王 偉， 王 斌， 于 亮， 王偉偉， 曹平平， 陸 莉， 王奉芝， 鈕力亞

(1.河北省農(nóng)作物耐鹽堿評價與遺傳改良重點實驗室/滄州市農(nóng)林科學(xué)院， 河北 滄州 061001；2.東平縣老湖鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)綜合服務(wù)隊， 山東 泰安 271511)

小麥在全球的種植面積廣泛，在我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位。誘變育種是小麥新品種選育和種質(zhì)資源創(chuàng)新的重要手段。化學(xué)誘變是小麥遺傳改良的重要途徑之一[1]。疊氮化鈉(NaN3)是一種高效低毒的植物化學(xué)誘變劑，其已在小麥[2-3]、玉米[4]、水稻[5]、大麥[6-7]，大豆[8]等農(nóng)作物上得以應(yīng)用。另外，張希太等[9-11]研究了小麥疊氮化鈉誘變后代在株高、芒型、穗型等的變異特征，并從分子水平證明了疊氮化鈉對小麥的誘變效果。但鮮有應(yīng)用疊氮化鈉構(gòu)建小麥突變體庫方面的研究報道。

在小麥育種中對目標(biāo)性狀的選擇，常規(guī)育種手段易受環(huán)境條件和育種者主觀經(jīng)驗的影響，而且育種周期長、效率低，但其操作方法簡單、性狀選擇全面，目前仍是小麥育成品種的主要方法[12]。近年來，隨著高通量測序技術(shù)的發(fā)展，基于小麥基因組開發(fā)的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)和插入缺失(insertion-deletion，InDels)等標(biāo)記被廣泛用于遺傳圖譜的構(gòu)建、基因的精細(xì)定位、關(guān)聯(lián)分析等研究[13-14]。由LGC公司(Laboratory of the Government Chemist)研發(fā)的競爭性等位基因特異性PCR技術(shù)(Kompetitive Allele Specific PCR，KASP)是一項靈活、經(jīng)濟、準(zhǔn)確的SNP檢測方法，逐漸替代了傳統(tǒng)的高通量測序，在SNP分型研究中發(fā)揮重要作用[15]。KASP標(biāo)記有利于篩選出控制小麥有利性狀的基因，并指導(dǎo)后續(xù)品種改良以及進行基因驗證。滄麥6005是滄州市農(nóng)林科學(xué)院育成的1個抗旱耐鹽堿的囯審小麥品種，在前期的研究中已培養(yǎng)出73個疊氮化鈉誘變的突變家系，但是仍然不清楚這些品系重要性狀功能基因的遺傳組成。本研究旨在利用已發(fā)表的小麥重要農(nóng)藝性狀功能基因的KASP標(biāo)記，對73份滄麥6005疊氮化鈉誘變家系進行單倍型檢測，了解這些品系重要性狀功能基因的組成，可以在一定程度上了解該群體的遺傳特性，為探討提高小麥分子標(biāo)記輔助育種效率的策略，準(zhǔn)確評價育種材料的利用價值提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為滄麥6005及其疊氮化鈉誘變?nèi)后w，共74個。2017年10月，種于滄州市農(nóng)林科學(xué)院前營試驗站。隨機區(qū)組試驗設(shè)計，2次重復(fù)。田間正常管理，2018年6月收獲。

1.2 試驗方法

注：紅色表示HEX基因型；藍(lán)色表示FAM基因型；黑色點為空白對照。A為Rht-B1基因的KASP標(biāo)記Rht-B1_SNP；B為TaMFT-A1基因的KASP標(biāo)記TaMFT_721J；C為Dreb-B1基因的KASP標(biāo)記Dreb_SNP；D為TaMFT-A1基因的KASP標(biāo)記TaMFT_1617R。圖1 KASP標(biāo)記的散點聚類圖

在小麥返青期，進行田間取樣。將葉片放入加有鋼珠的2.0 mL的Eppendorf管中，每個材料進行2次重復(fù)。將樣品液氮速凍后，在研磨機上研磨成粉狀。利用植物基因組DNA提取試劑盒進行DNA提取。利用Nanodrop One超微量分子分光光度計進行DNA質(zhì)量檢測，標(biāo)準(zhǔn)為OD260/OD280值介于1.8～2.2，OD260/OD230值大于1.0。對質(zhì)檢合格的樣本進行DNA稀釋，濃度范圍為5～50 ng。

根據(jù)文獻(xiàn)[16]，由中玉金標(biāo)記生物技術(shù)股份有限公司合成株高、抗葉銹病、抗赤霉病、抗穗發(fā)芽和品質(zhì)相關(guān)基因等的KASP標(biāo)記引物(表3)。FAM-primer 5′末端連接1個熒光基團FAM (5′-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3′)，HEX-primer 5′末端連接1個熒光基團HEX (5′-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3′)。利用KASP 5000 V 4.0 2×MasterMix (LGC公司，英國)進行PCR擴增。PCR反應(yīng)體系為10μL，包括4.78μL DNA (5～50 ng·μL-1)，5μL KASP 5000 V 4.0 2×MasterMix，0.14μL KASP Assay Mix，0.08μL Mg+。KASP Assay Mix是由3條引物的稀釋獲得：先將引物稀釋成100μmol·L-1，再按FAM-primer∶HEX-primer∶Common primer∶ddH2O=12∶12∶30∶46的比例混合。PCR反應(yīng)在Bio-Rad CFX 96 PCR儀上進行。每次反應(yīng)設(shè)置4個空白對照組(NTC)。PCR反應(yīng)為降落PCR，反應(yīng)程序為：94 ℃熱處理15 min；94 ℃ 20 s, 61～55 ℃ 60 s (每個循環(huán)下降0.6 ℃)，10個循環(huán)；94 ℃ 20 s，55 ℃ 60 s，26個循環(huán)；4 ℃避光保存。待KASP檢測PCR反應(yīng)程序結(jié)束后，將384孔板或Tape分別放置到Omega熒光信號閱讀儀和Araya上將熒光信號轉(zhuǎn)變?yōu)榭煞治龅臄?shù)值，然后用LGC公司提供的Kraken TM分析軟件進行基因型分析。

2 結(jié)果與分析

利用KASP標(biāo)記檢測技術(shù)對滄麥6005及其疊氮化鈉誘變?nèi)后w的株高、抗葉銹病、抗赤霉病、抗穗發(fā)芽和加工品質(zhì)等性狀相關(guān)的基因進行了分析。部分聚類結(jié)果見圖1。在該群體中，此4個基因的分布均聚合為兩類，表示2種不同的純合單倍型，而且界限清楚、明確。綜合結(jié)果表明，利用KASP標(biāo)記檢測技術(shù)可以有效地對上述基因進行分型，并將同一基因的不同單倍型進行聚類。另外，本試驗所用小麥材料主要是滄麥6005疊氮化鈉誘變的高代品系，因此，相關(guān)研究結(jié)果一定程度上可以從分子水平驗證疊氮化鈉對滄麥6005的化學(xué)誘變效果。

2.1 株高基因

73份疊氮化鈉誘變家系中有6種株高基因型組合，分別是Rht-B1a+197bp+Rht-D1a(1份)、Rht-B1a+197bp+Rht-D1b(39份)、Rht-B1a+Rht-D1a(1份)、Rht-B1a+Rht-D1b(13份)、Rht-B1b+Rht-D1a(13份)和Rht-B1b+Rht-D1b(3份)，含有Rht-D1b的家系占全部突變家系的75.34%(表1)。滄麥6005的株高基因型為Rht-B1b+Rht-D1a(表2)。說明在該群體中Rht-D1b基因可能是由于疊氮化鈉誘變而產(chǎn)生的矮稈基因。

2.2 抗病基因

共檢測了3個抗病基因，包括抗葉銹病基因(Lr34和Lr68)和抗赤霉病基因Fhb1。結(jié)果顯示，抗葉銹病基因Lr68在此誘變?nèi)后w中有7份，占群體的9.60%；該群體不含有抗葉銹病基因Lr34；抗赤霉病基因Fhb1在此誘變?nèi)后w中檢測到5份，占比6.80%(表1)。滄麥6005的KASP標(biāo)記檢測結(jié)果表明，野生型滄麥6005不含有抗葉銹病基因Lr34和Lr68，亦不含有抗赤霉病基因Fhb1(表2)，而在其疊氮化鈉誘變?nèi)后w中，出現(xiàn)了抗葉銹病基因Lr68和抗赤霉病基因Fhb1的類型，這是由于疊氮化鈉誘變的結(jié)果。說明在小麥誘變育種中通過疊氮化鈉誘變方法，可以獲得具有抗葉銹病基因和抗赤霉病基因的材料。

