文│李淑高雪萍唐中濤周先建［兆豐華生物科技（南京）有限公司］

高致病性豬藍(lán)耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）變異株引起的一種豬易感的烈性傳染病，主要引起母豬的繁殖障礙，生長育肥豬的呼吸道疾病以及仔豬中樞免疫器官的嚴(yán)重?fù)p傷，豬群一旦感染會(huì)引起嚴(yán)重的免疫抑制。豬藍(lán)耳病的發(fā)展形勢不容樂觀，發(fā)病率高、范圍廣，目前主要依靠疫苗免疫為防疫手段。市場上主要有滅活苗和弱毒活疫苗兩種類型藍(lán)耳病疫苗，滅活疫苗在藍(lán)耳病防控進(jìn)程上有很大貢獻(xiàn)，但其達(dá)不到預(yù)期的抗體水平、保護(hù)率不高、需要多次免疫等原因而不被養(yǎng)殖戶所選擇；弱毒活疫苗因其產(chǎn)生的高滴度特異性抗體和良好的臨床免疫效果，越來越得到養(yǎng)豬場的青睞。本研究對(duì)高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗JXA1-R株進(jìn)行豬只的免疫接種，從免疫后豬只臨床反應(yīng)、體重增長、散毒情況和血清抗體水平等方面進(jìn)行研究分析，擬為廣大同行對(duì)JXA1-R株的選擇及應(yīng)用提供參考。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)材料。高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗JXA1-R株種毒，來自中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，F(xiàn)1為第1代JXA1-R株疫苗毒株，F(xiàn)17為兆豐華生科技（南京）有限公司傳代致弱17代的疫苗毒株。

豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征ELISA試劑盒購自北京愛德士元亨生物科技有限公司。

PRRSV抗原檢測（通用、變異）試劑盒購自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司。

◎圖1免疫后試驗(yàn)豬只體溫觀察（℃）

◎圖2免疫后豬只試驗(yàn)期14天增重情況（千克）

2.試驗(yàn)動(dòng)物。15頭4周齡健康仔豬，豬只體型相近，健康度良好，未免疫任何廠家藍(lán)耳病疫苗，PRRSV抗原、抗體檢測均為陰性。

3.試驗(yàn)分組與免疫。將15頭健康仔豬隨機(jī)分為3組，具體分組操作見表1。試驗(yàn)過程中，免疫組與對(duì)照組隔離飼養(yǎng)，飼養(yǎng)條件相同，試驗(yàn)期14天。

表1試驗(yàn)豬只分組

4.試驗(yàn)數(shù)據(jù)采集。

（1）臨床癥狀觀察。整個(gè)試驗(yàn)期間，每日觀察豬只的臨床癥狀（精神狀況、采食、呼吸和糞便情況），每天下午三點(diǎn)測量直腸溫度并記錄。

（2）試驗(yàn)期間增重。觀察試驗(yàn)期間豬只的增重情況，在試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)分別測量試驗(yàn)豬只體重。

（3）樣品采集及處理。分別在接種后的第5、8、11、14天采集試驗(yàn)豬只的鼻拭子、口腔拭子和肛拭子，RT-PCR檢測豬只排毒情況；同期進(jìn)行前腔靜脈采血分離血清，以測量豬只血清中抗體水平。

二、試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)期間三組豬只均未表現(xiàn)出明顯的不良癥狀，免疫后試驗(yàn)豬采食、呼吸正常、精神正常。圖1為豬只免疫后的體溫變化情況，各組豬只體溫測量結(jié)果均處于39～40℃，體溫正常，未出現(xiàn)高熱，各組間每日平均體溫差異不明顯。

如圖2所示，三組豬只14天增重分別為1.45千克、1.63千克、1.72千克，從增重?cái)?shù)據(jù)來看，在初始體重相近的條件下，疫苗免疫后實(shí)驗(yàn)Ⅰ組和Ⅱ組增重均低于對(duì)照組，差異明顯，尤以F1代（實(shí)驗(yàn)Ⅰ組）最低，致弱后的F17代（實(shí)驗(yàn)Ⅱ組）較對(duì)照組在增重上相差較小，可見JXA1-R株的毒力可能對(duì)豬只的生長有一定的影響。

由表2可知，試驗(yàn)豬只免疫后從11天開始檢測到排毒，口腔拭子的檢出率高于鼻拭子和肛拭子，實(shí)驗(yàn)Ⅱ組相較于Ⅰ組排毒率稍低。

由圖3可知，兩個(gè)免疫組在接種后8天開始產(chǎn)生血清PRRSV N蛋白抗體，并于第9～10天轉(zhuǎn)陽（S/P值＞0.4），免疫后8～14天實(shí)驗(yàn)Ⅰ組的血清PRRSV N蛋白抗體較實(shí)驗(yàn)Ⅱ組產(chǎn)生早，并一直高于實(shí)驗(yàn)Ⅱ組，但組間差異不顯著。

三、結(jié)論

◎圖3 免疫后14天試驗(yàn)豬體內(nèi)PRRSV N蛋白抗體水平

本研究以不同代次JXA1-R疫苗株作為免疫原免疫試驗(yàn)豬只，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：兩個(gè)代次的疫苗株接種于陰性豬后，豬只無不良反應(yīng)，采食和精神狀況正常，體溫方面與對(duì)照組相比較未出現(xiàn)較大波動(dòng)，表明JXA1-R株具有免疫安全性，不會(huì)對(duì)豬只造成太大的應(yīng)激；疫苗株免疫后實(shí)驗(yàn)組豬只在增重方面均低于對(duì)照組，說明本實(shí)驗(yàn)中的疫苗株可能對(duì)豬只的生長有一定影響，但繼續(xù)致弱的實(shí)驗(yàn)Ⅱ組（F17代）較對(duì)照組差異很??；實(shí)驗(yàn)組在免疫后的第11～14天均表現(xiàn)排毒，其中口腔拭子排毒最高，Ⅱ組較Ⅰ組的排毒率有一定改善，表明疫苗株可能存在進(jìn)一步優(yōu)化的空間；雖然血清PRRSV N蛋白抗體檢測不能代表試驗(yàn)豬體內(nèi)中和抗體水平，但陰性豬的轉(zhuǎn)陽從側(cè)面反映了N蛋白抗體的產(chǎn)生及變化趨勢是由疫苗株引起，兩個(gè)代次的種毒均具有較好的免疫原性，接種9天后產(chǎn)生特異性抗體。綜合以上試驗(yàn)結(jié)果，JXA1-R株活疫苗具有較好的免疫原性和安全性，疫苗株F17在安全性上可能更加優(yōu)于F1，兩者在免疫原性上是否有差異還需進(jìn)一步試驗(yàn)，這些結(jié)果為以后JXA1-R疫苗株的優(yōu)化和改良提供一定的參考。

表2免疫后各組豬只排毒占比情況