郭添榮，柯 歡，吳文林，萬渝平，葉 梅，任 昕，廖振杰，熊 偉，張

（1.成都大學(xué)肉類加工四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川成都 610106；2.成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院，四川成都 610100；3.四川警察學(xué)院法學(xué)系，四川瀘州 646000；4.四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，四川成都 610066）

隨著生活水平的不斷提高，人們對(duì)動(dòng)物源食品消費(fèi)需求量也在日益增長，動(dòng)物源食品已經(jīng)成為消費(fèi)市場(chǎng)中主流食物來源[1]。在“新冠肺炎”疫情防控決勝的關(guān)鍵時(shí)期，肉蛋奶等“菜籃子”產(chǎn)品“優(yōu)質(zhì)保供”的重要性得到進(jìn)一步凸顯，其質(zhì)量安全關(guān)系到人民的身體健康和社會(huì)的繁榮穩(wěn)定。獸藥可預(yù)防動(dòng)物疾病、促進(jìn)生長和改善產(chǎn)品質(zhì)量[2-4]，從而提高產(chǎn)業(yè)收益。現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展越來越依賴獸藥產(chǎn)品，部分生產(chǎn)經(jīng)營戶在利益驅(qū)使下違規(guī)操作，加上監(jiān)管不嚴(yán)、檢測(cè)水平不高等原因，致使獸藥非法濫用現(xiàn)象在可食動(dòng)物養(yǎng)殖或加工過程中普遍存在。由于大部分獸藥可以通過食物鏈聚集或動(dòng)物自身殘留，也造成了獸藥殘留問題成為影響動(dòng)物源食品質(zhì)量安全的重要因素[5-7]。違禁或超標(biāo)使用獸藥不僅會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生危害，還會(huì)對(duì)畜牧業(yè)和生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生消極影響。因此，提升動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)水平，并在動(dòng)物源食品中獸藥殘留進(jìn)行有效檢測(cè)顯得尤為必要。在綜述獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概況的基礎(chǔ)上，就動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)過程中的技術(shù)難點(diǎn)和關(guān)鍵點(diǎn)進(jìn)行了分析，并對(duì)檢測(cè)中的質(zhì)量管理要點(diǎn)進(jìn)行梳理。

1 動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)概況

獸藥殘留是動(dòng)物源食品安全中最主要的問題，世界各國或地區(qū)長期致力于獸藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的研究和制定[8]。目前，我國已制定了一系列最高殘留限量（Maximum Residue Limits，MRLs） 標(biāo)準(zhǔn)，不僅對(duì)食品中的獸藥殘留量進(jìn)行了限定[9]，而且限制或禁止獸藥用于可食動(dòng)物的養(yǎng)殖或加工[10]。但仍存在部分養(yǎng)殖經(jīng)營戶在集約化飼養(yǎng)過程中使用違禁藥物，因此需要通過對(duì)獸藥進(jìn)行嚴(yán)格的檢測(cè)監(jiān)控，使其在動(dòng)物源食品中的劑量控制在安全范圍內(nèi)[11]。獸藥殘留檢測(cè)按技術(shù)手段分類，主要有免疫分析技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)、表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等，其中色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)集色譜的高鑒別能力和質(zhì)譜的高分離特點(diǎn)于一體，現(xiàn)階段已成為我國獸藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域中比較先進(jìn)且廣泛應(yīng)用的定性篩查和定量分析工具[12]。

隨著新型獸藥的不斷出現(xiàn)和新型材料的應(yīng)用，分析儀器正逐漸由高效向超高效、低分辨向高分辨轉(zhuǎn)變革新。例如，以飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（TOF-MS）和靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜儀（Orbitrap-MS） 為代表的高分辨質(zhì)譜儀與液相色譜聯(lián)用[13-15]，形成超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜（HPLC-HRMS）聯(lián)用技術(shù)，目前在高通量定性篩查和定量分析多種獸藥殘留中得到重用[16-20]，該分析技術(shù)由于分辨率和通量高、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于動(dòng)物源食品獸藥殘留檢測(cè)中，并顯示出了巨大的應(yīng)用潛力[21-25]?？傮w來看，獸藥檢測(cè)技術(shù)朝著高靈敏、高速度、高通量、多殘留、低成本方向發(fā)展。

