靳 冉，岳 楓，劉 丹，張思玉，李晉生，顧海鷗

［1.北京同仁堂股份有限公司科學研究所，北京 100079；2.中國北京同仁堂（集團） 有限責任公司，北京 100079］

隨著國家二胎政策的放開，以及近年來環(huán)境、飲食及人們工作生活壓力的增大，臨床流產(chǎn)發(fā)病率呈明顯上升趨勢，并且呈反復(fù)發(fā)生的勢態(tài)［1］，給患者的身心及家庭穩(wěn)定造成了很大傷害。目前單純西醫(yī)治療效果欠佳［2］，而中藥保胎作用歷史悠久［3］，是中醫(yī)婦科最具特色的治療方法之一，嗣育保胎丸為經(jīng)典保胎藥，臨床療效確切，但這方面的研究幾乎空白。本研究利用動物早期流產(chǎn)模型和孕初期大鼠在體子宮肌張力測試模型，觀察藥物的保胎作用，并初步探討其作用機制。

1 材料

1.1 動物 SPF 級SD 大鼠126 只，雄性，42 只，體質(zhì)量260～280 g，雌性84 只，體質(zhì)量240～260 g，用于建立溴隱亭流產(chǎn)模型；SPF 級SD 大鼠105 只，雄性，35 只，體質(zhì)量320～340 g，雌性，70 只，體質(zhì)量260～280 g，用于建立在體子宮平滑肌張力檢測模型。以上2 批動物均購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號SCXK（京）2016-0006。動物飼養(yǎng)于SPF 級動物室內(nèi)，日光燈照明，12 h明暗周期，自由飲水、飲食，溫度20～26 ℃，送風6～10 次/h，相對濕度40%～70%。

1.2 試劑與藥物 嗣育保胎丸（北京同仁堂股份有限公司，批號15013043）由黃芪、黨參、當歸、熟地黃、阿膠、桑寄生、等多種藥味組成；滋腎育胎丸（廣州白云山中一藥業(yè)有限公司，批號W06127）；黃體酮注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，批號1601131）；縮宮素（安徽宏業(yè)藥業(yè)有限公司，批號161045）；溴隱亭（澳大利亞Novaris 公司，批號TO228Sartorious）；孕酮（P）試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所，批號20170720）；泌乳素（PRL）試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所，批號20170820）。

1.3 儀器 BT124S 電子精密天平（塞多利斯科學儀器有限公司）；生物信號采集處理系統(tǒng)（美國BioPac 公司）。

2 方法

2.1 構(gòu)建受孕大鼠模型 SD 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)4 d 后，每日下午5：00 分批次以雌雄2∶1 合籠交配，次日上午8：00見有陰道栓者認為受孕成功［4］，作為妊娠第1 天。

2.2 分組、給藥 將每次受孕成功的雌性大鼠隨機分為正常對照組、模型組、黃體酮組、滋腎育胎丸組、嗣育保胎丸高、中、低劑量組，稱重并做標記。妊娠第5 天開始，嗣育保胎丸高、中、低劑量組大鼠灌胃給予受試藥物，給藥劑量分別為7.2、3.6、1.8 g/kg；滋腎育胎丸組給藥劑量為1.5 g/kg，1 次/d，連續(xù)7 d。黃體酮組大鼠隔日肌肉注射2 mg/kg，模型組和正常對照組每天給予等體積蒸餾水。灌胃給藥體積均為1 mL/100 g，肌肉注射體積為0.5 mL/100 g。

2.3 構(gòu)建溴隱亭誘導(dǎo)大鼠流產(chǎn)模型 84 只受孕大鼠，除正常對照組外，其余各組于妊娠第6～8 天每只大鼠皮下注射溴隱亭0.25 mg，連續(xù)3 d［5］。

2.4 測定大鼠血清P、PRL 水平 妊娠第11 天，所有動物麻醉經(jīng)腹主動脈取血，1 500 r/min 離心10 min，取血清，放射免疫法測定大鼠血清P、PRL 水平。

2.5 測定大鼠流產(chǎn)率 84 只受孕大鼠腹主動脈取血后，仔細分離子宮，解剖觀察子宮正常胚胎數(shù)和流產(chǎn)胚胎數(shù)，計算流產(chǎn)率。流產(chǎn)率=（流產(chǎn)數(shù)/著床點數(shù)）×100%。

2.6 測定縮宮素前后大鼠子宮平滑肌張力、收縮峰面積 70只受孕大鼠于妊娠第11 天，給藥40 min 后注射戊巴比妥鈉（60 mg/kg）麻醉，仰位固定于手術(shù)臺，下腹部和腹股溝處備皮后，分離股靜脈，插入靜脈滯留針固定，于腹部正中作4～5 cm 長的切口打開腹腔找出子宮，在其一側(cè)子宮角選取長3 cm 的一段，將子宮角的陰道端和卵巢端分別縫合在特制的塑料T 型支架底部的兩端支點上［6-7］。打開MP-150 多導(dǎo)生理記錄儀，調(diào)零定標，標本負荷1 g。在已固定好的子宮兩支點中點處縫一棉線，從塑料管中引出，與5 g 肌張力傳感器連接，靜止張力1 g。待子宮收縮穩(wěn)定10 min 后，記錄子宮平滑肌正常收縮曲線，10 min 后各組大鼠股靜脈注射縮宮素0.2 U，造成子宮收縮痙攣模型，正常對照組注射等量生理鹽水后，繼續(xù)觀察10 min 并記錄子宮活動狀態(tài)。

2.7 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料以（）表示。進行方差齊性檢驗，方差齊采用方差分析；方差不齊采用非參數(shù)檢驗。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 動物受孕情況 溴隱亭致大鼠流產(chǎn)模型實驗中，模型組和嗣育保胎丸高劑量組各有1 只假陽受孕大鼠，黃體酮組有1 只假陰受孕大鼠；大鼠子宮平滑肌張力實驗中，正常對照組和嗣育保胎丸高劑量組各有1 只假陽受孕大鼠，這些動物的實驗數(shù)據(jù)在結(jié)果統(tǒng)計時均予剔除。

3.2 大鼠血清P、PRL 水平 與正常對照組比較，模型組孕鼠P 水平下降（P＜0.01）；與模型組比較，嗣育保胎丸高劑量組大鼠血清P、PRL 水平升高（P＜0.05），中劑量組大鼠血清P 升高（P＜0.05）。見表1。

表1 嗣育保胎丸對大鼠血清P、PRL 水平的影響（）

表1 嗣育保胎丸對大鼠血清P、PRL 水平的影響（）

注：與正常對照組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，?P＜0.05，??P＜0.01。

3.3 嗣育保胎丸對大鼠流產(chǎn)率的影響 動物子宮解剖后發(fā)現(xiàn)正常妊娠組子宮呈粉紅色，宮腔內(nèi)未見明顯的出血點，胚胎發(fā)育良好，大小均勻，胎盤附著處無瘀血，黃體呈淡黃色；流產(chǎn)組子宮呈暗紅色，胚胎大小不一，宮腔內(nèi)可見黑色的淤血點，特別是胚胎附著處，黃體顏色較正常組稍淡。與正常對照組比較，模型組孕鼠的流產(chǎn)率升高（P＜0.01）；灌服嗣育保胎丸后，嗣育保胎丸高、中劑量大鼠的流產(chǎn)率降低（P＜0.05）。見表2。

3.4 嗣育保胎丸對大鼠子宮平滑肌張力和收縮峰面積的影響 與正常對照組比較，模型組孕初期大鼠靜脈注射縮宮素前后，子宮張力差值升高（P＜0.01），子宮平滑肌收縮峰面積差值增加（P＜0.01）；與模型組比較，嗣育保胎丸高、中劑量組孕初期大鼠的子宮張力差值降低（P＜0.05）。見表3。

表2 嗣育保胎丸對大鼠流產(chǎn)率的影響（）

表2 嗣育保胎丸對大鼠流產(chǎn)率的影響（）

注：與正常 對照組比較，△△P ＜0.01；與模型 組比較，?P＜0.05，??P＜0.01。

表3 嗣育保胎丸對大鼠子宮平滑肌張力和收縮峰面積的影響（）

表3 嗣育保胎丸對大鼠子宮平滑肌張力和收縮峰面積的影響（）

注：與正常對照組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，?P＜0.05。

4 討論

妊娠10 周前，母體血孕激素合成和分泌主要來源于妊娠黃體［8-9］，而PRL 對調(diào)節(jié)卵巢功能，促進胎兒器官組織的發(fā)育等均有重要影響，適當?shù)纳硇愿哐狿RL 是維持妊娠的重要因素［10］。由溴隱亭誘導(dǎo)的大鼠流產(chǎn)模型具有血清PRL、P 水平低的特點［11］。實驗發(fā)現(xiàn)，嗣育保胎丸組大鼠的血清PRL、P 明顯升高，且子宮內(nèi)胚胎比較完整，流產(chǎn)率較模型組明顯降低。由此可見嗣育保胎能夠通過逆轉(zhuǎn)溴隱亭對PRL、P 降低的作用，實現(xiàn)其保胎效果。嗣育保胎丸組大鼠流產(chǎn)率明顯下降，妊娠成功率及胎仔數(shù)顯著提高，進而達到改善黃體功能的治療效果，提示嗣育保胎丸對于防治母胎界面的內(nèi)分泌免疫紊亂、健黃體、維持正常妊娠有重要意義。

大量資料證實，孕周期間子宮出現(xiàn)一種規(guī)則的、低強度的收縮，其有助于子宮血液循環(huán)［12］。在妊娠早期，子宮這種生理性收縮提前出現(xiàn)或強度增加，都會干擾到孕囊在子宮內(nèi)營養(yǎng)的吸收和良好的著床，從而引發(fā)孕囊與子宮脫膜層的移位剝脫，導(dǎo)致先兆流產(chǎn)的可能［13］。縮宮素即催產(chǎn)素，具有直接興奮子宮平滑肌，加強其收縮的作用［14］。小劑量縮宮素加強子宮的節(jié)律性收縮，使收縮振幅加大，張力稍增加，隨著劑量加大，將引起肌張力持續(xù)增高，最后可致強直性收縮。催產(chǎn)素對非孕子宮的作用較弱，而對妊娠子宮的作用較強［15］。本研究結(jié)果顯示，初孕大鼠靜脈注射縮宮素后，子宮平滑肌的收縮強度明顯升高。給予嗣育保胎丸后，大鼠的子宮平滑肌收縮強度差明顯降低，提示嗣育保胎丸能抑制縮宮素引起的子宮平滑肌興奮狀態(tài)，對抗子宮平滑肌的緊張作用，對早期流產(chǎn)具有明顯的保胎作用，但其具體作用機制及作用環(huán)節(jié)尚待進一步研究。