羅 莎，趙 祺，#，郭月琴，，崔 友，李曉祥，任仙櫻，4*

（1.溫州大學生命科學研究院，浙江溫州325035；2.合肥市未來藥物開發(fā)有限公司，安徽合肥230000；3.浙江天瑞藥業(yè)有限公司，浙江瑞安325200；4.浙江省生物醫(yī)藥協(xié)同創(chuàng)新中心，浙江溫州325035）

溫莪術（溫郁金、片姜黃）是浙江省著名的道地藥材，為歷版《中國藥典》收載品種。姜科植物溫郁金根莖部分經(jīng)蒸煮干燥后的藥材為溫莪術（根莖部分經(jīng)切片干燥后的藥材為片姜黃，須根膨大部分經(jīng)蒸煮干燥后的藥材為溫郁金），其性味辛、苦、溫，歸肝、脾經(jīng)[1-2]，具行氣破血、消積止痛功效[3]，臨床用于治療疲瘕痞塊、瘀血經(jīng)閉、食積脹痛、早期宮頸癌等癥狀?，F(xiàn)代藥理研究顯示，莪術油為溫莪術主要活性成分，具有抗炎、抗腫瘤、抗早孕、抗菌、鎮(zhèn)痛、升高白細胞、保肝、抑制血小板聚集和抗血栓形成等作用[4-5]。莪術油的成分多為萜類及倍半萜衍生物，其抗菌、抗病毒等的主要成分是倍半萜類的莪術醇、莪術酮等[6]。因此可將莪術醇視為莪術油質量控制的標志性成分之一，以判斷其提取方法的優(yōu)劣。

通常揮發(fā)油的提取方法有水蒸氣蒸餾法、溶劑法、微波法、超臨界流體萃取法等[7]，現(xiàn)有文獻報道單一方法提取莪術油的工藝研究中僅以莪術油的提取量為主要評價指標，尚未見系統(tǒng)研究提取工藝對莪術油提取率及其質量的影響[8]。王曉慧等[9]研究了影響超臨界CO2萃取和水蒸汽蒸餾法中溫莪術揮發(fā)油提取的主要因素，這類以莪術油得率為提取方法優(yōu)劣指標評價的具有一定片面性[10]。超臨界CO2萃取法是通過超臨界流體提取出質量完好的有效成分，無溶劑殘留，但存在生產(chǎn)上一次性設備投入較大、提取時間較長等不足。水蒸氣蒸餾提取法中長時間的加熱甚至煮沸也可能會使莪術揮發(fā)油中的某些成分分解。因此，為了克服現(xiàn)有提取技術存在的缺點和不足，筆者以石油醚、正己烷、環(huán)己烷等為前處理提取溶劑，建立一種超聲波前處理-微波法提取莪術油工藝。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

DFT-200 粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）；超聲波清洗器（上海Branson 公司，SB2200）；DZF-6020 恒溫真空干燥箱（上海齊欣科學儀器有限公司）；HA201-40-48 型超臨界CO2萃取設備（江蘇南通華安公司）；1 000 mL DZHW 調溫型電熱套（北京永光明醫(yī)療儀器廠）；Agilent LC-1260 高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；BT125D 型電子天平（賽多利斯科學儀器北京有限公司）。

石油醚（廣州化學試劑廠）、正己烷（天津市北方天醫(yī)化學試劑廠）、環(huán)己烷（國藥集團化學試劑有限公司），試驗所用試劑均為分析純。

1.2 莪術油提取方法

1.2.1 超聲波前處理-微波法提取莪術油。取烘干的溫莪術切片，粉碎，過50 目篩，得到溫莪術粉末，加入不同質量比的有機溶劑，超聲處理30 min；通過減壓蒸餾除去70%的有機溶劑；加入不同倍數(shù)質量的水，200 W 微波提??；待提取完全后，收集油相，加入干燥劑干燥，減壓蒸餾除去剩余有機溶劑，得莪術油。1.2.2 超臨界CO2萃取法提取莪術油。在溫度65℃下，設定固定分離壓力為5 MPa，分離溫度為50℃，流量為22 L/h，萃取壓力為25 MPa，萃取2 h。

1.2.3 水蒸氣蒸餾法提取莪術油。待測物的粒度為10 目，料液比倍數(shù)設定為10 倍，提取9 h。

1.3 揮發(fā)油含量測定

利用HPLC 測定不同方法提取的揮發(fā)油中莪術醇含量。

1.3.1 色譜條件。色譜柱：Agilent-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈∶水（58∶42）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：210 nm；柱溫：25℃。莪術醇與其他成分能達到基線分離，理論塔板數(shù)以莪術醇計不低于3 500。

1.3.2 對照品溶液制備。精密稱取莪術醇對照品10.0 mg，置于100 mL 容量瓶中，以流動相定容，制得莪術醇對照品儲備液。

1.3.3 供試品溶液制備。取莪術油樣品0.2 g，精密稱定，置于250 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱重。超聲處理30 min，放冷，稱重，滴加甲醇補足減失的重量，制得供試品液。

1.3.4 精密度試驗。取同一批溫莪術供試液，連續(xù)進樣6 次進行測定，測定結果，計算RSD 值。所得RSD值為0.91%，表明該方法精密度良好。

1.3.5 重復性試驗。取同一批溫莪術樣品5 份，按供試品制備法制得待測供試品，進樣檢測，計算莪術醇含量，測定結果，計算RSD。所得RSD 值為2.51%，表明該方法的重現(xiàn)性良好。

1.3.6 穩(wěn)定性試驗。精密吸取同一供試品溶液（批號XXXX）各10 μL，按“1.3.1”項下色譜條件分別于0、2、4、6、8、12、18、24 h 進樣測定，測得莪術醇峰面積的RSD 為1.41%（n= 3），表明供試品溶液在24 h內基本穩(wěn)定。

1.3.7 加樣回收率試驗。稱取一已知含量的溫莪術樣品5 份，每份約0.1 g，精密稱重，每份樣品中分別加入莪術醇對照品1.4 mg，按供試品制備法制得待測供試品，進樣檢測。計算樣品的加樣回收率，結果平均回收率為99.57%，RSD 為3.10%。

1.3.8 樣品中莪術醇含量測定。分別取各法制備的莪術油樣品0.1 g，精密稱定，按供試品液制備方法制得待測供試品液，進樣檢測。

2 結果與分析

由表1～2 可知，采用超聲波前處理-微波法提取莪術油，最高提取率可達4.71%，其油中莪術醇的含量為3.31%，均高于超臨界CO2流體提取和水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)油含量和油中莪術醇的含量?？梢?，該提取方法具有提取率高、耗時短以及操作簡便等優(yōu)點。

表1 超聲前處理-微波法參數(shù)設置及提取率

表2 不同方法提取的莪術油及莪術醇含量的測定結果 %

3 結論

通過有機溶劑超聲處理藥材粉末，在超聲處理過程中實現(xiàn)物理破碎，使大部分揮發(fā)油在溶劑中溶解，然后除去有機溶劑，得到揮發(fā)油，測得收率可達3.5%～4.7%，最后利用HPLC 檢測其油中莪術醇的含量，測得莪術醇含量亦最高?？梢?，該試驗方法所需時間較短、成本較低，不需要一次性投入較大的設備，可用于規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。