劉若思， 趙曉麗， 徐淼鋒

1北京海關(guān)技術(shù)中心，北京 100026； 2拱北海關(guān)技術(shù)中心，廣東 珠海 519001

多孔曼粉蚧Maconellicoccusmultipori(Takahashi, 1951)，異名HeliococcusmultiporiTakahashi，Phenacoccusmultipori(Takahashi)， (湯祊德,1992; Miller,1974; Takahashi,1951)，屬昆蟲綱Insecta半翅目Hemiptera粉蚧科Pseudococcidae曼粉蚧屬M(fèi)aconellicoccus。該蟲廣泛分布于東南亞地區(qū)，在英國和美國的口岸曾多次截獲，有明確觀察記錄地區(qū)包括印度、馬來西亞、尼泊爾、菲律賓和泰國(Williams,2004)。國內(nèi)尚無分布記錄(王子清，2001)。該蟲為多食性昆蟲，寄主包括楊桃AverrhoacarrambolaL.、無患子科雞木屬Alectryonsp.、可可TheobromacacaoL.、藤黃屬Garciniasp.、血桐屬M(fèi)acarangaspp.、白顏樹屬的GironnieraparvifoliaPlanch、鐘花科的Ryparosasp.、新烏檀屬Neonaucleasp.、胡椒屬的PiperbetelL.、P.nigrumL.、榴梿Duriosp.及紅毛丹NepheliumlappaceumL.。此蟲可生活在多種植物根部，易隨土壤傳播，也常生活在多種水果及其他經(jīng)濟(jì)作物的表面。

2019年7月，北京口岸從泰國進(jìn)口的紅毛丹果實(shí)表皮中檢出活體粉蚧，經(jīng)DNA比對(duì)為多孔曼粉蚧。經(jīng)動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫信息資源共享服務(wù)平臺(tái)查詢，該種為我國口岸首次檢出(中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院，2019)。該種廣泛分布于東南亞地區(qū)，曾多次在歐洲和美國的口岸被截獲。我國口岸曾大量檢出過木槿曼粉蚧Maconellicoccushirsutus(Green)，由于該種形態(tài)學(xué)與木槿曼粉蚧十分相似且在亞洲的地理分布相近，國內(nèi)檢出的木槿曼粉蚧有被錯(cuò)誤鑒定的可能。該種雖無明確的嚴(yán)重危害記錄，但作為同屬的木槿曼粉蚧是一種可危害多種經(jīng)濟(jì)作物并已入侵我國的農(nóng)林業(yè)害蟲(劉丹竹等，2016)，木槿曼粉蚧的生物學(xué)特征及危害對(duì)本種有一定的借鑒意義，本種也同樣具有潛在的入侵風(fēng)險(xiǎn)和檢疫意義。

本文對(duì)該種的分子及形態(tài)鑒定方法等方面進(jìn)行了介紹，并匯總了曼粉蚧屬的口岸截獲情況，以期為相關(guān)部門對(duì)其進(jìn)行檢疫鑒定提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

泰國進(jìn)口的紅毛丹果實(shí)表皮中檢出的活體粉蚧。

1.2 鑒定方法

取1頭雌成蟲(樣品編號(hào)為3576)用于DNA提取，提取方法引用廖力等(2012)的提取步驟。擴(kuò)增COI片段引物序列分別為PcoF1和LepR1，PCR擴(kuò)增條件參考Parketal.(2011)的方法；PCR反應(yīng)中的引物及試劑均來自大連寶生物公司(Takara)，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測(cè)有目標(biāo)擴(kuò)增片段后送上海生工(Sangon)進(jìn)行正反向測(cè)序。測(cè)序結(jié)果采用MEGA 7軟件(Kumar,2016)進(jìn)行校對(duì)和拼接，去除兩端引物序列，獲得長(zhǎng)度為649 bp的DNA條形碼序列。將序列在Genbank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行相似性比對(duì)分析，依據(jù)相似性的高低和形態(tài)近似種類，收集木槿曼粉蚧、木瓜秀粉蚧ParacoccusmarginatusWilliams & Granara、南洋臀紋粉蚧Planococcuslilacinus(Cockerell)、熱帶拂粉蚧Ferrisiamalvastra(McDaniel)、榕樹粉蚧PseudococcusbaliteusLit、扶桑綿粉蚧PhenacoccussolenosisTinsley的COI序列片段。利用MEGA7軟件的鄰接法(neighbor-joining method， NJ)對(duì)截獲樣品和數(shù)據(jù)庫中獲取的DNA條形碼序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，系統(tǒng)樹各分支置信度(bootstrap)均進(jìn)行1000次重復(fù)檢驗(yàn)。以扶桑綿粉蚧為外群構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