表1 滄麥6005疊氮化鈉誘變?nèi)后w重要性狀基因的KASP標(biāo)記檢測

性狀基因單倍型數(shù)目頻率/%株高Rht-B1Rht-B1a+197bp+Rht-D1a11.4Rht-D1Rht-B1a+197bp+Rht-D1b3955.7Rht-B1a+Rht-D1a11.4Rht-B1a+Rht-D1b1318.6Rht-B1b+Rht-D1a1318.6Rht-B1b+Rht-D1b34.3葉銹病Lr34Lr34+00.0Lr34-73100.0Lr68Lr68+79.6Lr68-6690.4赤霉病Fhb1Fhb1+56.8Fhb1-6589.0春化Vrn-A1vrn-A173100.0Vrn-A100.0Vrn-A1bVrn-A1b73100.0Vrn-A1a00.0Vrn-B1Null73100.0Vrn-B1b00.0穗發(fā)芽TaSdr-B1TaSdr-B1a34.1TaSdr-B1b6893.2PHS1Rio Blanco type5375.3NW97S186 type1824.7TaMoc-A1Hap-H1621.9Hap-L5372.6TaMFT-A1Jagger-type1520.5Zen/2174-type2230.1CS-type3547.9品質(zhì)Glu-D12 + 12 or other2027.45 + 104561.6Glu-A1Ax1 or Ax2*1824.7Null5575.3抗旱性COMT-3B3Ba5575.33Bb1520.5Dreb-B1TaDREB-B1a2838.4TaDREB-B1b4460.3TaSST-4AA2a5271.2A2b2027.4早熟性TaELF3-B1Cadenza-type73100.0Wild-type00.0TaElf3-D1Savanah-type00.0Wild-type3649.3

注：Rht-B1a和Rht-D1a是野生型，Rht-B1b、Rht-B1a + 160和Rht-D1b是矮桿型；Jagger-type、Zen/2174-type、Hap-H、TaSdr-B1a和RioBlancotype為抗穗發(fā)芽類型，CS-type、Hap-L、TaSdr-B1b和NW97S4186type為易穗發(fā)芽類型；vrn-A1、Vrn-A1b、Null為冬性小麥類型；5+10和Ax1orAx2*為強筋型，2+12orother和Null為弱筋型；3Ba、TaDREB-B1a和A2a是抗旱類型，3Bb、TaDREB-B1b和A2b是不抗旱類型；對于TaELF3-B11，Cadenza-type為晚開花類型，Wild-type為早開花類型，對于TaElf3-D1，Savanah-type為早開花類型，Wild-type為晚開花類型；+和-分別表示含有或不含有該基因。下同。

2.3 春化基因

共檢測了3個春化基因，包括Vrn-A1、Vrn-A1b和Vrn-B1。在春化基因Vrn-A1、Vrn-A1b和Vrn-B1中，所有的突變材料的單倍型分別為vrn-A1、Vrn-A1b和Null，均為冬性(表1)，這與野生型滄麥6005的KASP檢測結(jié)果一致(表2)。同時，滄麥6005及其誘變家系田間表現(xiàn)均為冬性小麥。

2.4 抗穗發(fā)芽基因

在抗穗發(fā)芽基因方面，共檢測了4個抗穗發(fā)芽的基因，分別為TaSdr-B1、PHS1、TaMoc-A1和TaMFT-A1。RioBlancotype和Hap-H是誘變家系中主要的抗穗發(fā)芽單倍型。有3份材料含TaSdr-B1基因的TaSdr-B1a抗穗發(fā)芽單倍型，占全部誘變材料的4.1%；有53份材料含有PHS1基因的RioBlancotype抗穗發(fā)芽單倍型，占全部供試材料的75.3%；有16份材料含有TaMoc-A1基因的Hap-H抗穗發(fā)芽單倍型，占全部供試材料的21.9%；在所有供試材料中含TaMFT-A1基因的Jagger-type和Zen/2174-type抗穗發(fā)芽單倍型的材料數(shù)分別為15份和22份，分別占全部供試材料的20.5%和30.1%(表1)。另外，在所有誘變家系中沒有出現(xiàn)同時聚合4個抗穗發(fā)芽單倍型的材料，但是同時聚合2個抗穗發(fā)芽單倍型的不少，比如SAM 46同時聚合TaSdr-B1基因的TaSdr-B1a抗穗發(fā)芽單倍型和TaMoc-A1基因的Hap-H抗穗發(fā)芽單倍型。這表明在常規(guī)手段進行綜合農(nóng)藝性狀選擇的基礎(chǔ)上，采用疊氮化鈉進行小麥育種，利用KASP標(biāo)記也可以選擇到具有多個優(yōu)良基因的后代材料。

