛在的殺傷能力，同時(shí)分泌炎癥因子如IFN-γ、TNF-α和GM-CSF[6,7,11]。此外，LrNK細(xì)胞表達(dá)免疫記憶相關(guān)分子CXCR6和CD127(IL-7Rα)，在接觸性超敏反應(yīng)和病毒感染模型中，能介導(dǎo)獨(dú)立于T、B淋巴細(xì)胞的半抗原特異的免疫記憶應(yīng)答[6,29-34]。

1.2人LrNK細(xì)胞的發(fā)現(xiàn) 人NK細(xì)胞可根據(jù)細(xì)胞表面CD56的表達(dá)情況分為CD56dim和CD56bright兩個(gè)群體，其中外周血NK細(xì)胞以CD56dim為主。人肝臟組織富含CD56brightCD16-CD57-NK細(xì)胞，但僅有少量CD56brightNK細(xì)胞表達(dá)CD49a，CD56brightCD49a+NK細(xì)胞高表達(dá)T-bet而低表達(dá)Eomes，但其占肝臟總NK細(xì)胞的比例較低且在人群中波動(dòng)較大[35]。CXCR6將人肝臟NK細(xì)胞劃分為比例相近的兩個(gè)亞群，CXCR6+NK細(xì)胞具有組織駐留淋巴細(xì)胞的表型特征，人外周血NK細(xì)胞則以CXCR6-為主。因此，CXCR6可能作為人和小鼠LrNK細(xì)胞的通用標(biāo)志[36]。但與小鼠LrNK細(xì)胞不同的是，人肝臟CXCR6+NK細(xì)胞的細(xì)胞毒效應(yīng)分子和細(xì)胞因子的分泌水平較低，并且呈現(xiàn)T-betlowEomeshigh，人外周血NK細(xì)胞則為T(mén)-bethighEomeslow[36]。T-bet和Eomes作為區(qū)分LrNK細(xì)胞和cNK細(xì)胞的兩個(gè)特征轉(zhuǎn)錄因子，它們?cè)谛∈蠛腿薔K細(xì)胞亞群的表達(dá)模式上呈明顯的種屬差異[37,38]。此外，CD49e-NK細(xì)胞也被報(bào)道在人肝臟中特異性富集，該亞群可能和CXCR6+NK細(xì)胞存在重疊[39]。以上研究證實(shí)人和小鼠LrNK細(xì)胞具有不完全相同的特征。

2 LrNK的轉(zhuǎn)錄調(diào)控及發(fā)育路徑

2.1LrNK細(xì)胞的發(fā)育分化路徑 絕大部分NK細(xì)胞起源于具有自我更新及維持能力的骨髓造血干細(xì)胞(hemopoietic stem cells，HSCs)[40,41]。共同淋巴祖細(xì)胞(common lymphoid progenitors，CLPs)位于HSC下游，CLP是淋巴細(xì)胞發(fā)育早期的重要節(jié)點(diǎn)，受到Notch信號(hào)的調(diào)控并具有發(fā)育成T細(xì)胞、B細(xì)胞、ILCs的潛能，CLP表型定義為L(zhǎng)in-IL-7Rα+c-KitintSca-1intFlt3high[42-44]。CLP獲得α4β7和CXCR6的表達(dá)后，成為共同固有淋巴祖細(xì)胞(common innate lymphoid progenitors，CILPs)并失去向T、B細(xì)胞分化的潛能[45,46]。CILP產(chǎn)生分化潛能不同的NK祖細(xì)胞(NK progenitors，NKPs)和共同輔助樣固有淋巴祖細(xì)胞(common helper innate lymphoid progenitors，CHILPs)。NKP分化為cNK細(xì)胞，而CHILP最終分化為包括LrNK細(xì)胞在內(nèi)的ILC1、ILC2、ILC3以及淋巴組織誘導(dǎo)(lymphoid tissue inducer，LTi)細(xì)胞，因此，LrNK細(xì)胞和cNK細(xì)胞發(fā)育路徑不同[46-49]。

