黃裕華 徐擁建 馮高飛 黃柏強(qiáng) 楊 英 鄧遠(yuǎn)軍

[北京中醫(yī)藥大學(xué)深圳醫(yī)院(龍崗)肝病科，廣東 深圳 518172]

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除外酒精和其他明確的肝損傷致病因素，以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪性樣變?yōu)橹饕卣鞯囊唤M臨床病理綜合征?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，NAFLD是一種導(dǎo)致機(jī)體能量穩(wěn)態(tài)失衡的遺傳、環(huán)境、代謝應(yīng)激相關(guān)性肝病，是代謝綜合征在肝臟的表現(xiàn)，包括非酒精性單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及由其引起的肝纖維化、肝硬化。NAFLD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，至今未完全闡明，據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，可能與脂質(zhì)代謝障礙、胰島素抵抗(IR)、攝入過(guò)量果糖、脂肪組織功能紊亂，腸道菌群失調(diào)導(dǎo)致炎癥、氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)[1-3]。哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)屬于絲/蘇氨酸蛋白激酶，是細(xì)胞內(nèi)的中心信號(hào)調(diào)控分子，其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)周期進(jìn)程、蛋白質(zhì)合成及降解、膜蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)、蛋白激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等起到至關(guān)重要的作用。細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄活化子3(signal transducers and activators of transcription3，STAT3)作為細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄活化子家族(STATs)的一員，與肝臟關(guān)系最密切，在被激活后可轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，并與脫氧核糖核酸(DNA)結(jié)合，啟動(dòng)下游基因表達(dá)，促進(jìn)脂質(zhì)蓄積，并產(chǎn)生局灶性炎性微環(huán)境，維持細(xì)胞功能，調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)[4]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察參苓白術(shù)散對(duì)NAFLD大鼠肝Kupffer細(xì)胞mTOR復(fù)合物1(mTORC1)/STAT3信號(hào)通路相關(guān)基因及蛋白表達(dá)的影響，探討其對(duì)NAFLD的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)健康成年雄性SD大鼠80只，8周齡，體質(zhì)量(200±20) g，由濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(魯)20140007。大鼠飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，溫度為22～26 ℃，濕度為45%～55%，明暗各12 h，自由進(jìn)水進(jìn)食。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 參苓白術(shù)散[5]藥物組成：人參15 g，白術(shù)15 g，茯苓15 g，砂仁6 g，山藥15 g，白扁豆12 g，薏苡仁9 g，桔梗6 g，蓮子9 g，炙甘草9 g。方中藥材均為華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)的免煎單味中藥配方顆粒劑。按上述中藥配方顆粒劑相當(dāng)于藥材飲片的劑量，換算成實(shí)驗(yàn)室所需飲片劑量，溶于水，調(diào)勻制成混懸液備用。高脂飼料由基礎(chǔ)飼料(88.0%)、豬油(10.0%)、膽固醇(1.5%)、Ⅲ號(hào)膽鹽(0.5%)組成。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑 全自動(dòng)生化分析儀(深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司)；Epoch酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tek公司)；流式細(xì)胞儀(美國(guó)Beckman Coulter公司)；微量核酸分光光度計(jì)(美國(guó)Thermo Scientific公司)；雙通道通用型注射泵(KDS200型，美國(guó)KD Scientific公司)；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real time-PCR)儀(美國(guó)BIO-RAD公司)；TRizol裂解液、Quant cDNA第一鏈合成試劑盒、SYBR Green熒光定量PCR試劑盒(日本Takara公司)；mTORC1-抗體(mTORC1-Antibody)、STAT3-抗體(STAT3-Antibody)(美國(guó)Cell Signaling Technology公司)；RIPA裂解液(北京雷根生物技術(shù)有限公司)；兔抗大鼠溶菌酶抗體(Anti-Lysozyme)(上海依科賽生物制品有限公司)；過(guò)氧化物酶(HRP)羊抗兔免疫球蛋白G(IgG)抗體(廣州雅怡生物科技有限公司)；Ⅳ型膠原酶(美國(guó)GIBCO公司)；大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素1β(IL-1β)和IL-5、IL-6酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒(上海依科賽生物制品有限公司)；3%戊巴比妥鈉溶液、10%多聚甲醛溶液(上海銘博生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 將80只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為4組，空白組、模型組及參苓白術(shù)散低、高劑量組，每組20只。