2.5 品質(zhì)相關(guān)基因

共檢測了2個品質(zhì)相關(guān)基因Glu-D1和Glu-A1。有45份材料含有高分子量麥谷蛋白亞基5+10，占全部供試材料的61.6%；有18份材料含有Glu-A1基因的Ax1orAx2*強筋單倍型，占全部供試材料的24.7%(表1)。但是，沒有出現(xiàn)同時聚合這2種強筋單倍型的誘變材料。

2.6 抗旱相關(guān)基因

共檢測了3個與小麥抗旱性相關(guān)的基因，分別為COMT-3B、Dreb-B1和TaSST-4A。有55份材料含有COMT-3B基因的3Ba單倍型，占全部供試材料的75.3%；有28份材料含有Dreb-B1基因的TaDREB-B1a抗旱單倍型，占全部供試材料的38.4%；有52份材料含有TaSST-4A基因的A2a抗旱單倍型，占全部供試材料的71.2%(表1)。其中，COMT-3B基因可增加莖稈木質(zhì)素含量，可能與抗倒性相關(guān)。

表2 滄麥6005及其部分疊氮化鈉誘變?nèi)后wKASP標(biāo)記的基因分型

基因品系滄麥6005SAM8SAM27SAM30SAM33SAM36SAM42SAM43SAM44SAM56SAM57SAM58Rht-B1Rht-B1bRht-B1aRht-B1aRht-B1bRht-B1bRht-B1a+197 bpRht-B1a+197 bpRht-B1a+197 bpRht-B1a+197bpRht-B1bRht-B1bRht-B1bRht-D1Rht-D1aRht-D1bRht-D1aRht-D1aRht-D1aRht-D1bRht-D1bRht-D1bRht-D1bRht-D1aRht-D1aRht-D1aLr34------------Lr68-+----------Fhb1--+--+++----Glu-D12+12or other2+12or other2+12or other2+12or other2+12or other5+105+105+105+102+12or other2+12or other2+12or otherGlu-A1Ax1 or Ax2*Ax1 or Ax2*NullAx1 or Ax2*Ax1 or Ax2*NullNullNullNullAx1 or Ax2*Ax1 or Ax2*Ax1 or Ax2*Vrn-A1vrn-A1vrn-A1vrn-A1vrn-A1vrn-A1vrn-A1vrn-A1vrn-A1vrn-A1vrn-A1vrn-A1vrn-A1Vrn-A1bVrn-A1bVrn-A1bVrn-A1bVrn-A1bVrn-A1bVrn-A1bVrn-A1bVrn-A1bVrn-A1bVrn-A1bVrn-A1bVrn-A1bVrn-B1NullNullNullNullNullNullNullNullNullNullNullNullTaSdr-B1TaSdr-B1bTaSdr-B1bTaSdr-B1bTaSdr-B1bTaSdr-B1bTaSdr-B1bTaSdr-B1bTaSdr-B1bTaSdr-B1bTaSdr-B1bTaSdr-B1bTaSdr-B1bPHS1Rio Blanco typeRio Blanco typeRio Blanco typeRio Blanco typeRio Blanco typeNW97S186 typeNW97S186 typeNW97S186 typeNW97S186 typeRio Blanco typeRio Blanco typeRio Blanco typeTaMoc-A1Hap-LHap-LHap-LHap-LHap-LHap-LHap-LHap-LHap-LHap-LHap-LHap-LTaMFT-A1CS-typeJagger-typeCS-typeCS-typeCS-typeCS-typeCS-typeJagger-typeCS-typeJagger-typeZen/2174-typeZen/2174-typeTaELF3-B1Cadenza-typeCadenza-typeCadenza-typeCadenza-typeCadenza-typeCadenza-typeCadenza-typeCadenza-typeCadenza-typeCadenza-typeCadenza-typeCadenza-type3/TaElf3-D1Wild-typeWild-typeWild-typeWild-typeWild-typeWild-typeWild-typeWild-typeWild-typeWild-typeWild-typeWild-typeCOMT-3B3Ba3Ba3Ba3Ba3Ba3Ba3Ba3Ba3Bb3Bb3Bb3BbDreb-B1TaDREB-B1bTaDREB-B1aTaDREB-B1aTaDREB-B1bTaDREB-B1bTaDREB-B1aTaDREB-B1aTaDREB-B1aTaDREB-B1aTaDREB-B1aTaDREB-B1aTaDREB-B1aTaSST-4AA2bA2aA2aA2bA2bA2bA2bA2bA2aA2aA2aA2a

