趙文彬 ，鐘一治 ，王大鵬 ，陸專靈 ，鄭惠芳

（1.廣西大學，廣西 南寧 530004；2.廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)科學研究院，廣西 南寧 530021；3.南寧研樂上生物技術有限公司，廣西 南寧 530004）

克氏原螯蝦俗稱小龍蝦、淡水龍蝦，屬于甲殼綱，十足目，蝲蛄科，螯蝦亞科和原螯蝦屬[1]。原產(chǎn)于美國，后傳入日本，在第2次世界大戰(zhàn)期間由日本傳入中國，開始在南京一帶繁殖[2]。廣西的克氏原螯蝦養(yǎng)殖開始于2016年[3]，最先在南寧市和柳州市等地由企業(yè)引進試養(yǎng)，來賓市部分地區(qū)于2017年也開始了對克氏原螯蝦的養(yǎng)殖。由于來賓地區(qū)氣候[4]、地理環(huán)境與湖北等克氏原螯蝦主產(chǎn)地有較大的差距，為了解克氏原螯蝦在來賓地區(qū)的繁殖發(fā)育情況，創(chuàng)造更適宜當?shù)氐酿B(yǎng)殖模式，對來賓地區(qū)克氏原螯蝦的卵巢發(fā)育時期進行了研究。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用克氏原螯蝦的養(yǎng)殖地點為來賓市五山鎮(zhèn)養(yǎng)殖基地，于2019年4月下旬引體質(zhì)量為20 g左右的種蝦放入新建蝦田中進行養(yǎng)殖，按照稻蝦綜合種養(yǎng)模式[5]養(yǎng)殖，于2019年5—8月每月進行1次樣品采集，用地籠捕撈，從3個獨立的蝦田中分別采集10個樣品，每次共采集樣品30個，共計4次。

1.2 試驗方法

對采集的克氏原螯蝦進行體指標測量，包括體長、頭胸甲長、鉗長、臂長及體質(zhì)量。

克氏原螯蝦卵巢發(fā)育時期可以從性腺的外觀顏色進行判斷[6]，在采集過程中挑選出典型時期的卵巢，裝到盛有4%多聚甲醛的2 mL EP管中，放入4℃冰箱保存，用于性腺切片制作以便判斷卵巢發(fā)育時期。采用包埋法進行切片制作，將保存的卵巢切成約長×寬×高為 0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm[2]大小，經(jīng)洗滌、脫水、透明、浸蠟包埋和切片，HE染色后，用中性樹膠封片，組織切片在Nikon顯微鏡下觀察分析并拍照。

2 結(jié)果

2.1 卵巢外觀形態(tài)分類特征

克氏原螯蝦的卵巢發(fā)育時期可以直接從性腺的外觀形態(tài)和顏色進行判斷，通過解剖可以快速確定其發(fā)育時期，根據(jù)李勝等[7]對克氏原螯蝦卵巢發(fā)育時期的研究，該次試驗按照卵巢的外觀形態(tài)將其分為 I期、II期、III期和 IV 期（表 1）（圖 1～圖 4）。

2.2 卵巢時期分布情況

根據(jù)5—8月每月下旬對克氏原螯蝦體指標的測量及卵巢發(fā)育時期的鑒定，對測量和鑒定結(jié)果進行匯總（表2）。

表1 克氏原螯蝦的卵巢發(fā)育分期

表2 克氏原螯蝦5—8月外觀測量數(shù)據(jù)及卵巢發(fā)育情況

從表2可以看出，隨著養(yǎng)殖時間的推移，克氏原螯蝦的各項外觀指標具有明顯的變化，卵巢的發(fā)育從5月下旬開始，直到6月下旬其卵巢發(fā)育緩慢，卵巢發(fā)育時期以I期為主，有部分發(fā)育到II期；7月開始卵巢快速發(fā)育，發(fā)育呈現(xiàn)不同步性，開始出現(xiàn)IV期成熟卵巢，在8月已有大量的IV期成熟卵巢，9月中旬在基地的觀察中發(fā)現(xiàn)已有大量的抱卵蝦。

2.3 克氏原螯蝦卵巢發(fā)育時期組織特征

對克氏原螯蝦外觀顏色較為典型的卵巢進行切片觀察（圖 5～圖 8），對 I期、II期、III期和 IV 期卵巢進行組織學方面的特點研究（表3），與戴穎等[8]對武漢地區(qū)的克氏原螯蝦性腺切片的研究結(jié)果基本一致。

3 討論

來賓地區(qū)克氏原螯蝦4月底投放的20 g左右種蝦在5月下旬其卵巢已經(jīng)開始發(fā)育，基本處于I期，卵巢細小為透明或者白色，卵粒為小米粒狀，切片組織結(jié)構觀察卵細胞直徑為100～200 μm，細胞近似圓形，細胞質(zhì)中的卵黃物質(zhì)含量很少，因此沒有被伊紅染成紅色，而被蘇木精染成藍色。6月卵巢發(fā)育緩慢，依然以I期卵巢為主，部分可以發(fā)育到II期，II期卵巢為淡黃色或黃色，卵巢相較于I期有所增大并向后延伸，卵粒明顯，組織切片觀察到卵細胞直徑為200～500 μm，細胞近似圓形或橢圓形，細胞質(zhì)增多，質(zhì)內(nèi)卵黃物質(zhì)開始出現(xiàn)，能被伊紅染成紅色，不過還是能沾染蘇木精變微藍。7月下旬卵巢發(fā)育不同步性明顯，III期、IV期卵巢開始出現(xiàn)，4個時期的卵巢同時存在，卵巢發(fā)育迅速，III期卵巢顏色為深橙色或棕色，卵巢進一步增大并繼續(xù)向后延伸，卵粒變大明顯，卵直徑在 500～1 000 μm，卵細胞和細胞核明顯增大，卵細胞質(zhì)中卵黃物質(zhì)明顯增多，細胞質(zhì)被伊紅染成明顯的紅色。IV期卵巢顏色為褐色或黑色，卵巢極度膨脹，卵巢被膜很薄且易破，卵細胞呈游離狀態(tài)，隨時可以排卵，切片下觀察其卵細胞直徑＞1 000 μm，細胞質(zhì)中有大量卵黃物質(zhì)，觀察到有能被伊紅染成紅色的大塊顆粒，卵細胞之間已分離。8月下旬，卵巢發(fā)育迅速，大部分已經(jīng)發(fā)育到IV期，多數(shù)克氏原螯蝦已經(jīng)具備排卵的能力，開始進入繁殖的高峰期。9月初已經(jīng)開始出現(xiàn)抱卵蝦，至中旬開始大規(guī)模抱卵。

表3 克氏原螯蝦的卵巢發(fā)育分期組織特征

來賓地區(qū)屬亞熱帶氣候，降水充沛、日照充足，雨熱同季，克氏原螯蝦卵巢整體發(fā)育時期相較于北方要提前1～2個月。對其體長，頭胸甲長、體重的測量與卵巢發(fā)育進行比較，沒有發(fā)現(xiàn)其存在明顯相關性。卵巢的發(fā)育與氣候和時間有很大的關系，5—6月卵巢發(fā)育緩慢，但體指標增長明顯，7—8月卵巢發(fā)育迅速，8月下旬已有大量成熟卵巢，但其體指標增長不如5—6月明顯，且體指標大的蝦其性腺發(fā)育也未必快于體指標小的蝦，這與朱端亞等[9]的研究相符合。

來賓地區(qū)克氏原螯蝦養(yǎng)殖剛剛起步，可以利用氣候優(yōu)勢，合理規(guī)劃養(yǎng)殖周期，通過冬閑田養(yǎng)殖模式開發(fā)，解決克氏原螯蝦上市過于集中的問題，給當?shù)仞B(yǎng)殖戶帶來良好的收益。