1.2.2 模型制備 空白組大鼠予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，其余3組均予高脂飼料喂養(yǎng)制備NAFLD模型[6]。同時(shí)參苓白術(shù)散低、高劑量組均按10 mL/kg給予相應(yīng)劑量參苓白術(shù)散灌胃，每日1次，連續(xù)8周。每只大鼠的具體給藥劑量按動(dòng)物體型系數(shù)換算法折算[7]，參苓白術(shù)散低劑量組為人臨床等效劑量(含生藥量1.0 g/mL)，參苓白術(shù)散高劑量組為人臨床等效劑量的3倍用量(含生藥量3.0 g/mL)。

1.3 觀察指標(biāo)及方法

1.3.1 一般情況 實(shí)驗(yàn)期間觀察各組大鼠體態(tài)毛色、行為能力、食欲、大小便及對(duì)外界刺激的反應(yīng)情況。

1.3.2 肝組織病理學(xué)觀察 在第8周末次給藥后，經(jīng)禁食不禁水12 h后，各組隨機(jī)選取10只大鼠，予3%戊巴比妥鈉溶液1 mL/kg腹腔注射麻醉，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血后處死，取大鼠肝組織保存?zhèn)溆谩Ｔ诟斡胰~相同區(qū)域取1.5 cm×1.0 cm×0.5 cm的小塊組織，為避免脂滴降解，務(wù)必于當(dāng)日行冰凍切片，厚約6 μm，油紅O脂肪染色法后，400倍光鏡下觀察肝組織內(nèi)脂滴分布及病理組織學(xué)變化。另取若干小塊肝組織以10%多聚甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，做4 μm切片，行蘇木素—伊紅(HE)染色，中性樹(shù)脂封固，200倍光鏡下觀察大鼠肝組織脂肪變性程度。

1.3.3 Kupffer細(xì)胞分離與鑒定 余下每組10只大鼠用以提取原代肝Kupffer細(xì)胞[6，8-10]，Kupffer細(xì)胞純度達(dá)90%以上。

從當(dāng)前道路運(yùn)輸安全管理實(shí)際來(lái)說(shuō)，隨著管理工作量的不斷增加，若想保證安全管理工作高質(zhì)量落實(shí)，必須要?jiǎng)?chuàng)新管理方式。在具體實(shí)踐中，要積極引入信息技術(shù)和大數(shù)據(jù)技術(shù)等，輔助安全監(jiān)管工作的開(kāi)展。比如，利用大數(shù)據(jù)技術(shù)，分析安全事故高發(fā)路段，加大安全檢查部署，做好事前預(yù)防工作。再比如，通過(guò)在客運(yùn)車輛中設(shè)置遠(yuǎn)程監(jiān)控系統(tǒng)和超速報(bào)警裝置等，實(shí)現(xiàn)運(yùn)輸環(huán)節(jié)的安全監(jiān)督，進(jìn)而減少安全事故的發(fā)生。