表3 本試驗部分KASP標(biāo)記

性狀基因引物名稱FAM primer(5'-3')HEX primer(5'-3')Common primer(5'-3')株高Rht-B1Rht-B1_SNPGAAGGTGACCAAGTTCATGCTCCCATGGCCATCTCCAGCTGGAAGGTCGGAGTCAACGGATTCCCATGGCCATCTCCAGCTATCGGGTACAAGGTGCGGGCGRht-D1Rht-D1_SNPGAAGGTGACCAAGTTCATGCTCATGGCCATCTCGAGCTGCTCGAAGGTCGGAGTCAACGGATTCATGGCCATCTCGAGCTGCTACGGGTACAAGGTGCGCGCC葉銹病Lr34Lr34_TCCINDGAAGGTGACCAAGTTCATGCTGGTATGCCATTTAACATAATCATGAAGAAGGTCGGAGTCAACGGATTGGTATGCCATTTAACATAATCATGATTACTATATGGGAGCAT-TATTTTTTTCCLr68Lr68-2GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCGTGTCTTGGACCTGAGCAATGAAGGTCGGAGTCAACGGATTCGTGTCTTGGACCTGAGCAACTGACCTGAGTCCCGTCAAGA赤霉病Fhb1UMN10_SNPGAAGGTGACCAAGTTCATGCTGAAT-TACTCATTTTTAGATTTGTCTACATACAGAAGGTCGGAGTCAACGGATTGAATTACTCATTTTTAGATTTGTCTACATACGGAAGTTCATGCCACGCATATGCTAGTA品質(zhì)Glu-D1Glu-D1d_SNPGAAGGTGACCAAGTTCATGCTATAGTATGAAACCTGCTGCGGAGGAAGGTCGGAGTCAACGGATTATAGTATGAAACCTGCTGCGGACTACTAAAAAGGTATTACCCAAGTGTAACTT穗發(fā)芽TaSdr-B1TaSdr-B1GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTCAGCAGACTTCGACTCGCAGAAGGTCGGAGTCAACGGATTTCAGCAGACTTCGACTCGCGAGGATCTCGTTGGCCTTGACGPHS1PHS1-666GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGTGAGTGTTATATGAAACTAATGATCCATTTGAAGGTCGGAGTCAACGGATTGTGAGTGTTATATGAAACTAATGATCCATTAACCGGGTGGAACAGATGCAACTA-AA早熟性TaElf3-D1TaBradi2g14790GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCCTTGTCTCCGTCCCTGGAAGGTCGGAGTCAACGGATTGACAGCTCCTCCCGAGTCGGTAATGTCTTCAGTGTTTTA春化Vrn-A1Vrn-A1_9K0001GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAGAGTTTTCCAAAAAGATAGATCAATG-TAAATGAAGGTCGGAGTCAACGGATT-GAGTTTTCCAAAAAGATAGATCAAT-GTAAACGTTAGTAGTGATGGTCCAATAATGCCAAA抗旱性COMT-3BCOMT3B_882_SNPGAAGGTGACCAAGTTCATGCTGTGCTCGTGGAGTGCATCCTGCCTGAAGGTCGGAGTCAACGGATTGTGCTCGTGGAGTGCATCCTGCCGCCTTAGGCGTCGCCTCCGGGTTCA

2.7 早熟性相關(guān)基因

共檢測了2個小麥早熟性相關(guān)基因，分別為TaELF3-B1和TaElf3-D1。所有的供試材料為TaELF3-B1基因的晚開花單倍型Cadenza-type；有36份材料含有TaElf3-D1的晚開花單倍型Wild-type，另外36個材料在該位點雜合(表1)。

綜上所述，在野生型滄麥6005基因型沒有的情況下，73份誘變后代中發(fā)現(xiàn)含抗赤霉病基因Fhb1的材料5份，含抗葉銹病基因Lr68的材料7份，含5+10優(yōu)質(zhì)亞基45份，含Rht-D1b矮桿基因55份。因此，對小麥疊氮化鈉誘變高代品系進行KASP標(biāo)記輔助選擇可作為一種重要的分子育種策略。

