何韻秋，劉 程，陸琴月，葉均安，徐寧寧*

（1.浙江大學動物科學學院，浙江杭州 310058；2.嘉興匯欣農(nóng)業(yè)有限公司，浙江嘉興 314300）

草畜轉(zhuǎn)型政策促進了我國肉羊養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展，消費升級引起的羊肉供給缺口，大量研究集中于肉羊的快速育肥[1]。顆?；旌先占Z（Pelleted Total Mixed Ration，PTMR）的推廣應用可顯著提高肉羊生長性能，減少人工和儲存成本；但是PTMR 降低了瘤胃pH[2]，增加瘤胃酸中毒的風險，影響動物酸堿平衡[3]。瘤胃是反芻動物主要的消化器官，絕大多數(shù)的碳水化合物和蛋白質(zhì)在瘤胃中被降解，尤其是淀粉等精料物質(zhì)快速降解引起瘤胃pH 迅速降低，導致瘤胃功能紊亂[4]，進而影響動物健康和生長性能。反芻動物采食粗飼料，尤其是物理有效性纖維（Physically Effective Neutral Detergent Fiber，peNDF）對于穩(wěn)定瘤胃pH、維持正常功能具有重要作用。但是PTMR 中缺少peNDF 的刺激，因此在PTMR 推廣應用中，如何在缺失peNDF 條件下維持瘤胃穩(wěn)態(tài)和動物健康成為研究熱點。益生菌能夠改善瘤胃微生態(tài)平衡[5]，抑制宿主腸道病原微生物的增殖[6]，提高營養(yǎng)物質(zhì)消化率，并且作為飼料添加劑對各類動物具有顯著促生長作用[7]。目前為止，尚未有探究PTMR 中添加益生菌對肉羊生長性能的影響報道。本試驗旨在探究復合益生菌不同添加量對生長期湖羊生長性能、營養(yǎng)物質(zhì)消化率及血液生化指標的影響，為優(yōu)化PTMR 應用提供新的數(shù)據(jù)支撐和實踐參考。

1 材料與方法

1.1 試驗設計 選擇體重（18.1±1.8）kg 的生長期公湖羊60 只，隨機分成4 組，每組15 只，分別飼喂含有0、1、2、3 g/kg（干物質(zhì)計算）復合益生菌的PTMR，其中0 g/kg組為對照組。復合益生菌由浙江大學研制，為灰褐色粉狀物，主要包含地衣芽孢桿菌（≥2.0×109CFU/g）、枯草芽孢桿菌（≥2.0×109CFU/g）和米曲霉（≥2.0×104CFU/g）。

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗于2018 年10 月—12 月在嘉興匯欣農(nóng)業(yè)有限公司進行，預試期7 d，正試期45 d。預試期每天每只湖羊定量飼喂顆粒料700 g，正試期各組湖羊自由采食和飲水。顆粒飼料由浙江科盛飼料股份有限公司加工，PTMR 組成和營養(yǎng)成分見表1。

1.3 指標測定及方法

1.3.1 生長性能 試驗開始前連續(xù)2 d 空腹稱重，作為初始體重；試驗結(jié)束時連續(xù)2 d 空腹稱重，計算平均日增重（Average Daily Gain，ADG）。記錄試驗期間各組湖羊顆粒料采食量，計算平均采食量（Average Daily Feed Intake，ADFI）。試驗期湖羊ADFI 與ADG 的比值為耗料增重比（F/G）。

表1 生長期湖羊PTMR 飼糧組成和營養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3.2 表觀消化率 試驗結(jié)束前5 d 連續(xù)收集全部糞樣，記錄重量。每天混勻后采集500 g 糞樣，65℃烘干后40目篩粉碎。日糧和糞樣的干物質(zhì)（Dry Matter，DM）和粗蛋白質(zhì)（Crude Protein，CP）參考張麗英[8]方法測定，中性洗滌纖維（Neutral Detergent Fiber，NDF）和酸性洗滌纖維（Acid Detergent Fiber，ADF）按Van Soest等[9]的方法測定。

