王 碩，申雨沐，俞天奇，李 望，王 薇，秦佳梅*

（通化師范學(xué)院·吉林通化·134002）

暴馬丁香樹皮入藥，有清肺化痰、止咳平喘、消炎、利尿等功能[1]。其嫩葉、枝條、花還可加工成保健茶，對呼吸系統(tǒng)具有很好的保健作用[2]。暴馬丁香含有多種天然活性成分[3]，其中黃酮類化合物有良好的抗氧化、抗過敏、抗炎癥、抑制細菌、抑制寄生蟲、保護心血管、防治心與腦血管疾病等作用[4]。本項目探究暴馬丁香葉中總黃酮的提取工藝，旨為充分利用暴馬丁香資源提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2018年春季采集的暴馬丁香葉，自然陰干，粉碎，過篩，裝袋備用。

1.2 方法

1.2.1 繪制蘆丁標準曲線

圖1 蘆丁標準曲線

用FA2004C電子天平精密稱取10mg蘆丁標準品 （沈陽鼎國生物技術(shù)有限公司，批號151008）于25mL容量瓶中，用70%乙醇定容至25mL，震蕩混勻，制得濃度為0.4mg/mL標準品母液。精密吸取0、0.5、1、1.5、2mL于10mL容量瓶中，分別加入70%乙醇2、1.5、1、0.5、0mL。 再均加入 0.3mL5%NaNO2溶液，靜置6min后加入0.3mL10%Al(NO3)3溶液，靜置6min，最后加入4mL4%NaOH溶液，用70%乙醇定容至刻度，靜置15min，形成紅色絡(luò)合物。用722s可見分光光度計在500nm[5]波長處測吸光度值。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，詳見圖1，并得回歸方程為y=9.58x+0.1028，R2=0.9994。在0.00～0.08mg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2.2 供試溶液配制與測定

參考王宇希[6]、姜玉梅[7]等人的實驗方法，將粉碎后的暴馬丁香葉2g置于250mL錐形瓶中，分別探究徑粒大?。?0、40、60、80、100 目）、液料比（1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35）、乙醇濃度（50%、60%、70%、80%）、超聲時間 （10、20、30、40、50min） 四個因素， 用 KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器在超聲功率為150W、恒定溫度50°C下，超聲提取50min，用SHZ-D(III)循環(huán)水式真空泵減壓過濾，收集濾液于50mL容量瓶中，用相應(yīng)濃度的乙醇進行定容，三次重復(fù)。精確吸取1mL，加純凈水稀釋到一定倍數(shù)后，取稀釋后的溶液1mL置于10mL容量瓶中，照2.1方法測定吸光度值，代入標準方程計算。

1.3 數(shù)據(jù)分析

所獲數(shù)據(jù)用Excel和Minitab19軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果分析

2.1 單因素實驗結(jié)果

圖2 徑粒大小對暴馬丁香總黃酮提取含量的影響

圖3 液料比對暴馬丁香總黃酮提取含量的影響

圖4 乙醇濃度對暴馬丁香總黃酮提取含量的影響

圖5超聲時間對暴馬丁香總黃酮提取含量的影響

圖2 表明材料顆粒越小提取效率越高，暴馬丁香總黃酮含量在材料過80目篩時提取率最高，達11.078mg/g。顆粒過大可能導(dǎo)致提取液不能充分的浸入。圖3示液料比在1∶15～1∶35范圍內(nèi)暴馬丁香總黃酮提取含量整體呈下降趨勢，當液料比在1∶15時暴馬丁香總黃酮提取含量最大為23.653mg/g，認為提取劑量大后可能導(dǎo)致其他雜質(zhì)浸出。圖4在乙醇濃度50%～80%范圍內(nèi)，暴馬丁香總黃酮提取含量先升后降，乙醇濃度在低于60%時，含量較可能因為浸潤性及溶解性較差[8]，當乙醇濃度過高時，可能會同時溶解出其他雜質(zhì)[9]，當乙醇濃度在70%時，暴馬丁香總黃酮提取含量最大為26.116mg/g。圖5隨著超聲時間的延長呈現(xiàn)上升后下降認為超聲時間過長可能會導(dǎo)致暴馬丁香葉中的總黃酮分解[10]，超聲時間在20min時暴馬丁香總黃酮提取含量最高為26.158mg/g。

2.2 正交實驗結(jié)果及分析

根據(jù)單因素實驗，以A徑粒大小、B液料比、C乙醇濃度、D超聲時間為考察，因素水平表見表1，按照四因素三水平設(shè)計L9（34）正交實驗設(shè)計，

表1 正交因素水平

表2 L9（34）正交實驗結(jié)果與分析

由表2可以得知影響暴馬丁香總黃酮提取因素是液料比＞料徑＞超聲時間＞液料比，優(yōu)化得到的最佳工藝條件為A2B1C3D3，即徑粒大小為60目，液料比為1∶15，乙醇濃度為 80%，超聲時間為 40min。

3 結(jié)論與討論

通過對暴馬丁香葉的徑粒大小、液料比、乙醇濃度、超聲時間四個單因素實驗，得出徑粒大小為80目時暴馬丁香總黃酮提取含量最高為11.078mg/g，液料比為 1∶15時暴馬丁香總黃酮提取含量最高為23.653mg/g，乙醇濃度為70%時暴馬丁香總黃酮提取含量最高為26.116mg/g，超聲取時間為20min時暴馬丁香總黃酮提取含量高為26.158mg/g。為探討其交互作用，采用正交實驗優(yōu)化得到的最佳工藝條件為徑粒大小為60目、料液比為1∶15、乙醇濃度為80%、超聲時間為40min。

關(guān)于暴馬丁香葉中的總黃酮的研究較少，不同生長期暴馬丁香葉中的總黃酮含量不同，五月份采收的暴馬丁香葉中總黃酮含量較高[13]。本項檢測結(jié)果與文獻[11、12]相近。本實驗沒有排除色素的干擾，還需進一步進行分離純化總黃酮[14]，以得到更精確的結(jié)果。暴馬丁香以樹皮入藥，從葉中提取總黃酮，可以更好的利用暴馬丁香資源。