3 討 論

小麥誘變育種是利用物理、化學(xué)等因素，在人為創(chuàng)造的條件下，誘發(fā)小麥種子或植株產(chǎn)生基因突變，進而培育新種質(zhì)的方法[17-18]。在農(nóng)作物改良中，化學(xué)誘變是產(chǎn)生變異性狀的重要來源之一，是目前應(yīng)用較為廣泛的誘變育種技術(shù)[19]。疊氮化鈉是一種高效且無毒害作用的植物化學(xué)誘變劑，可使小麥突變材料的變異類型更加豐富。本研究表明，疊氮化鈉誘變可使滄麥6005產(chǎn)生矮稈基因、抗病基因以及優(yōu)質(zhì)基因等突變，這與Khan S等[20]，李明飛等[21]研究結(jié)果基本一致。利用疊氮化鈉進行化學(xué)誘變的方法是創(chuàng)造小麥新種質(zhì)、選育小麥新品種的有效途徑之一。

小麥?zhǔn)钱?dāng)今世界重要的糧食作物之一，矮稈基因是小麥高產(chǎn)育種的關(guān)鍵因素。在推廣小麥品種中應(yīng)用的Rht基因主要是Rht-B1、Rht-D1、Rht8[22-24]。Rht-B1和Rht-D1都是來自于日本的農(nóng)林10號[25]。在本研究中，Rht-D1b在供試材料中的分布頻率大于Rht-B1b，含有Rht-D1b的家系占全部突變家系的75.34%。而滄麥6005的株高基因型為Rht-B1b+Rht-D1a，說明在該群體中Rht-D1b基因可能是由于疊氮化鈉誘變而產(chǎn)生的。

截止2015年，正式登記命名的小麥葉銹抗性基因有73個[26]，其中Lr34為苗期抗性基因，但是在此疊氮化鈉誘變?nèi)后w中未檢測到抗葉銹病基因Lr34。Lr68為成株抗性基因[27]，此疊氮化鈉誘變?nèi)后w中檢測到含抗葉銹病基因Lr68的材料7份。目前已明確的小麥抗赤霉病基因只有7個，其中就包括Fhb1，F(xiàn)hb1來源于蘇麥3號，抗性最為穩(wěn)定[28]。此誘變?nèi)后w檢測到含抗赤霉病基因Fhb1的材料5份。另外，KASP標(biāo)記檢測結(jié)果顯示，野生型滄麥6005不含有抗葉銹病基因Lr68和抗赤霉病基因Fhb1，而誘變?nèi)后w出現(xiàn)了相應(yīng)的抗病材料，這肯定是疊氮化鈉誘變的結(jié)果。因此，疊氮化鈉誘變方法和KASP標(biāo)記輔助選擇結(jié)合起來，可以作為一種分子輔助育種的策略。

穗發(fā)芽對小麥的產(chǎn)量和品質(zhì)等方面均有影響，小麥穗發(fā)芽抗性易受基因型與環(huán)境因素的共同影響，其中籽粒本身的休眠特性和α-淀粉酶活性也與穗發(fā)芽聯(lián)系緊密[29-30]。本研究分析了4個抗穗發(fā)芽基因TaMFT-A1、PHS1、TaMoc-A1、TaSdr-B1在滄麥6005疊氮化鈉誘變?nèi)后w中的分布情況。其中，有53份材料含有PHS1基因的RioBlancotype抗穗發(fā)芽單倍型，其他3個基因的抗穗發(fā)芽單倍型亦均有分布。目前已知的抗穗發(fā)芽相關(guān)基因的遺傳效應(yīng)均很弱，聚合多個抗穗發(fā)芽基因，有利于拓寬抗譜，提高小麥的抗性[31-32]。因此，多基因聚合育種是小麥抗穗發(fā)芽育種的主要策略。

小麥優(yōu)質(zhì)谷蛋白亞基5+10被認(rèn)為是Glu-D1位點編碼的優(yōu)質(zhì)亞基，有利于制作面包[33-34]。在本研究中，有45份材料含有高分子量麥谷蛋白亞基5+10，有18份材料含有Glu-A1基因的Ax1orAx2*，它們可作為強筋小麥品系的候選材料。

隨著小麥以及相關(guān)近緣種屬基因組測序的完成，以及各種基因檢測技術(shù)的發(fā)展，分子標(biāo)記輔助選擇已經(jīng)成為小麥育種的重要手段之一。通過分子標(biāo)記檢測可以在小麥育種的過程中有效地選擇目的基因，減少育種中的篩選與鑒定的工作量，提高目的基因選擇的準(zhǔn)確度，并為加速小麥育種進程奠定了基礎(chǔ)。因此，對小麥疊氮化鈉誘變的高代品系進行KASP標(biāo)記輔助選擇可作為一種重要的分子育種策略。