金海英，王康，嚴(yán)珂爾

（1.復(fù)旦大學(xué)，上海 200433；2.寧波海爾施基因科技有限公司，浙江寧波 315040）

Y染色體短串聯(lián)重復(fù)序列（Y-chromosome short tandem repeats，Y-STR）有穩(wěn)定的單倍型父系遺傳，具有顯著的人群及地域分布特征[1]。本文選用SureID?PathFinder Plus擴(kuò)增熒光檢測試劑盒包含的41個(gè)Y-STR基因座，分析廣西壯族群體遺傳多態(tài)性數(shù)據(jù)，旨在為法醫(yī)學(xué)應(yīng)用提供基礎(chǔ)群體數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣本與試劑

根據(jù)知情同意原則，本實(shí)驗(yàn)所用的258份血液樣本均采集自廣西地區(qū)壯族男性個(gè)體，以血卡形式保存。SureID?PathFinder Plus擴(kuò)增熒光檢測試劑盒由寧波海爾施基因科技有限公司提供。

1.2 設(shè)備與軟件

9700型PCR、AB 3500基因分析儀、Genemapper ID-X、等位基因頻率調(diào)查數(shù)據(jù)分析軟件由寧波海爾施基因科技有限公司提供。

1.3 方法

模板選擇：血卡打孔1 mm孔徑，作為免提取直接擴(kuò)增模板。

PCR擴(kuò)增：參照試劑盒說明書，采用10 μL反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增。

分型檢測：使用AB 3500基因分析儀（美國AB公司）進(jìn)行檢測，將檢測結(jié)果于Genemapper ID-X軟件進(jìn)行分型結(jié)果分析。

數(shù)據(jù)分析：使用等位基因頻率調(diào)查數(shù)據(jù)分析軟件計(jì)算各個(gè)基因座的等位基因頻率，使用直接計(jì)數(shù)法[2]，分別按公式1～3計(jì)算基因座基因多樣性（Gene diversity，GD）、單倍型多樣性（Haplotype diversity，HD）和單倍型識(shí)別率（Discriminative capacity，DC）。

式中，N樣本數(shù)，Pi為各等位基因頻率。

式中，N為樣本數(shù)，Pi為各單倍型頻率。

式中，N為樣本數(shù)，Ndiff為單倍型種類數(shù)目。

2 結(jié)果與分析

本實(shí)驗(yàn)對258例廣西地區(qū)壯族男性個(gè)體的41個(gè)Y-STR基因座進(jìn)行了遺傳學(xué)調(diào)查，參考文獻(xiàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析[3-7]，結(jié)果記錄如下。

（1）41個(gè)Y-STR基因座的等位基因頻率見表1。41個(gè)Y-STR基因座的基因多樣性（GD）見表2，其中GD值最低的為DYS645（0.0384），最高的為DYS527（0.9545）。

（2）41個(gè)Y-STR基因座共同構(gòu)成253種單倍型，其中250種單倍型只出現(xiàn)一次，1種出現(xiàn)四次，2種分別出現(xiàn)兩次，樣本單倍型多樣性值（HD）為0.9989，單倍型識(shí)別率（DC）為0.9806，較高的HD值和DC值意味著更容易區(qū)分隨機(jī)個(gè)體。

表1 41個(gè)Y-STR基因座的等位基因頻率（n=258）

續(xù)表1

續(xù)表1

表2 41個(gè)Y-STR基因座的GD值（n=258）

3 結(jié)論

根據(jù)2010年的人口統(tǒng)計(jì)可得知，全國壯族人口85%以上集中在廣西，選擇廣西壯族人群樣本進(jìn)行Y-STR基因座遺傳多態(tài)性研究具有很好的民族代表性，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)選擇的41個(gè)Y-STR基因座在廣西壯族人群中有較高的遺傳多態(tài)性，運(yùn)用本實(shí)驗(yàn)中的41個(gè)Y-STR基因座所組成的單倍型進(jìn)行分析，可以對廣西壯族的絕大多數(shù)樣本進(jìn)行區(qū)分，對在廣西壯族地區(qū)運(yùn)用Y染色體進(jìn)行親權(quán)鑒定提供了有力的計(jì)算依據(jù)，對法醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)具有重要的應(yīng)用價(jià)值。