馬薇

【關鍵詞】 瘧疾;實驗室檢測;調查研究

從2000年開始在，在全球范圍內各個醫(yī)院的配合下找到了控制瘧疾發(fā)病的方法，挽救了無數(shù)瘧疾疾病患者的生命。瘧疾傳播源一般包含蚊蟲叮咬和輸液兩種形式。輸血性瘧疾主要是指在人體內部輸送了含有瘧原蟲的全血或者成分血，在此之后感染了瘧原蟲。在改革開放深入進行和旅游業(yè)的持續(xù)發(fā)展下，輸血性瘧疾成為世界范圍內比較嚴峻的用血安全問題。伴隨到非洲、東南亞地區(qū)工作人數(shù)的增多，輸血性瘧疾疾病的發(fā)病人數(shù)不斷增多。國家衛(wèi)生組織由此開始進一步加強對 輸血性瘧病例的研究和分析。文章選擇我市一例輸血性瘧疾疾病患者作為基本研究對象，通過對該病例資料和病理學知識的調查，最終確定這個病例的傳染源。

1資料和方法

1.1病例基本資料

全面收集整理這例瘧疾疾病患者的發(fā)病、診斷和治療資料信息。

1.2流行病學調查分析

對這例患者開展必要的流行病學調查研究，調查研究涉及到的內容包含患者的居住環(huán)境、外出歷史、血液輸送歷史等。同時還需要對瘧疾可能性的傳播方式和傳染源進行尋根究底的調查研究。

1.3實驗試劑和基本儀器

在開展實驗操作中所需要應用的儀器設備如下所示：來自QIAGEM公司的患者血液DNA提取儀器;來自美國一公司的PCR反應混合物;來自上海生工生物公司的TBE緩沖液、瓊脂糖;來自美國Biotium公司的核酸燃料。

1.4實驗方法

第一，血涂片的鏡檢。在實驗操作的時候全面收集患者的骨髓、外周抗凝血、疑似瘧疾傳染源的供血者外周凝血涂制厚薄血片。第二，RDT檢測分析。按照有關說明書和血壓提供者的血液情況來開展相關檢測。在檢測的過程中稱取5μl 全血，將提取的血液垂直加入到檢測卡“加樣孔A”的內部，之后在“樣品孔B”的上方垂直滴注4滴裂解液，靜靜等待十五分鐘之后觀察患者的檢測結果。第三，分子生物學檢測。應用專業(yè)的全血DNA抽血試劑盒來提取患者的血樣，合成瘧原蟲特異屬性物質和特異性引物，同時開始瘧原蟲巢式的PCR檢測。

2結果

2.1流行病理學檢查

患者年齡為62歲，福建人2018年6月3日的時候在地區(qū)某醫(yī)院開展了髖關節(jié)置換手術，手術中輸送了800ml 的全血。在6月26日的時候患者出現(xiàn)了發(fā)熱的癥狀，之后到醫(yī)院就診，經過血涂片鏡檢查患者體內含有瘧原蟲。在經過細致檢查分析確診為三日瘧原蟲感染，伴隨膿毒血癥，且深入排查之后確定是在大量輸血之后感染的疾病。患者所輸?shù)?00ml血液來自于三名獻血者，兩名居民，一名留學生。這三名獻血者沒有家族性的瘧疾歷史。

2.2血涂片鏡檢查

在患者血涂片中鏡檢查發(fā)現(xiàn)典型的三日瘧原蟲菊花狀裂殖體，厚血膜中含有的瘧原蟲密度基本確定為4085/μl。

2.3RDT檢測

對患者的血樣開展BinaxNOW檢驗，檢驗結果顯示患者患有的是非惡性瘧原蟲。

2.4巢式PCR檢測

經過這項檢測發(fā)現(xiàn)患者血樣擴增出和三日虐原蟲的陽性指標對照一致。

2.5巢式-多重PCR檢測和擴增對比

應用這種方式檢測患者體內血樣，只有NEST-MULTI擴增體系中的M某擴增出和瘧原蟲對照一致的弱陽性基本條帶，在這個體系中三日瘧原蟲擴增條帶預期數(shù)值達到了450bp左右。

將患者的擴增出目的基因產物條帶T1和供血者M擴增陽性產物條帶T4分別進行TA復制，將復制結果送往某生物股份公司進行測序處理，經過測序處理之后發(fā)現(xiàn)T1和T4的序列順序基本一致，同源性達到了100%的符合。之后對基因序列進行在線比對分析，最終確定這例瘧疾疾病的根源在于留學生供血者的輸血性三日瘧。

3討論

血液輸送是瘧疾傳播發(fā)展的一個重要來源，由輸血導致的瘧疾疾病會表現(xiàn)為周期性的發(fā)冷、發(fā)熱、出汗等癥狀，嚴重的情況下還會引發(fā)貧血的問題。輸血性瘧疾的傳染源是沒有癥狀、具備免疫力的瘧原蟲攜帶者。

傳統(tǒng)的血涂片鏡方法是檢驗瘧疾的常用方式，但是這種檢驗操作的完成對實踐者個人能力有著較高的要求，在無形中增加了瘧疾診斷難度。在現(xiàn)代醫(yī)療技術的發(fā)展下有關醫(yī)學人員研究出了多種瘧原蟲分子生物學檢測方式，這種方式在以往PCR技術基礎上打造了巢式PCR、多層重PCR，使得檢測結果的敏感性和精準度程度提升。

從本文實驗檢測結果來看，在應用巢式PCR檢測方法之后所有樣本檢測呈現(xiàn)為陰性，沒有明顯差異，無法準確判斷患者輸血感染瘧疾的根源。而應用改進之后的、多層重PCR技術之后檢測出留學生血液含有弱陽性條帶。由此可見，多層重PCR技術對較低密度瘧原蟲和帶蟲者擁有良好的檢測效果，值得在臨床上廣泛推廣。

【參考文獻】

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