林聰

（溫州市中西醫(yī)結合醫(yī)院，浙江 溫州 325000）

80%的胃潰瘍和95%的十二指腸潰瘍與幽門螺旋桿菌（Helicobacterpylori，Hp）感染有關[1]。 全球人群Hp感染率可達50%以上，我國大樣本多中心調查顯示，地區(qū)Hp感染率約為59%[2]。Hp感染缺乏典型的臨床特征，早期發(fā)現(xiàn)及治療意義重大。目前，Hp常用的組織切片染色方式包括Warthin-Starry銀染色、Methylene blue染色、Giemsa染色、Genta染色、El Zimaity染色、免疫組化染色、HE染色等。本研究選擇常規(guī)組織切片的三種染色方法（美藍染色、免疫組化染色和Giemsa染色），并分析三者對胃Hp感染的檢測效能。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2018年6月-2019年6月行胃組織活檢患者107例，其中男58例，女49例；年齡 22-73 歲，平均（43.0±8.7）歲，全部病例均行14C尿素呼氣試驗。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 儀器：（1）輪轉式切片機（徠卡 RM2335）；（2）脫水機（HP300）；（3）烘箱；（4）數(shù)字切片掃描儀（C13220-01）；（5）免疫組化染色孵育盒（常州市飛勒斯儀器有限公司）。試劑：（1）美藍色染液 （Loeffler氏，XY0019，上海信裕生物科技）；（2）蘇木素-伊紅染液（H-E 鄭州萬華生物技術有限公司，BA4025）；（3）Giemsa 染液 （上海藍季科技發(fā)展有限公司，Giemsa stain，1:9，100mL）；（4）EDTA-2Na（河南業(yè)玖盛實業(yè)有限公司）；（5）小鼠抗人HP/Haptoglobin單克隆抗體（上海喬羽生物科技有限公司）；（6）山羊抗鼠二抗（上海西唐生物科技有限公司，C0306）；（7）DAB 染色液（國食藥監(jiān)械（進）字 2011 第 1402464 號，Dako Denmark A/S）。

1.2.2 方法 胃組織活檢標本取材于胃竇、胃角、胃體小彎及明顯病灶處，切片脫蠟，切片厚度3μm，每例制備樣本三份，分別用美藍染色、免疫組化染色和Giemsa染色進行染色，常規(guī)脫水、透明、封固[3]。（1）美藍染色組。加入美藍5g，充分攪拌后過濾，盛入避光密封染色缸，室溫保存。（2）免疫組化染色組。采用EnVision法染色，切片常規(guī)脫蠟至水后行微波抗原修復，PBS（0.05mol/L）清洗3次，每次3分鐘；滴加鼠抗Hp抗體，37℃孵育50分鐘，PBS清洗3次，每次3分鐘；滴加山羊抗鼠二抗，37℃孵育50分鐘，PBS清洗3次，每次3分鐘。滴加DAB顯色液約5分鐘，水洗，蘇木精復染細胞核，梯度乙醇脫水，中性樹膠封固。（3）Giemsa染色組。堿性品紅50mg溶于95%乙醇100mL中，再加入4%苯酚250mL及650mL蒸餾水充分混合。3%對苯二酚1mL與5%明膠15mL充分混合，顯影前5分鐘加入2%硝酸銀3mL混合[4]。三組在高倍鏡下讀取切片，Hp呈彎曲短桿狀，分布于胃黏膜凹陷內(nèi)部。Hp陽性標準：美藍染色法和免疫組化蘇木精染色法呈藍色，Giemsa染色法呈紅色。根據(jù)《慢性胃炎及上皮性腫瘤胃黏膜活檢病理診斷共識》[5]標準對結果進行判讀。

1.3 評價指標 （1）14C尿素呼氣試驗。14C正常值＜100（dpm/mmol CO2）為陰性，＞100 為陽性，提示 Hp感染可能。（2）Hp陽性金標準：參照《第四次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告》[6]，同一樣本14C尿素呼氣試驗、免疫組化與HE染色中至少2項檢測結果為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS22.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，采用配對設計，計量資料用（±s）表示，計數(shù)資料用百分率表示，采用Mcnemar檢驗和Kappa檢驗。

2 結果

本組按金標準診斷Hp感染陽性88例，陰性19例。三種染色法與金標準進行比較，免疫組化染色靈敏度最高（94.32%），美藍染色特異度最高（89.47%）；診斷效能免疫組化染色最高（Kappa值0.754），其次為美藍染色（Kappa值0.715）。詳見表1-2。

表1 三種染色方法的Hp診斷結果（n=107）

3 討論

我國幽門螺旋桿菌發(fā)病率已達40%左右，嚴重威脅民眾健康，早期檢測意義重大[7]。Hp檢測分為侵入性以及非侵入性。組織切片病理染色雖具有侵入性，但其靈敏度較高，在組織學診斷的同時可進行胃黏膜的病理診斷，對胃癌高?；颊叩闹委煼绞竭x擇以及預后判定都有一定的指導意義[8-9]。本研究選取組織切片三種常規(guī)染色方法，比較它們對Hp的檢測效能。結果顯示，免疫組化染色對Hp檢測效能與金標準一致性達到0.754，在三種染色方法中診斷效能最高；美藍染色表現(xiàn)出了較高的特異度（89.47%），而免疫組化染色則靈敏度更佳（94.32%），對檢測診斷意義更大。因此，臨床上可以選擇免疫組化染色來達到最佳的檢測效果，為早期診斷提供有力的依據(jù)。

表2 三種染色方法的診斷效能（n=107）