2 結(jié)果與分析

2.1 分子特征比對(duì)

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，截獲樣品與多孔曼粉蚧聚在同一分支，其置信度為100%，且與木槿曼粉蚧及其余粉蚧明顯分開(圖1)。將序列上傳至GenBank 中進(jìn)行Blast 相似性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與序列號(hào)為KY372754 的多孔曼粉蚧COI 序列達(dá)到99%一致。結(jié)合形態(tài)特征、GenBank 比對(duì)結(jié)果及構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹，判斷截獲樣品為多孔曼粉蚧M.multipori。文中所得的COI 序列已上傳至GenBank數(shù)據(jù)庫，登錄號(hào)為(MN306287)。

圖1 基于鄰接法(NJ)構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹

2.2 形態(tài)特征

2.2.1 曼粉蚧屬雌成蟲 顯微鏡下的玻片標(biāo)本呈長(zhǎng)橢圓形。觸角9節(jié)(除澳洲的一種為7～9節(jié))。眼在其后近頭緣。足正常，爪無齒；后足基節(jié)和腿節(jié)分布小透明孔。尾瓣硬化棒存在，通常寬且在端部略擴(kuò)大。背面和腹面的剛毛鞭狀，有時(shí)厚。刺孔群通常1～7對(duì)，每個(gè)刺孔群具一對(duì)圓錐形剛毛，僅在腹部出現(xiàn)，有時(shí)前端一對(duì)刺孔群剛毛變細(xì)。背孔存在或消失。腹臍存在或消失。蕈狀腺存在于背面和腹面，有時(shí)管部略退化；領(lǐng)狀腺至少在腹面存在。多孔腺在腹面存在。三孔腺在背面和腹面均勻存在。

本屬是一個(gè)小屬，已知9種，東洋區(qū)3種，澳洲區(qū)6種。我國已知分布2種(王子清，2001)。該屬的雌成蟲檢索表，可參見Williams (1996)和木槿曼粉蚧檢疫鑒定方法(全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì),2016)。

2.2.2 多孔曼粉蚧雌成蟲 玻片標(biāo)本(圖2)：長(zhǎng)2.8 mm，寬1.8 mm。尾瓣中度發(fā)達(dá)或略退化，腹面具硬化棒及212～250 μm的端部剛毛。觸角9節(jié)，通常360～410 μm長(zhǎng)，短者僅有280～290 μm。足正常，后足轉(zhuǎn)節(jié)+腿節(jié)通常230～280 μm，偶有200～230 μm；后足脛節(jié)+跗節(jié)通常250～300 μm，偶有210～220 μm；爪33～37 μm。后足脛節(jié)+跗節(jié)與后足轉(zhuǎn)節(jié)+腿節(jié)長(zhǎng)度的比值為1.00～1.16。后足脛節(jié)與后足跗節(jié)長(zhǎng)度的比值為1.70～2.00。后足腿節(jié)和脛節(jié)具透明孔。腹臍缺如。背孔正常，內(nèi)緣輕度到中度骨化，孔瓣上具一些三孔腺，通常后背孔后緣無剛毛，前背孔前后緣及后背孔前緣具1～3根剛毛。肛環(huán)寬75～85 μm，具6根剛毛，每根剛毛128～140 μm。刺孔群4對(duì)，分布在腹部末端體節(jié)。每個(gè)尾瓣的膜質(zhì)區(qū)具2根約12.5 μm圓錐狀剛毛及6～7個(gè)三孔腺。前端的刺孔群相似，偶然情況下第五腹節(jié)上的刺孔群剛毛為鞭狀。

背面表面具15～50 μm長(zhǎng)的鞭狀剛毛，偶有可達(dá)77 μm長(zhǎng)。多孔腺缺如。三孔腺均勻分布。單孔腺少而稀疏。蕈狀腺直徑約6.25 μm，長(zhǎng)11.25～12.50 μm；管部長(zhǎng)約10.0 μm，分布在各個(gè)體節(jié)，邊緣分布較多。領(lǐng)狀腺通常缺，偶有腹部具單個(gè)領(lǐng)狀腺的個(gè)體。

腹面表面鞭狀剛毛正常。多孔腺直徑約7.5 μm，僅分布在腹部，不達(dá)邊緣；在第六腹板后緣形成1～2橫排，個(gè)別個(gè)體出現(xiàn)在第五腹板后緣。三孔腺均勻分布。單孔腺稀疏。蕈狀腺與背面相似，位于胸部和腹部前面的邊緣。領(lǐng)狀腺有2種大小，大者直徑如三孔腺大小，長(zhǎng)度約10 μm，通常具弱化的管部，廣泛分布于腹部后面體節(jié)的后緣和邊緣；小者直徑小于三孔腺長(zhǎng)約7.5 μm，廣泛分布于腹部中部體節(jié)，及頭和胸的中部。

目前并未有雄性成蟲的記錄。

在東洋區(qū)曼粉蚧屬有3種：木槿曼粉蚧、柯曼粉蚧M.pasaniae(Borchs.)和本種多孔曼粉蚧。多孔曼粉蚧與木槿曼粉蚧十分相似，區(qū)別在于前者缺腹臍，領(lǐng)狀腺在體腹面；而后者具腹臍，領(lǐng)狀腺在體兩面都有；另外多孔曼粉蚧的蕈狀腺(直徑6.25 μm)較木槿曼粉蚧(直徑4～5 μm)要大。多孔曼粉蚧區(qū)別于柯曼粉蚧的特征為刺孔群4對(duì)；而后者刺孔群5～6對(duì)。

圖2 多孔綿粉蚧雌成蟲形態(tài)特征圖(根據(jù)Williams,1996修改)

2.3 我國曼粉蚧屬的截獲情況

經(jīng)“動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫信息資源共享服務(wù)平臺(tái)”查詢，2003年1月—2019年7月，中國海關(guān)檢疫系統(tǒng)檢出曼粉蚧屬近萬批次，除個(gè)別未鑒定到種外，其余全部為木槿曼粉蚧，寄主多為熱帶水果(龍眼DimocarpuslonganLour.、荔枝LitchichinensisSonn.、火龍果HylocereusundatusBritt居多)，來源則主要為與我國接壤的東南亞鄰國(越南、老撾居多)。并未檢出過曼粉蚧屬的其他種類。本次檢出的多孔曼粉蚧為我國口岸首次檢出。

3 討論

現(xiàn)有資料表明，多孔曼粉蚧廣泛分布于東南亞地區(qū)，已被認(rèn)定為是一種入侵性有害生物(Williams，2004)，但在我國并無分布。該種曾多次在歐洲和美國的口岸被截獲，如美國洛杉磯機(jī)場(chǎng)在雞木屬(無患子科)、藤黃屬植物中檢出，圣弗朗西斯科機(jī)場(chǎng)在胡椒、榴梿中檢出，西雅圖機(jī)場(chǎng)在新烏檀屬植物中檢出，英國口岸在楊桃、可可中檢出；來源國則多為泰國和馬來西亞，該兩國也是我國在東南亞進(jìn)行水果貿(mào)易的大國。此蟲由于生活在多種植物根部，易隨土壤傳播，尤其是跨境種苗調(diào)運(yùn)時(shí)易隨植物根部及土壤傳播。另外也常生活在多種水果及其他經(jīng)濟(jì)作物的表面，如紅毛丹、榴梿、可可等，這些易隨跨境水果貿(mào)易及旅客隨身攜帶物入境。因此，為防止該蟲入侵我國，需在東南亞水果、種苗的調(diào)運(yùn)過程及東南亞航班旅客攜帶物方面進(jìn)行重點(diǎn)查驗(yàn)，將該蟲阻隔于國門之外。

本研究應(yīng)用DNA條形碼技術(shù)成功鑒別多孔曼粉蚧。多年來，由于粉蚧鑒定資料匱乏、專業(yè)人才缺乏等難題，導(dǎo)致各口岸截獲的樣品其鑒定結(jié)果往往只能到科或?qū)伲^難到具體種類。所截獲樣品與木槿曼粉蚧在形態(tài)特征上極為相似，不易區(qū)分，通過測(cè)定樣品的COI基因片段序列，經(jīng)比對(duì)分析與近似種木槿曼粉蚧在分子序列上存在較大差異，通過構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹顯示該蟲應(yīng)該為多孔曼粉蚧。因此，建議在用形態(tài)學(xué)進(jìn)行鑒定的同時(shí)，可用DNA條形碼進(jìn)行比對(duì)輔助鑒定，提高鑒定準(zhǔn)確率。