2 動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)的難點(diǎn)

獸藥殘留檢測(cè)是保障動(dòng)物源食品安全的重要手段，在分析檢測(cè)過程中不僅涉及到藥物分析、藥物代謝和藥理學(xué)等多學(xué)科的交叉應(yīng)用，還存在許多獸藥本身和檢測(cè)條件的限制，導(dǎo)致其檢測(cè)過程中的難點(diǎn)和關(guān)鍵點(diǎn)頗多。典型的獸藥殘留檢測(cè)主要有以下幾個(gè)步驟：①樣品制備，對(duì)可食動(dòng)物肌肉組織、內(nèi)臟，蛋、乳及加工品等進(jìn)行取樣粉碎化處理，將樣品徹底混勻和均質(zhì)化，使其具有均勻性和代表性并將其干燥；②提取、凈化、濃縮、衍生化（樣品前處理），大部分獸藥都是以多組分、低濃度殘留于樣品復(fù)雜基質(zhì)中，通過一系列樣品前處理，可以有效分離和富集痕量組分、消除基質(zhì)干擾，從而提高選擇性和靈敏度，樣品稱取后根據(jù)待測(cè)化合物理化性質(zhì)，加標(biāo)提取溶劑，將其從樣品中分離提取出來，但經(jīng)過有機(jī)或水溶劑提取后的待測(cè)化合物中可能還夾雜著脂肪、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，則需要繼續(xù)利用單種或多組合萃取技術(shù)將待測(cè)物與干擾物質(zhì)分離凈化并定容，另外可根據(jù)所選擇的分離技術(shù)和儀器決定是否衍生化，其作用是提高待測(cè)物在檢測(cè)儀器上的響應(yīng)值；③儀器分析和數(shù)據(jù)處理，設(shè)置儀器分析條件后進(jìn)樣檢測(cè)，后續(xù)進(jìn)行定性圖譜分析和定量分析。

動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)分析的基本程序見圖1。

獸藥殘留檢測(cè)難點(diǎn)來源較廣，樣品方面主要有種類繁多、基質(zhì)復(fù)雜、藥物殘留濃度低等影響因素；藥物自身?xiàng)l件方面主要有品種較多、性質(zhì)差異大等影響因素；檢測(cè)技術(shù)方面主要有操作步驟繁瑣、要求高、難度大等影響因素。

動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)的主要難點(diǎn)見表1。

由表1可知，動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)工作較為復(fù)雜。首先，動(dòng)物源食品樣品范圍廣、種類繁多、基質(zhì)復(fù)雜且不同基質(zhì)之間差別較大，尤其是鮮蛋和蜂蜜樣品，同時(shí)還存在待測(cè)目標(biāo)化合物種類多且可能存在多組分或多殘留、含量低，以及性質(zhì)差異（極性、溶解度、沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性等） 和濃度波動(dòng)范圍大（10-3～10-12）。其次，部分獸藥存在自身特異性問題[26-31]，如同一類型的獸藥因結(jié)構(gòu)相似，保留時(shí)間接近，導(dǎo)致針對(duì)不同化合物前處理難以統(tǒng)一；部分獸藥穩(wěn)定性較差，在水性基質(zhì)中容易分解且部分獸藥參與人體內(nèi)代謝與運(yùn)轉(zhuǎn)，對(duì)樣品前處理要求較高；部分獸藥殘留在可食動(dòng)物肌肉組織中以共價(jià)結(jié)合態(tài)存在，需要在樣品前處理環(huán)節(jié)水解或酶解；部分獸藥分子量小、極性強(qiáng)，質(zhì)譜檢測(cè)的靈敏度和穩(wěn)定性差。最后，檢測(cè)方法存在局限性問題，如液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法為獸藥檢測(cè)的主要方法，但多存在基質(zhì)效應(yīng)且來源較多，使得準(zhǔn)確定量難度高；液相色譜法通常受到抗干擾能力和靈敏度較差的困擾，難以滿足檢測(cè)要求；氣相色譜法或氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法多用于易揮發(fā)化合物的檢測(cè)分析[32]，而獸藥多為難揮發(fā)化合物，采用氣相或氣質(zhì)方法需要衍生化，步驟復(fù)雜且操作難度高。