1.3.4 血脂指標(biāo)及Kupffer細(xì)胞炎癥因子檢測(cè) 經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，存于無(wú)抗凝添加劑的采血管內(nèi)，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血脂指標(biāo)總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)。采用Epoch酶標(biāo)儀檢測(cè)Kupffer細(xì)胞TNF-α、IL-1β、IL-5及IL-6含量，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.5 Real time-PCR檢測(cè) Kupffer細(xì)胞mTORC1、STAT3 mRNA表達(dá)取培養(yǎng)的貼壁Kupffer細(xì)胞，經(jīng)4 ℃，12 000 r/min，離心8 min，棄上清液，加入TRizol裂解液1 mL裂解Kupffer細(xì)胞，提取總RNA，用微量核酸分光光度計(jì)檢測(cè)總RNA濃度，按照Quant cDNA第一鏈合成試劑盒說(shuō)明，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。取反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行Real time-PCR反應(yīng)。引物序列由上海捷瑞生物工程有限公司設(shè)計(jì)及合成，選用3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)為內(nèi)參基因。mTORC1：上游引物：5'-CAGAGGGCAGCAACAGTGAAAG-3'，下游引物：5'-GACAAGGAGATAGAACGGAAGAAGC-3'，片段長(zhǎng)度：134 bp；STAT3：上游引物：5'-ACCAGCAGTAT-AGCCGCTTC-3'，下游引物：5'-GCCACAATC-CGGGCAATCT-3'，片段長(zhǎng)度：97 bp；GAPDH：上游引物：5'-GATCCCGCTAACATCAAATG-3'，下游引物：5-'GAGGGAGTTGTCATATTTCTC-3'，片段長(zhǎng)度：96 bp。按照說(shuō)明書(shū)在冰臺(tái)上配置20 μL反應(yīng)液，反應(yīng)條件為95 ℃持續(xù)30 s預(yù)變性；95 ℃持續(xù)10 s變性；mTORC1、STAT3、GAPDH 60 ℃退火30 s；60 ℃延伸40 s，擴(kuò)增39個(gè)循環(huán)；再于70～90 ℃，持續(xù)5 s，分析溶解曲線。用Opticon Monitor 3.1軟件整理和分析。設(shè)定空白組基因表達(dá)水平為1。公式：2-△△Ct=實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的基因表達(dá)相對(duì)于空白組的變化倍數(shù)。△△Ct=實(shí)驗(yàn)組(Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因)-空白組(Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因)。計(jì)算各組大鼠Kupffer細(xì)胞mTORC1、STAT3 mRNA表達(dá)量。

1.3.6 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)Kupffer細(xì)胞mTORC1、STAT3蛋白表達(dá) 每RIPA裂解液1 mL加入5×106個(gè)Kupffer細(xì)胞，吹打均勻，14 000 r/min，4 ℃下離心8 min。為避免蛋白降解，在冰臺(tái)上，取上清液二喹啉甲酸(BCA)法測(cè)定蛋白濃度，對(duì)樣品上樣量的終濃度調(diào)整為50～80 μg/μL。采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)法電泳分離蛋白，濕轉(zhuǎn)膜法將蛋白轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜后，加入含5%脫脂奶粉封閉液，常溫下平搖1 h，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗膜后，加入提前配制好的一抗稀釋液(mTORC1 1∶5 000稀釋；STAT3 1∶1 000稀釋)，4 ℃過(guò)夜孵育后，再次PBS洗膜除去過(guò)量的一抗稀釋液，加二抗稀釋液(HRP羊抗兔IgG抗體)(1∶5 000稀釋)室溫孵育1 h，洗膜后，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。用Quantity One軟件分析GAPDH與目的蛋白mTORC1、STAT3的光密度值。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠一般情況比較 空白組大鼠體型適中，皮毛光亮，動(dòng)作靈活，反應(yīng)敏捷。模型組大鼠體型肥胖，皮毛枯黃，動(dòng)作遲鈍，鼠籠敷料潮濕，飲水量多，大便溏軟，易激惹咬噬。參苓白術(shù)散低、高劑量組大鼠精神狀態(tài)、體型、毛發(fā)光澤度、行為反應(yīng)性、排泄物等情況介于正常組與模型組大鼠之間。其中參苓白術(shù)散高劑量大鼠體型普遍較小于參苓白術(shù)散低劑量組，在精神狀態(tài)、毛發(fā)光澤度、行為反應(yīng)方面也優(yōu)于參苓白術(shù)散低劑量組。

