郭永清，楊 鳳，趙宇飛，張小宇

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古包頭 014109）

硒在動(dòng)物體內(nèi)具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用，主要介導(dǎo)免疫刺激性作用，調(diào)節(jié)α和β亞基受體的表達(dá)，特別是T和B淋巴細(xì)胞（李冰心等，2018）。硒的抗炎作用依賴于其影響細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的能力和硒化合物清除活性氧的能力。硒補(bǔ)充劑有兩種形式：無(wú)機(jī)硒（如亞硒酸鈉）或有機(jī)硒（如硒代蛋氨酸），后者是酵母硒中硒的主要形式。硒代蛋氨酸不同于亞硒酸鹽，其在吸收過(guò)程中通過(guò)蛋氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制在腸道膜上進(jìn)行主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)，可以非特異性地整合到機(jī)體蛋白中（孟田田等，2017）。但無(wú)論來(lái)源如何，硒在被同化為硒代半胱氨酸并隨后并入硒蛋白前必須經(jīng)歷一個(gè)代謝轉(zhuǎn)換（徐巧林等，2017）。關(guān)于補(bǔ)充硒對(duì)血液學(xué)變量影響的研究結(jié)果很少，而且常常相互矛盾。本研究旨在研究酵母硒及相應(yīng)劑量的無(wú)機(jī)硒對(duì)成年馬血液系統(tǒng)、酶活性和血漿氧化狀態(tài)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理 將25匹（13.5±4.5）年的成熟馬根據(jù)體重隨機(jī)分為5組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1匹，分別飼喂對(duì)照組日糧（不添加硒）、0.2、0.3和 0.4 mg/kg酵母硒及 0.3 mg/kg亞硒酸鈉，試驗(yàn)共進(jìn)行112 d。日糧硒設(shè)計(jì)值與分析值結(jié)果見(jiàn)表1。每天早上對(duì)馬補(bǔ)充硒，硒補(bǔ)充劑以石粉為載體，每天為每匹馬提高6 g。

表1 日糧硒設(shè)計(jì)與分析值

1.2 樣品采集 分別于第 1、28、56、84 和 112 天早晨飼喂前對(duì)每匹馬靜脈穿刺采集血液樣本。立即將血液樣本放入冰浴中保存，直到采集后大約30 min內(nèi)進(jìn)行處理。

1.3 樣品分析 血液樣品一部分離心分離血漿，血漿用試劑盒測(cè)定相應(yīng)的生化指標(biāo)。一部分全血用于血液學(xué)指標(biāo)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS軟件進(jìn)行單因素方差分析，同時(shí)采用線性回歸研究酵母硒的劑量效應(yīng)。用多因素方差分析日糧處理及采血時(shí)間的交互效應(yīng)，采用Tukey法進(jìn)行多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同硒源和添加水平對(duì)馬血漿能量和蛋白代謝相關(guān)指標(biāo)的影響 由表2可知，飼料中添加亞硒酸鈉和不同水平的酵母硒對(duì)馬血漿葡萄糖、膽固醇、甘油三酯、尿素、肌酸酐、總蛋白和白蛋白濃度的影響均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表2 硒源和水平對(duì)馬血漿能量和蛋白代謝相關(guān)指標(biāo)的影響

2.2 不同硒源和添加水平對(duì)馬血漿礦物質(zhì)濃度、酶活及抗氧化標(biāo)記物含量的影響 由表3可知，對(duì)照組與各處理間馬臨床健康狀況無(wú)顯著差異（P＞ 0.05）。0.4 mg/kg酵 母 硒 和 0.3 mg/kg亞硒酸鈉組較對(duì)照組顯著提高了血漿鈉濃度（P＜0.05），且日糧處理與時(shí)間對(duì)血漿氯濃度的影響具有顯著交互作用（P＜0.05），但各處理對(duì)其他礦物質(zhì)濃度無(wú)顯著影響（P＞0.05）。此外，不同硒源和添加水平對(duì)大部分血漿酶活和抗氧化標(biāo)記物含量無(wú)顯著影響（P＞0.05）。但日糧添加0.3和0.4 mg/kg酵母硒較對(duì)照組和0.3 mg/kg亞硒酸鈉組顯著降低了血漿總抗氧化物水平（P＜0.05），同時(shí)隨著日糧酵母硒添加水平的升高，血漿總抗氧化物含量表現(xiàn)為顯著劑量-依賴效應(yīng)（P＜0.05）。日糧處理顯著影響血漿谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶活性（P＜0.05），其中對(duì)照組和0.2 mg/kg酵母硒組較0.3 mg/kg亞硒酸鈉組顯著提高了血漿谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶活性（P＜0.05）。

2.3 不同硒源和添加水平對(duì)馬血液學(xué)指標(biāo)的影響 由表4可知，0.3 mg/kg亞硒酸鈉組血液淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)最低（P＜0.05），而0.4 mg/kg酵母硒組中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值及中性粒細(xì)胞占比最低（P＜0.05）。0.4 mg/kg酵母硒組和0.3 mg/kg亞硒酸鈉組較對(duì)照組顯著提高了淋巴細(xì)胞占比（P＜0.05）。此外，對(duì)照組較酵母硒組顯著提高了紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（P＜0.05），但與亞硒酸鈉組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。且0.2 mg/kg酵母硒組紅細(xì)胞分布寬度最高（P ＜ 0.05）。

表3 硒源和水平對(duì)馬血漿礦物質(zhì)濃度、酶活及抗氧化狀態(tài)標(biāo)記物含量的影響

表4 硒源和水平對(duì)馬血液學(xué)指標(biāo)的影響

3 討論

硒蛋白參與的生理功能很多，如甲狀腺活性、肌肉代謝、抗氧化活性、免疫反應(yīng)和紅細(xì)胞穩(wěn)定性，主要是酶的重要組成部分（Surai，2006）。本研究中血漿肌酸酐值不受硒源和添加水平的影響，處于Amory等（2005）報(bào)道的參考范圍。炎癥狀態(tài)不受補(bǔ)充硒源或劑量的影響，這是由于血漿銅藍(lán)蛋白和結(jié)合珠蛋白濃度沒(méi)有顯著差異，這與Hanzawa等（2002）的研究結(jié)果一致。在酶活性中，只有谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶活性受到處理的影響顯著，此外，總膽紅素濃度不受處理的影響，表明肝膽未受損傷（Boone等，2005）。

日糧處理對(duì)肌肉細(xì)胞損傷相關(guān)酶活性無(wú)顯著影響可以用本研究的實(shí)驗(yàn)條件來(lái)解釋，本試驗(yàn)中馬只進(jìn)行輕微運(yùn)動(dòng)，并沒(méi)有導(dǎo)致任何肌肉細(xì)胞代謝標(biāo)志物的增加，避免了與細(xì)胞膜完整性相關(guān)酶活性的變化（Kozat，2007）。硒在保護(hù)細(xì)胞膜和細(xì)胞器免受氧化損傷方面的作用已得到很好證明（Surai，2006），正是這種功能幫助維持肌肉和血管的完整性。

馬運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激被認(rèn)為會(huì)加速肌肉疲勞和肌纖維損傷，導(dǎo)致不同動(dòng)物種類的運(yùn)動(dòng)耐受不良和表現(xiàn)不佳（Sen和 Packer，2000），硒營(yíng)養(yǎng)因其對(duì)運(yùn)動(dòng)耐受的影響而受到關(guān)注。Demoffarts等（2005）報(bào)道，給高強(qiáng)度訓(xùn)練的馬和在采血前一天參加比賽的馬長(zhǎng)期口服抗氧化劑可以提高親水性、親脂性和酶性抗氧化劑的血液容量，部分平衡由運(yùn)動(dòng)引起的氧化應(yīng)激。本研究中馬的活動(dòng)水平非常輕微，因此，在本研究實(shí)驗(yàn)條件并沒(méi)有太大的應(yīng)激來(lái)誘導(dǎo)可能的氧化損傷，導(dǎo)致不同硒源和添加劑量對(duì)相關(guān)標(biāo)記物水平無(wú)顯著影響。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，日糧硒的來(lái)源和濃度對(duì)肝膽炎癥狀態(tài)和反映細(xì)胞損傷的酶活性無(wú)顯著。隨著酵母硒添加量的增加，血漿總抗氧化物水平呈線性下降，說(shuō)明酵母硒在預(yù)防自由基形成和斷鏈抗氧化物質(zhì)方面具有改善作用。酵母硒對(duì)淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量的輕微影響表明其具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用。