表1 動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)的主要難點(diǎn)

3 動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)的關(guān)鍵點(diǎn)

隨著動(dòng)物源食品多元化發(fā)展和新型獸藥的不斷應(yīng)用，藥物分析日益復(fù)雜，社會(huì)對(duì)獸藥殘留的分析能力和檢測(cè)效率提出了新的要求。由于獸藥在動(dòng)物組織中分布不均并受到理化性質(zhì)差異較大等因素的影響，造成檢測(cè)較為復(fù)雜，只有分析并把握好各環(huán)節(jié)中的關(guān)鍵點(diǎn)，才能促進(jìn)痕量分析水平不斷提高，為取得準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果打下基礎(chǔ)。

動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)的關(guān)鍵點(diǎn)見表2。

4 動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)的風(fēng)險(xiǎn)管控

檢驗(yàn)檢測(cè)過程中的風(fēng)險(xiǎn)管控是為得到理想測(cè)定結(jié)果，并確保檢測(cè)質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，動(dòng)物源食品中獸藥檢測(cè)的風(fēng)險(xiǎn)控制主要體現(xiàn)在樹立痕量分析與質(zhì)量控制意識(shí)、正確理解與運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)、重視儀器與耗材管理、避免損失與防止污染等4個(gè)方面。

4.1 樹立痕量分析與質(zhì)量控制意識(shí)

動(dòng)物源食品中獸藥殘留限量一般≤百萬分之一（ppm），而隨著現(xiàn)代高新檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用與發(fā)展，獸藥殘留檢測(cè)的濃度多數(shù)已經(jīng)要求≤十億分之一（ppb）[33]。因此，動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)屬于痕量分析，同時(shí)，獸藥殘留檢測(cè)工作往往會(huì)受到樣品基質(zhì)復(fù)雜、待測(cè)物含量低和檢測(cè)環(huán)境等因素影響，痕量分析時(shí)很容易造成痕量組分的污染和損失，所以應(yīng)當(dāng)樹立痕量分析意識(shí)并參照痕量分析基本要素開展分析檢測(cè)工作。為了保證檢測(cè)質(zhì)量和效率，則應(yīng)該樹立質(zhì)量控制意識(shí)，并在意識(shí)樹立的基礎(chǔ)上制定實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系[34]，規(guī)范試驗(yàn)操作規(guī)程，促使獸藥殘留檢測(cè)工作有據(jù)可依、有章可循并維持在可控狀態(tài)下。例如，檢驗(yàn)過程要求每批均帶質(zhì)控樣或增加加標(biāo)回收試驗(yàn)，并采用人員和設(shè)備比對(duì)、留樣再檢，以及當(dāng)檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)邊緣數(shù)據(jù)時(shí)的實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)等方式加以驗(yàn)證，從而保證檢測(cè)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。

4.2 準(zhǔn)確理解與運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)

獸藥殘留檢測(cè)的流程一般由樣品制備、樣品前處理（提取、凈化、濃縮等）、上機(jī)測(cè)試、數(shù)據(jù)分析等步驟組成，但由于獸藥的多樣性、復(fù)雜性，不同試樣中的組分干擾和基質(zhì)效應(yīng)存在顯著差異，需要制定不同方法標(biāo)準(zhǔn)來適應(yīng)需求，造成了檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)名目繁多。而由于檢測(cè)原理和適用匹配的差異，不同標(biāo)準(zhǔn)所采用的試劑耗材和操作程序等都有所區(qū)別。因此，只有準(zhǔn)確理解并合理運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)，才能獲得理想的檢測(cè)結(jié)果。首先，根據(jù)樣品種類和待測(cè)化合物性質(zhì)科學(xué)確定適用標(biāo)準(zhǔn)，需要把握檢測(cè)原理，根據(jù)所涉及到的物理、化學(xué)及生化反應(yīng)，確定試驗(yàn)思路。例如，凈化方式的選擇，是否需要通過衍生化、酶解等過程轉(zhuǎn)化檢測(cè)形式，以及離心時(shí)間設(shè)置和試驗(yàn)溫度的控制等內(nèi)容。其次，根據(jù)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和作業(yè)指導(dǎo)書，在遵循操作規(guī)程的基礎(chǔ)上熟練掌握樣品處理和檢測(cè)技術(shù)要點(diǎn)。