CD122(IL-2Rβ)作為IL-15受體復(fù)合物的組成部分，使NKP接受IL-15信號(hào)得以存活和增殖，因而CD122被視作NKP的標(biāo)志分子。早期研究將NKP表型定義為L(zhǎng)in-CD122+NK1.1-CD49b-[50]，但其與OP9-DL1基質(zhì)細(xì)胞體外共培養(yǎng)后也能產(chǎn)生T細(xì)胞，說(shuō)明此NKP具有分化為NK細(xì)胞和T細(xì)胞的雙向潛能[51]。隨后，NKP進(jìn)一步被劃分為L(zhǎng)in-CD27+CD122-IL-7Rα+Flt3-CD244+的pre-NKP(pre-NK progenitors)和Lin-CD27+CD122+IL-7Rα+Flt3-CD244+的rNKP(refined-NK progenitors)，它們都僅向NK細(xì)胞定向分化[48,52]。由于上述關(guān)于NKP表型鑒定的研究是在trNK細(xì)胞和其他ILCs被發(fā)現(xiàn)之前開(kāi)展的，pre-NKP和rNKP是否具有向trNK細(xì)胞和其他ILCs分化的潛能尚需進(jìn)一步研究。NKP的下游分化過(guò)程伴隨著表型變化，產(chǎn)生不成熟NK (immature NK，iNK)細(xì)胞和成熟NK(mature NK，mNK)細(xì)胞。NK1.1和NKG2A/CD94最早獲得表達(dá)，NKp46、Ly49受體、CD49b、CD11b、CD43、KLRG1等逐漸獲得表達(dá)，同時(shí)下調(diào)CD51、CD27、CXCR3[47,53]。CD49b可表征NK細(xì)胞的成熟狀態(tài)，iNK細(xì)胞表型定義為L(zhǎng)in-CD49b-NK1.1+CD122+，mNK細(xì)胞表型定義為L(zhǎng)in-CD49b+NK1.1+CD122+[26]。此外，CD27和CD11b也能劃分不同成熟階段的NK細(xì)胞[54]。

2.2參與調(diào)控LrNK細(xì)胞發(fā)育分化的轉(zhuǎn)錄因子 LrNK細(xì)胞和cNK細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程受到不同組合轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控(圖1)[55]。NK細(xì)胞高表達(dá)Nfil3(E4bp4)，其作用于IL-15信號(hào)下游，與NK細(xì)胞發(fā)育分化密切相關(guān)[56,57]。Nfil3在NK細(xì)胞發(fā)育早期發(fā)揮關(guān)鍵作用，調(diào)控Eomes、Id2多種轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)[58-60]。特異性敲除NKp46+NK細(xì)胞的Nfil3并不影響NK細(xì)胞的存活與功能，說(shuō)明NK細(xì)胞的晚期成熟不完全依賴Nfil3[61]。Nfil3缺陷導(dǎo)致cNK細(xì)胞幾乎缺失，而包括LrNK細(xì)胞在內(nèi)的特定組織trNK細(xì)胞所受影響較小，說(shuō)明cNK細(xì)胞更加依賴Nfil3[7,11]。此外，轉(zhuǎn)錄因子Tox、Ets1、Tcf-1對(duì)NK細(xì)胞發(fā)育早期階段也很重要[43,44,62,63]。

圖1 小鼠ILC的發(fā)育路徑Fig.1 Development of innate lymphoid cells(ILCs)in miceNote: HSCs differentiate into a a series of developmental intermediates，which finally give rise to different ILC subsets.Downstream of HSCs，CLPs further differentiate into CILPs that can generate NKPs and CHILPs under the regulation of different transcriptional factors.NKPs exclusively produce cNK cells，while CHILPs differentiate into LTi cells via the LTi progenitor(LTiP)stage，or differentiate into ILCPs that possess ILC1，ILC2 and ILC3 potential.Nfil3(nuclear factor IL-3 induced),Id2(inhibitor of DNA binding 2),Tox(thymocyte selection-associated high mobility group box protein),Tcf-1(T cell factor 1),Ets1(avian erythroblastosis virus E26 homolog-1),Gata3(GATA binding protein 3),PLZF(promyelocytic leukemia zinc finger),T-bet(T-box transcription factor),Eomes(Eomesodermin),Rorα(RAR-related orphan receptor α),Rorγt(RAR-related orphan receptor γt),Ahr(Aryl hydrocarbon receptor)

ILCs各亞群的發(fā)育都受到Id2的調(diào)控作用，其參與調(diào)控CILP、CHILP、NKP的產(chǎn)生[64,65]。表達(dá)Id2、Gata3的CHILP具有發(fā)育成為L(zhǎng)rNK細(xì)胞和其他ILCs以及LTi細(xì)胞的潛能，但不能發(fā)育成為cNK細(xì)胞[65,66]。PLZF是Id2的潛在靶基因，PD-1+PLZF+CHILP進(jìn)一步分化產(chǎn)生ILCs，LrNK細(xì)胞和黏膜ILC1s依賴T-bet的調(diào)控并分泌Th1型細(xì)胞因子IFN-γ，由于它們的發(fā)育路徑十分相近，因此LrNK細(xì)胞也被稱為肝臟ILC1s[11,67,68]。

T-bet和Eomes對(duì)NK細(xì)胞發(fā)育晚期階段十分關(guān)鍵，它們對(duì)NKP向成熟NK細(xì)胞分化是必需的，若二者同時(shí)缺失則無(wú)法產(chǎn)生正常的NK細(xì)胞，NKP數(shù)量不受影響而iNK和mNK細(xì)胞顯著減少。LrNK細(xì)胞嚴(yán)格依賴T-bet而非Eomes，T-bet缺陷導(dǎo)致LrNK細(xì)胞大幅減少[38,69]。此外，Hobit和Blimp1參與調(diào)控具有組織駐留特性的淋巴細(xì)胞的發(fā)育，Hobit缺陷導(dǎo)致LrNK細(xì)胞顯著減少而對(duì)cNK細(xì)胞幾乎無(wú)影響[70-72]。

3 影響LrNK細(xì)胞的微環(huán)境因素

微環(huán)境的外源性因子能誘導(dǎo)NK細(xì)胞表型或功能發(fā)生改變，如直接影響NK細(xì)胞的活化、效應(yīng)分子的表達(dá)及細(xì)胞毒效應(yīng)。IL-2和IL-15在NK細(xì)胞發(fā)育、增殖和活化中發(fā)揮重要作用[73]。IL-12和IL-18促進(jìn)NK細(xì)胞表達(dá)IFN-γ和TNF-α，NK細(xì)胞在IL-12/15/18協(xié)同刺激可迅速活化并發(fā)揮強(qiáng)大的細(xì)胞毒效應(yīng)，在二次刺激時(shí)相對(duì)初次接受刺激的NK細(xì)胞具有更強(qiáng)大的功能效應(yīng)。因此，使用IL-12/15/18協(xié)同刺激預(yù)先活化NK細(xì)胞也被視作癌癥治療的新思路[74]。此外，LrNK細(xì)胞與cNK細(xì)胞都依賴IL-15而非IL-7，IL-7缺陷使ILC2、ILC3大量減少但I(xiàn)LC1和cNK細(xì)胞基本不受影響，IL-15缺陷則導(dǎo)致相反結(jié)果，因此，對(duì)IL-15的依賴性是區(qū)分group 1 ILCs與其他ILCs的重要依據(jù)之一[38,46]。

已有研究證實(shí)，NK細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中具有可塑性，CD49a-CD49b+Eomes+cNK細(xì)胞在TGF-β信號(hào)誘導(dǎo)下轉(zhuǎn)變?yōu)橹虚g階段CD49a+CD49b+Eomes+ILC1(intILC1)和CD49a+CD49b-Eomesint ILC1，其上調(diào)表達(dá)抑制性受體CTLA-4、LAG3及NKG2A和促血管生成相關(guān)基因PSGF-AB，并且分泌大量TNF-α和GM-CSF，cNK細(xì)胞的數(shù)量和功能都顯著下降，最終導(dǎo)致腫瘤逃脫固有免疫系統(tǒng)的監(jiān)視。但腫瘤ILC1胞內(nèi)TGF-β受體下游經(jīng)典信號(hào)通路的活性并未增強(qiáng)，可能是非經(jīng)典的TGF-β信號(hào)誘導(dǎo)NK細(xì)胞轉(zhuǎn)變，如SMAD4表達(dá)被抑制所導(dǎo)致的非經(jīng)典的TGF-β信號(hào)誘導(dǎo)NK細(xì)胞向ILC1轉(zhuǎn)化[75-77]。與依賴TGF-β信號(hào)的腫瘤ILC1類似，TGF-β對(duì)于維持唾液腺中CD49a+ILC1的表型及存活十分重要[15]。另外，TGF-β影響NK細(xì)胞內(nèi)DAP12和 mTOR的活性，使NK細(xì)胞抗腫瘤能力下降[78-80]。以上研究提示TGF-β在NK細(xì)胞的可塑性和功能方面具有重要影響。

IFN-γ既是NK細(xì)胞的重要效應(yīng)分子，也能影響其發(fā)育和功能，IFN-γ缺陷小鼠肝臟的NK細(xì)胞顯著減少，且無(wú)法正常應(yīng)答PolyI:C的刺激[81]。而脾臟等其他臟器NK細(xì)胞數(shù)量不受影響，提示IFN-γ信號(hào)可能主要影響LrNK細(xì)胞而非cNK細(xì)胞。Ahr在小鼠LrNK細(xì)胞和人組織駐留的CD56brightNK細(xì)胞內(nèi)組成性高表達(dá)，Ahr-/-小鼠的LrNK細(xì)胞比例和數(shù)量顯著下降，Ahr缺陷使LrNK細(xì)胞快速擴(kuò)增、耗竭并凋亡，說(shuō)明LrNK細(xì)胞內(nèi)源性依賴Ahr，該依賴性可能與肝臟雙重血供及其微環(huán)境相關(guān)[82,83]。穩(wěn)態(tài)下的Ahr與分子伴侶結(jié)合形成復(fù)合物游離胞漿之中，當(dāng)其結(jié)合細(xì)胞內(nèi)源性或外源性配體后轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核中調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄。Ahr外源性配體多是來(lái)自環(huán)境中的食物小分子和微生物代謝物，如黃豆來(lái)源的異黃酮、十字花科蔬菜來(lái)源的異硫氰酸鹽、弓形蟲(chóng)催化產(chǎn)生的脂氧素A4或由莽草酸途徑合成的芳香族化合物等[84,85]。因此，肝臟門(mén)靜脈血液中含有大量Ahr的潛在配體，LrNK細(xì)胞內(nèi)Ahr易被活化，但目前尚不清楚該配體的具體來(lái)源和組成。

4 LrNK細(xì)胞的個(gè)體發(fā)生

骨髓造血干細(xì)胞是成年個(gè)體造血的主要來(lái)源，而胚胎發(fā)育期間主要依靠卵黃囊(yolk sac，YS)、主動(dòng)脈-性腺-中腎(aorta-gonad-mesonephros，AGM)區(qū)域和胎肝(fetal Liver，F(xiàn)L)發(fā)揮造血功能，直至個(gè)體出生后才逐漸被骨髓代替為主要的造血器官[86,87](圖2)。卵黃囊較早發(fā)揮造血功能，E7.0(embryo，7.0)天在小鼠胚胎卵黃囊最早出現(xiàn)造血祖細(xì)胞，包括原始紅系祖細(xì)胞和巨核巨噬前體細(xì)胞[88,89]。E8.25天卵黃囊出現(xiàn)紅系髓系祖細(xì)胞(erythromyel-oid progenitors，EMPs)和淋巴系髓系祖細(xì)胞(lympho-myeloid progenitors，LMPs)，同時(shí)胚胎心臟開(kāi)始跳動(dòng)，卵黃囊周圍發(fā)生血管重塑使造血祖細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)并在E9.5天到達(dá)胎肝[90,91]。另外，E8.5天在主動(dòng)脈旁胚臟壁(Para-aortic splanchnopleure，P-Sp)和AGM區(qū)域最早出現(xiàn)HSC及其前體，于 E10.5天到達(dá)胎肝并進(jìn)一步分化為pre-HSC(pre-hematopoietic stem cells，pre-HSCs)和mHSC(mature hematopoietic stem cells，mHSCs)[92]。因此，卵黃囊造血系統(tǒng)對(duì)于胚胎早期生長(zhǎng)至關(guān)重要[93]。胎肝于E11.5天開(kāi)始成為主要的造血部位，多種造血祖細(xì)胞快速分化成熟并大量擴(kuò)增，而脾臟和骨髓則分別在E13天和E15天發(fā)育成為造血器官，骨髓成為個(gè)體出生后的主要造血器官，但肝臟、脾臟仍保留一定造血潛能[94]。

圖2 小鼠NK細(xì)胞的個(gè)體發(fā)生Fig.2 Ontogeny of NK cells in miceNote: Embryonic yolk sac(YS)is the initial site of hematopoiesis during ontogeny.Hematopoietic progenitors(HP)and erythromyeloid pro-genitors (EMP) first appear in the YS and migrate to fetal liver(FL).Then，HSC precursors from AGM migrate to the FL，which becomes the major site of hematopoiesis during fetal life.Mature NK cells(mNK)gradually emerge in the FL，spleen，peripheral blood and thymus at different time points.

目前認(rèn)為NK細(xì)胞都起源于造血干細(xì)胞，然而骨髓移植小鼠LrNK細(xì)胞的比例和數(shù)量低于正常小鼠，提示骨髓僅具有部分產(chǎn)生LrNK細(xì)胞的能力。將骨髓細(xì)胞和肝臟單個(gè)核細(xì)胞分別轉(zhuǎn)輸后都能維持受者鼠的存活，說(shuō)明肝臟單個(gè)核細(xì)胞中包含造血祖細(xì)胞。骨髓嵌合實(shí)驗(yàn)也證明肝臟可能具有LrNK細(xì)胞的直接前體細(xì)胞，而骨髓造血干細(xì)胞傾向分化為cNK細(xì)胞，以上發(fā)現(xiàn)提示LrNK細(xì)胞可能來(lái)源于胚胎時(shí)期便存在于肝臟中且能自我更新的造血祖細(xì)胞，肝臟微環(huán)境支持其存活[6]。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)組織駐留的巨噬細(xì)胞和肥大細(xì)胞起源于卵黃囊的EMP[95,96]。LrNK細(xì)胞是否也可能來(lái)自EMP而獨(dú)立于骨髓造血系統(tǒng)之外？還需進(jìn)行深入研究。

NK細(xì)胞在胎肝中的發(fā)育早于骨髓和外周。胎肝于E13.5天開(kāi)始出現(xiàn)NKP(Lin-CD122+NK1.1+CD49b-)，而E14.5天外周血最早出現(xiàn)NKP并在E18.5天才逐漸增多。胎肝中的iNK細(xì)胞和mNK細(xì)胞分別在E14.5天和E15.5天出現(xiàn)，并在E16.5天出現(xiàn)具有殺傷功能的NK細(xì)胞，這一發(fā)育過(guò)程早于外周，說(shuō)明最早在胎肝出現(xiàn)NK譜系并通過(guò)血液循環(huán)遷往其他部位[51]。

5 總結(jié)與展望

近十年來(lái)，關(guān)于NK細(xì)胞的區(qū)域免疫學(xué)特性研究越來(lái)越多。小鼠CD49a+CD49b-LrNK細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)為固有免疫研究打開(kāi)新的篇章，非淋巴組織特有的ILCs逐漸受到關(guān)注[6,7,97]。LrNK細(xì)胞具有潛在的殺傷能力，并且分泌大量IFN-γ、TNF-α和GM-CSF等炎癥細(xì)胞因子調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答[11]。人肝臟中也存在與外周血NK細(xì)胞顯著不同的NK細(xì)胞亞群，但人LrNK細(xì)胞的表型界定仍存在爭(zhēng)議[35]。本文討論了起源于HSC的多種固有淋巴細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程，包括cNK細(xì)胞、LrNK細(xì)胞和其他ILCs[40]。LrNK細(xì)胞與cNK細(xì)胞在發(fā)育分化和轉(zhuǎn)錄調(diào)控上存在顯著差異，它們具有不同的發(fā)育路徑并受不同組合轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，其上游祖細(xì)胞分別是 CHILP和NKP，LrNK細(xì)胞依賴PLZF、Hobit、T-bet，而cNK細(xì)胞需要Nfil3、Ets1、Eomes[38,69]。微環(huán)境因素也對(duì)NK細(xì)胞產(chǎn)生影響，如TGF-β誘導(dǎo)cNK細(xì)胞向ILC1轉(zhuǎn)化。LrNK細(xì)胞和cNK細(xì)胞的個(gè)體發(fā)生過(guò)程存在差異，胚胎和新生小鼠肝臟NK細(xì)胞絕大部分為L(zhǎng)rNK細(xì)胞，個(gè)體出生后cNK細(xì)胞才逐漸增多[26]。

在NK細(xì)胞發(fā)育分化過(guò)程中，pre-NKP和rNKP部分表達(dá)PLZF，提示NKP與ILCP分化路徑之間可能存在某一階段的重疊[98]，NKP是否也能分化為L(zhǎng)rNK細(xì)胞？組織微環(huán)境與NK細(xì)胞的發(fā)育和塑造密切相關(guān)，目前還不清楚在肝臟微環(huán)境中對(duì)LrNK細(xì)胞發(fā)育分化中起關(guān)鍵作用的因素[24,76,81,82]。此外，LrNK細(xì)胞和cNK細(xì)胞的起源仍存在疑問(wèn)，盡管已經(jīng)證實(shí)成年小鼠肝臟中存在自我維持并更新的造血祖細(xì)胞，其可能直接分化成為L(zhǎng)rNK細(xì)胞，但我們對(duì)其知之甚少[6]。胚胎期卵黃囊造血系統(tǒng)支持胚胎的存活并發(fā)揮早期造血功能，皮膚、肺臟和肝臟駐留的巨噬細(xì)胞以及脂肪組織、胸膜腔內(nèi)駐留的肥大細(xì)胞都起源于卵黃囊的EMP，那么同樣具有駐留特性的LrNK細(xì)胞是否也可能起源于胚胎發(fā)育早期的造血祖細(xì)胞而獨(dú)立于骨髓造血系統(tǒng)之外？關(guān)于LrNK細(xì)胞的起源需進(jìn)一步深入探究。