2.2 各組大鼠肝組織病理學(xué)觀察

2.2.1 油紅O脂肪染色 空白組細(xì)胞核藍(lán)染，染色后細(xì)胞漿中紅色油滴不明顯。模型組藍(lán)染的細(xì)胞核若隱若現(xiàn)于細(xì)胞中，染色后，胞質(zhì)中可見(jiàn)大量紅色油滴，部分融合。參苓白術(shù)散低、高劑量組肝組織染色脂滴紅染面積及程度較模型組明顯縮小和減輕，參苓白術(shù)散高劑量組肝組織形態(tài)最接近空白組。見(jiàn)封3，圖1。

2.2.2 HE染色 空白組細(xì)胞核藍(lán)染，核大而圓，居中，胞漿均勻紅染，胞內(nèi)無(wú)脂肪空泡，肝索以中央靜脈為中心向四周呈放射狀排列，結(jié)構(gòu)清晰，排列規(guī)則，未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)或壞死灶。模型組肝細(xì)胞腫脹或膨大，呈氣球樣變，細(xì)胞核被脂肪空泡擠壓于一側(cè)，肝竇、肝索結(jié)構(gòu)排列紊亂，肝竇受壓變窄，匯管區(qū)可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，視野內(nèi)有散在的點(diǎn)狀壞死灶。參苓白術(shù)散低、高劑量組在肝細(xì)胞形態(tài)、肝索排列、氣球樣變、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及點(diǎn)狀壞死灶方面，較模型組有不同程度改善，其中參苓白術(shù)散高劑量組肝組織病理學(xué)變化改善最顯著。見(jiàn)封3，圖2。

組 別nTCTG空白組102.06±0.300.73±0.11模型組104.50±0.60?1.21±0.16?參苓白術(shù)散低劑量組103.53±0.94△1.07±0.10△參苓白術(shù)散高劑量組102.48±0.84△#0.96±0.13△#

與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與參苓白術(shù)散低劑量組比較，#P<0.05

由表1可見(jiàn)，模型組大鼠TC、TG較空白組升高(P<0.05)，說(shuō)明造模成功。參苓白術(shù)散低、高劑量組大鼠TC、TG較模型組降低(P<0.05)，說(shuō)明治療有效，參苓白術(shù)散高劑量組較參苓白術(shù)散低劑量組降低更明顯(P<0.05)。

2.4 各組大鼠Kupffer細(xì)胞TNF-α、IL-1β、IL-5及IL-6比較 見(jiàn)表2。

組 別nTNF-αIL-1βIL-5IL-6空白組1097.87±14.1573.27±27.31102.53±16.4098.45±18.36模型組10351.74±21.72?177.76±21.33?251.30±24.61?260.77±19.33?參苓白術(shù)散低劑量組10187.89±20.59△112.99±13.75△163.23±21.69△187.09±23.90△參苓白術(shù)散高劑量組10143.85±14.09△#100.77±20.97△#147.85±16.36△#113.58±15.56△#

與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較，△P<0.05；與參苓白術(shù)散低劑量組比較，#P<0.05

由表2可見(jiàn)，模型組大鼠Kupffer細(xì)胞TNF-α、IL-1β、IL-5及IL-6均較空白組升高(P<0.05)；參苓白術(shù)散低、高劑量組大鼠Kupffer細(xì)胞TNF-α、IL-1β、IL-5及IL-6均較模型組降低(P<0.05)，說(shuō)明治療有效，參苓白術(shù)散高劑量組較參苓白術(shù)散低劑量組降低更明顯(P<0.05)。

2.5 各組大鼠Kupffer細(xì)胞mTORC1、STAT3 mRNA表達(dá)比較 見(jiàn)表3。

組 別nmTORC1 mRNASTAT3 mRNA空白組101.11±0.901.08±0.59模型組105.54±1.17?3.39±1.01?參苓白術(shù)散低劑量組104.12±1.21△2.66±0.94△參苓白術(shù)散高劑量組102.05±1.06△#1.75±0.88△#

與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較，△P<0.05；與參苓白術(shù)散低劑量組比較，#P<0.05

由表3可見(jiàn)，模型組大鼠Kupffer細(xì)胞mTORC1、STAT3 mRNA表達(dá)均較空白組升高(P<0.05)；參苓白術(shù)散低、高劑量組大鼠Kupffer細(xì)胞mTORC1、STAT3 mRNA表達(dá)均較模型組降低(P<0.05)，參苓白術(shù)散高劑量組較參苓白術(shù)散低劑量組降低更明顯(P<0.05)。

2.6 各組大鼠Kupffer細(xì)胞mTORC1、STAT3蛋白表達(dá)比較 見(jiàn)表4、圖3。

組 別nmTORC1蛋白STAT3蛋白空白組100.61±0.090.57±0.06模型組101.71±0.13?1.03±0.10?參苓白術(shù)散低劑量組101.42±0.10△0.93±0.07△參苓白術(shù)散高劑量組101.22±0.10△#0.85±0.06△#

與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與參苓白術(shù)散低劑量組比較，#P<0.05

由表4可見(jiàn)，模型組大鼠Kupffer細(xì)胞mTORC1、STAT3蛋白表達(dá)均較空白組升高(P<0.05)；參苓白術(shù)散低、高劑量組大鼠Kupffer細(xì)胞mTORC1、STAT3蛋白表達(dá)均較模型組降低(P<0.05)，且參苓白術(shù)散高劑量組較參苓白術(shù)散低劑量組降低更明顯(P<0.05)。

A空白組；B模型組；C參苓白術(shù)散低劑量組；D參苓白術(shù)散高劑量組

圖3 各組大鼠Kupffer細(xì)胞mTORC1、STAT3蛋白表達(dá)

3 討 論

近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的變化，NAFLD發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，發(fā)病年齡也日趨年輕[11]。此類人群的生活習(xí)慣若不改變及得不到有效藥物的治療，后期可發(fā)展為肝硬化、肝癌[12-13]。肝臟Kupffer細(xì)胞位于肝血竇內(nèi)，是人體內(nèi)最大的固定巨噬細(xì)胞群，約占肝臟所有細(xì)胞總數(shù)的15%，占全身巨噬細(xì)胞總數(shù)的80%～90%[14]。Kupffer細(xì)胞具有吞噬微生物、清除內(nèi)毒素、攝取抗原并激發(fā)獲得性免疫的作用，它還能釋放過(guò)氧化氫(H2O2)、一氧化氮(NO)，將中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等炎性反應(yīng)細(xì)胞聚集在肝內(nèi)，并釋放炎癥因子TNF-α、IL-1、IL-6等[15-16]，引起肝臟炎性反應(yīng)。

mTOR是一種非典型絲/蘇氨酸蛋白激酶，主要通過(guò)與不同的適配子結(jié)合形成2種主要復(fù)合物：mTORC1和mTORC2。目前對(duì)mTORC1的研究更為深入，其在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用[17]。當(dāng)mTOR被激活時(shí)，其復(fù)合物可通過(guò)促進(jìn)脂肪及關(guān)閉分解代謝過(guò)程(如脂肪分解和β-氧化)來(lái)促進(jìn)TG的積累，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量增加[18-19]。研究證實(shí)，高脂飲食是NAFLD發(fā)病的重要誘導(dǎo)因素，攝入過(guò)高的脂肪可使mTOR通路處于持續(xù)激活狀態(tài)，導(dǎo)致mTORC1合成增加，促進(jìn)肝臟炎癥發(fā)生[20]。NAFLD大鼠mTORC1和TNF-α、IL-6、IL-5及IL-1β均處于高水平表達(dá)或分泌[21-23]，可見(jiàn)mTORC1是炎癥發(fā)生的關(guān)鍵靶向分子蛋白。