4.3 重視器材與樣品管理

儀器耗材與樣品的管理是獸藥殘留檢測(cè)工作中的重要內(nèi)容。首先，儀器管理方面，用于獸藥殘留檢測(cè)的儀器應(yīng)該專用，對(duì)于即將投入檢測(cè)的儀器，應(yīng)完成關(guān)鍵量值的核實(shí)和校驗(yàn)工作；其次，試劑耗材管理方面，由于化學(xué)試劑種類繁多且種類、級(jí)別不同，一些工藝粗糙、級(jí)別較低的試劑往往存在雜質(zhì)，這些雜質(zhì)可能會(huì)降低檢測(cè)靈敏度、導(dǎo)致色譜峰異?；蚨氯腿≈^等，而離心管、槍頭等耗材在檢測(cè)中因時(shí)常接觸到多種溶劑或受到實(shí)驗(yàn)室溫濕度、揚(yáng)塵等因素影響，也會(huì)對(duì)獸藥痕量分析產(chǎn)生不良影響。因此，應(yīng)注重對(duì)化學(xué)試劑和試驗(yàn)耗材的管理運(yùn)用工作，尤其是對(duì)檢測(cè)結(jié)果有顯著影響的試劑耗材、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、固相萃取柱等關(guān)鍵材料的篩選與驗(yàn)證。例如，快消耗材的來源渠道確定、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的溯源性把控、固相萃取柱的回收率測(cè)驗(yàn)等。最后，樣品管理方面，要確保檢樣與備樣的均勻性、一致性，且在標(biāo)簽標(biāo)示或規(guī)定的貯藏條件下運(yùn)輸、保存。

4.4 避免損失與防止污染

表2 動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)的關(guān)鍵點(diǎn)

痕量分析對(duì)檢測(cè)環(huán)境要求較高，避免損失和防止污染是獸藥殘留檢測(cè)中的一個(gè)基本要求。獸殘痕量檢測(cè)步驟冗長且操作繁瑣，從樣品制備到儀器檢測(cè)的全過程中都容易發(fā)生損失和污染，如何避免損失和防止污染成為了影響檢測(cè)靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度和特異性的重要因素。首先，檢測(cè)環(huán)境要滿足要求，在確保環(huán)境條件不會(huì)影響檢測(cè)的情況下開展檢驗(yàn)，若發(fā)現(xiàn)環(huán)境條件影響結(jié)果時(shí)應(yīng)立即停止檢測(cè)并采取有效措施防止交叉污染；其次是痕量分析全程要注意防污染和損失，嚴(yán)格遵守操作程序，避免因誤用、誤操作等原因造成的損失和交叉污染情況的出現(xiàn)，具有高污染風(fēng)險(xiǎn)的試驗(yàn)材料、溶液和儀器都要進(jìn)行嚴(yán)格區(qū)分，試液的均質(zhì)、轉(zhuǎn)移、濃縮等過程應(yīng)謹(jǐn)慎操作，避免因噴、濺、灑、爆沸等原因引起損失或污染。

5 結(jié)語

獸藥在預(yù)防或治療動(dòng)物疾病方面發(fā)揮著重要作用，合理使用獸藥可有效促進(jìn)產(chǎn)品質(zhì)量提升，不當(dāng)使用獸藥則會(huì)導(dǎo)致超限量殘留并通過動(dòng)物源食品進(jìn)入人體，人體在攝取后對(duì)健康產(chǎn)生危害。通過梳理并剖析動(dòng)物源食品中獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)的關(guān)鍵點(diǎn)和難點(diǎn)，尤其是在樣品前處理、設(shè)備操作和數(shù)據(jù)處理等方面，并在此基礎(chǔ)上提出風(fēng)險(xiǎn)管控策略，以期進(jìn)一步提高動(dòng)物源食品中獸藥殘留分析能力和效率，為全面治理獸藥殘留污染提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐。