王勇，賀曉龍，向雪，盧福山

（青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，青海 西寧 810003）

慢性氟中毒是由于動(dòng)物長(zhǎng)期攝取的氟化物超過(guò)正常的生理需要量而引起的中毒病。陳榮等［1］認(rèn)為氟中毒非骨相損傷主要是累及肝臟、腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)以及生殖系統(tǒng)。肝臟作為體內(nèi)主要的代謝器官，在儲(chǔ)存肝糖原、合成蛋白質(zhì)、解毒等方面起著非常重要的作用。大量研究表明，當(dāng)肝臟受損時(shí)，多項(xiàng)肝功能指標(biāo)會(huì)有不同程度的改變，且多集中于人和鼠［2-7］，尤其天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶是反映肝細(xì)胞有無(wú)受損以及嚴(yán)重程度的最重要指標(biāo)。有關(guān)慢性氟中毒綿羊肝功能指標(biāo)的研究甚少，大多數(shù)集中在人和大鼠方面的研究。因此，本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定疑似慢性氟中毒綿羊的血清肝功能指標(biāo)，了解氟對(duì)綿羊肝臟功能的損傷情況，為進(jìn)一步診斷和治療氟中毒病提供基本依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 供試動(dòng)物是來(lái)自青海省某地區(qū)的藏系綿羊?；疾【d羊臨床癥狀為精神沉郁，走動(dòng)緩慢，被毛無(wú)光澤，牙齒表面出現(xiàn)黃色或黃褐色斑點(diǎn)，門牙有一定的磨損。部分綿羊精神萎靡，時(shí)不時(shí)臥地不起，被毛粗亂，采食費(fèi)力，門齒磨損嚴(yán)重或缺失，臼齒齒面發(fā)黑，牙齒磨面凹凸不平。初步診斷為慢性氟中毒。

1.2 分組 將發(fā)病區(qū)綿羊根據(jù)牙齒狀況分為嚴(yán)重組和輕微組，嚴(yán)重組為牙齒色澤發(fā)黑發(fā)暗，門齒磨損嚴(yán)重，上下臼齒異常，齒列不整，咀嚼面凹凸不平，甚至出現(xiàn)脫落；輕微組為牙齒表面出現(xiàn)黃色或黃褐色斑點(diǎn)，牙面有一定的磨損。健康組綿羊處于離發(fā)病區(qū)10 km以外的地區(qū)，臨床健康，牙面白色且有光澤，牙齒完整無(wú)缺損。

1.3 血樣采集 用真空管采集血樣5 mL，立即送實(shí)驗(yàn)室，分離血清，備用。

1.4 測(cè)定項(xiàng)目與方法 采用南京建成生物工程研究所研制的試劑盒測(cè)定血清總蛋白（TP）和血清白蛋白含量（ALP），血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性（ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性（AST）；血清球蛋白（GLB）含量以總蛋白含量減去白蛋白含量計(jì)算；A/G為白蛋白與球蛋白之比。

1.5 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 21.0軟件對(duì)測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，以樣本數(shù)（n）、平均數(shù)（x）±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）表示，用t檢驗(yàn)檢測(cè)顯著性。

2 結(jié)果

2.1 慢性氟中毒綿羊血清蛋白質(zhì)指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果 由表1 可見(jiàn)，總蛋白在各組間差異不顯著（P＞0.05），嚴(yán)重組和輕微組的白蛋白含量、A/G均顯著低于健康組（P＜0.05），而球蛋白含量極顯著高于健康組（P＜0.01）。

表1 血清蛋白質(zhì)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果 g/L

2.2 慢性氟中毒綿羊血清轉(zhuǎn)氨酶活性的測(cè)定結(jié)果 由表2 可知，健康組和輕微組的血清ALT 活性差異不顯著（P＞0.05），但極顯著低于嚴(yán)重組（P＜0.01），而AST活性在健康組和嚴(yán)重組間差異不顯著，但高于輕微組（P＜0.05）。

表2 血清中肝損傷指標(biāo)測(cè)定結(jié)果 U/L

3 討論

3.1 肝臟是蛋白質(zhì)代謝的主要器官，白蛋白由肝細(xì)胞合成。王昱等［6］認(rèn)為，血清白蛋白含量降低程度與肝臟合成功能損害程度呈正相關(guān)，故血清白蛋白含量的高低可以作為診斷肝硬化及預(yù)后的判斷指標(biāo)。在本試驗(yàn)中，慢性氟中毒輕微組和嚴(yán)重組綿羊的白蛋白含量顯著低于健康組（P＜0.05），提示患病綿羊肝臟受到損傷，肝細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的功能減退，導(dǎo)致白蛋白合成受阻。姬艷平［8］從體液免疫方面探討了血清球蛋白檢測(cè)對(duì)慢性重型肝炎預(yù)后的臨床意義，發(fā)現(xiàn)血清球蛋白超出正常值范圍或是低于正常值范圍時(shí)，均意味著機(jī)體免疫力出現(xiàn)異常。侯紅麗等［9］經(jīng)細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)證實(shí)，長(zhǎng)時(shí)間氟暴露將會(huì)引起大鼠白細(xì)胞數(shù)量減少，功能下降，細(xì)胞的免疫功能受到抑制。本試驗(yàn)中，慢性氟中毒輕微組和嚴(yán)重組綿羊的球蛋白含量不僅沒(méi)有降低，反而極顯著高于健康組（P＜0.01），這是否與患病綿羊處于免疫應(yīng)激狀態(tài)有關(guān)還需要進(jìn)一步探索。

3.2 ALT 和AST 是反映肝功能損傷的最敏感指標(biāo)，測(cè)定血清中的轉(zhuǎn)氨酶活性有助于病情估計(jì)、療效觀察和預(yù)后判斷［8］。由本試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，慢性氟中毒綿羊輕微組和嚴(yán)重組的血清ALT活性明顯高于健康組，意味著患病羊肝細(xì)胞被破壞，細(xì)胞膜通透性增加，導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)ALT釋放入血，引起血清ALT升高。AST活性在嚴(yán)重組與健康組綿羊間無(wú)差異性（P＞0.05），但均高于輕微組（P＜0.05）。出現(xiàn)此現(xiàn)象的可能原因是發(fā)病初期氟抑制了AST活性，隨著病程發(fā)展，機(jī)體產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)，使AST酶活性增強(qiáng)，加快谷氨酸和草酰乙酸之間的轉(zhuǎn)氨作用，以維持肝細(xì)胞膜的正常功能。