STAT3作為重要的轉(zhuǎn)錄因子，亦參與肝臟脂質(zhì)代謝，其在脂肪肝中激活顯著升高[24]。同時(shí)STAT3作為形成肝臟炎性微環(huán)境的重要炎癥介質(zhì)，其調(diào)控炎性反應(yīng)的機(jī)制日益受到醫(yī)學(xué)研究的重視[25-26]。研究表明，STAT3的異常表達(dá)及活化導(dǎo)致炎癥微環(huán)境的形成，促進(jìn)了脂質(zhì)積累，是發(fā)生NAFLD的關(guān)鍵因素[27]。Hye-Young Seo等[28]研究發(fā)現(xiàn)，在由脂多糖(LPS)誘導(dǎo)形成的NAFLD大鼠模型的肝組織中，炎癥病灶STAT3高表達(dá)，同時(shí)伴有IL-6、TNF-α、IL-1β的分泌量增加，使用咖啡豆醇可抑制STAT3的活化，進(jìn)而降低IL-6、TNF-α、和IL-1β的分泌，緩解NAFLD大鼠肝臟的炎性反應(yīng)。Fredholm S[29]研究表明，STAT3的高表達(dá)促進(jìn)了IL-5的分泌。此外，mTOR與STAT3關(guān)系密切，mTOR可抑制核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)信號(hào)通路，促進(jìn)STAT3的活化[30]，兩者相互作用以控制和優(yōu)化免疫反應(yīng)[31]。因此，選擇適當(dāng)?shù)乃幬镒钄鄊TORC1、STAT3靶點(diǎn)，抑制TNF-α、IL-1β、IL-5和IL-6分泌，對(duì)防治NAFLD意義重大。

中醫(yī)學(xué)無(wú)NAFLD這一病名，將其歸為脅痛、肝著、肝癖等范疇。中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病分會(huì)在《非酒精性脂肪性肝病中醫(yī)診療專家共識(shí)意見(jiàn)(2017)》中指出，NAFLD病因主要有飲食失衡、勞逸失度、情志不節(jié)等，病機(jī)以脾腎虧虛為主，主要病理因素是痰、濕、濁、瘀，在分期論治中，初期疏肝理氣、健脾和胃，中后期健脾益腎、化瘀散結(jié)，可見(jiàn)脾虛失運(yùn)是關(guān)鍵病機(jī)之一，健脾法貫穿始終[32-33]。參苓白術(shù)散出自《太平惠民和劑局方》，方中人參大補(bǔ)脾胃，白術(shù)、茯苓健脾滲濕，共為君藥。山藥、蓮子二藥助人參、白術(shù)健補(bǔ)中州，厚腸止瀉；白扁豆、薏苡仁既能健脾，又可滲濕，此四藥共為臣藥。佐以砂仁芳香醒脾行氣，暢達(dá)中焦氣機(jī)；桔梗宣通上焦肺氣，通利水道，有助健脾除濕之力。炙甘草和中，調(diào)和諸藥，為使藥。全方具有健脾、益氣、滲濕功效。

本研究結(jié)果提示，模型組大鼠肝臟脂質(zhì)蓄積及脂肪變性，存在嚴(yán)重的脂質(zhì)代謝紊亂，Kupffer細(xì)胞炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-5含量升高，mTORC1、STAT3 mRNA及蛋白表達(dá)上調(diào)。不同劑量參苓白術(shù)散干預(yù)后，大鼠脂質(zhì)代謝及炎性反應(yīng)有不同程度的減輕，mTORC1和STAT3 mRNA及蛋白表達(dá)下調(diào)，其中以參苓白術(shù)散高劑量組效果較為顯著，說(shuō)明參苓白術(shù)散改善肝臟脂肪沉積及炎性反應(yīng)可能與劑量有一定的相關(guān)性。

綜上所述，參苓白術(shù)散防治NAFLD，可能與抑制mTORC1、STAT3 mRNA及蛋白表達(dá)，減少炎癥介質(zhì)產(chǎn)生，改善肝細(xì)胞變性程度有關(guān)。