養(yǎng)分表觀消化率=[（攝入養(yǎng)分量－排出養(yǎng)分量）/攝入養(yǎng)分量]×100%

1.3.3 血液生化指標 試驗期最后一天，每組選取8 只試驗羊，晨飼前采集頸靜脈血液5 mL，3 000×g 離心15 min 制備血清，并于-20℃保存。采用全自動生化儀測定總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLOB）、血清尿素氮（BUN）、葡萄糖（GLU）、肌酐（CREA）、堿性磷酸酶（ALP）和超氧化物歧化酶（SOD），生化試劑盒購置于中山標佳生物科技有限公司。

1.4 統(tǒng)計分析 采用Excel 2013 初步整理試驗數(shù)據(jù)，用SAS 軟件（9.0）中Proc Mixed 模型進行方差分析，Tukey 進行多重比較，以P＜0.05 代表差異顯著，P＜0.01 代表差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 復合益生菌對湖羊生長性能的影響 由表2 可知，ADG 和F/G 隨復合益生菌添加量的提高呈二次性變化趨勢（P＜0.01）。1 g/kg 和 2 g/kg 組 ADG 比對照組和3 g/kg 組高出約10%（P＜0.05），而F/G 顯著低于對照組和3 g/kg 組，飼料轉(zhuǎn)化效率顯著提高；1 g/kg 和2 g/kg 組ADG 和 F/G 無差異，3 g/kg 組與對照組 ADG 和 F/G無差異。

2.2 復合益生菌對湖羊養(yǎng)分表觀消化率的影響 由表3可知，DM 和CP 表觀消化率隨復合益生菌添加量呈二次性變化趨勢（P＜0.01）。1 g/kg 組DM 表觀消化率高于對照組（P＜0.05），3 g/kg 組低于對照組（P＜0.05）；2 g/kg 組CP 表觀消化率高于對照組（P＜0.05），但1 g/kg 和3 g/kg 組與對照組無差異。復合益生菌添加量對NDF 和ADF 消化率無影響。

2.3 復合益生菌對湖羊血液生化指標的影響 由表4 可知，TP、GLOB 和A/G 隨復合益生菌添加量提高呈二次性變化趨勢（P＜0.01）。1 g/kg 組 TP 和 GLOB 濃度顯著高于其余各組，且2 g/kg 和3 g/kg 組TP 和GLOB濃度無差異。白蛋白與球蛋白比值（A/G）在1 g/kg組最低（P＜0.05），表明機體免疫功能提高。1 g/kg組 BUN 含量顯著高于 3 g/kg 組（P＜0.05），而血清ALB、GLU、CREA、ALP 和SOD 含量不受復合益生菌添加量的影響。

表2 不同添加量復合益生菌對湖羊生長性能的影響

表3 不同添加量復合益生菌對湖羊養(yǎng)分表觀消化率的影響 %

表4 不同添加量復合益生菌對湖羊血液生化指標的影響

3 討 論

3.1 不同劑量復合益生菌對湖羊生長性能的影響 益生菌的作用原理在于調(diào)控瘤胃內(nèi)環(huán)境，提高飼料瘤胃降解率。楊華等[10]試驗發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)日糧中添加0.5 g/kg 和1 g/kg 分離自羊瘤胃液的芽孢桿菌和雙歧桿菌顯著提高了肉羊ADG，降低F/G。吳家泉等[11]研究發(fā)現(xiàn)酵母菌、乳酸菌和枯草芽胞桿菌組成的微生態(tài)制劑顯著提高了肉羊ADFI 和ADG，提高飼料轉(zhuǎn)化率。但Rodríguez 等[12]研究發(fā)現(xiàn)地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌制成的復合菌對羊只體重沒有影響。因此復合益生菌對肉羊生長性能的改變受到復合益生菌菌種和添加劑量的影響，其原因可能是不同益生菌之間存在協(xié)同或者拮抗作用。Zerby等[13]研究發(fā)現(xiàn)在干物質(zhì)采食量相同的情況下，日糧添加米曲霉培養(yǎng)物提高了肉羊ADG。本試驗結(jié)果顯示，在PTMR 日糧中添加1 g/kg 和2 g/kg 的芽孢桿菌和米曲霉益生菌復合菌顯著提高ADG 和飼料轉(zhuǎn)化率，但是3 g/kg 復合益生菌添加組與對照組無顯著差異，表明復合益生菌對湖羊生長性能的影響存在明顯的劑量相關(guān)性。3 g/kg 組飼料轉(zhuǎn)化效率和ADG 均與對照組無差異，可能原因是該復合益生菌添加量過高，反而造成養(yǎng)分降解率降低[14]，最終引起ADG 降低，故生長期湖羊PTMR 日糧中芽孢桿菌和米曲霉復合菌的適宜添加量為1～2 g/kg。

3.2 不同劑量復合益生菌對湖羊養(yǎng)分表觀消化率的影響益生菌能夠調(diào)節(jié)瘤胃發(fā)酵，并且有些益生菌還能夠分泌外源降解酶，促進日糧瘤胃降解。芽孢桿菌是反芻動物生產(chǎn)中常用的益生菌，能夠產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶、磷脂酶，促進動物對營養(yǎng)物質(zhì)的降解[7]。米曲霉培養(yǎng)物在有效促進瘤胃細菌生長的基礎(chǔ)上，還能促進真菌生長，提高纖維素酶、木聚糖酶、羧甲基纖維素酶和淀粉酶的活性，促進瘤胃發(fā)酵、揮發(fā)性脂肪酸形成和微生物蛋白合成[15]。肖怡等[16]研究表明，地衣芽孢桿菌可顯著提高45 kg 的杜× 寒雜交成年羯羊DM、NDF 和CP 表觀消化率，但Rodríguez 等[12]試驗表明地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌制成的復合菌對羊的DM 及CP 消化率沒有影響，對NDF 消化率有提高的趨勢。添加米曲霉能夠提高瘤胃體外DM、CP、NDF 消化率，米曲霉添加量≥1.2×106CFU/mL 時達到顯著效果[17]。本試驗發(fā)現(xiàn)，PTMR 中添加復合益生菌提高了DM 和CP 降解率，但是對NDF 消化率無影響，可能原因是本試驗所用菌種不同，另一方面顆粒飼料中長纖維含量較低，益生菌提高NDF 消化率的作用效果可能受限，有待進一步研究。

3.3 不同劑量復合益生菌對湖羊血液生化指標的影響芽孢桿菌屬于好氧或兼性厭氧菌，進入腸道后會迅速消耗氧氣，營造腸道厭氧環(huán)境，抑制有害菌生長，而且芽孢代謝產(chǎn)物中含有多肽類抗菌物質(zhì)，能顯著抑制病原菌的生長，因此芽孢桿菌具有很好的提高動物免疫力、抗氧化功效[18]。Antunovic 等[19]研究發(fā)現(xiàn)地衣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌制成的復合菌降低了血清甘油三酯濃度以及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和肌酸激酶的活性，提高了GLU 和ALP 含量，促進了羔羊代謝活動。本研究發(fā)現(xiàn)，1 g/kg 的復合益生菌添加量顯著提高了血清TP、GLOB 濃度，降低A/G，提高生長期湖羊免疫能力，與Hussein 等[20]研究結(jié)果相同。但大部分試驗表明，益生菌對血液生化指標沒有影響[21]。張志軍等[22]發(fā)現(xiàn)復合益生菌提高了哈薩克綿羊血清GLOB 濃度，但是對TP 濃度無顯著影響。添加益生菌可以增強瘤胃細菌的活性，從而提高氮的利用效率，降低BUN 濃度[23]，但是本試驗發(fā)現(xiàn)1 g/kg 復合益生菌組血清BUN 濃度顯著高于3 g/kg 復合益生菌添加組，其余各組間無顯著差異，間接表明益生菌對瘤胃微生物活性的影響存在明顯的劑量效應。ALP 是反映肝功能的重要指標。本研究發(fā)現(xiàn)添加復合益生菌對血清ALP 濃度無影響，表明復合益生菌對生長期湖羊肝功能無影響。

4 結(jié) 論

本試驗條件下，生長期湖羊PTMR 中復合益生菌的適宜添加量為1 g/kg，可顯著提高生長期湖羊ADG，顯著提高DM 和CP 降解率，降低F/G，提高飼料轉(zhuǎn)化效率；提高血清TP 和GLOB 濃度，降低A/G，增強生長期湖羊的抗病力。