馮 潔，楊 敏，楊立軒，韋 妮，黃繼杰，莫 庸，凌秀孟，周世友，黃鎖義，2

（1.右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院廣西高校右江流域特色民族藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 百色 533000）

皂角籽系豆科皂莢是植物皂角(Gleditsiasinensis Lam.)的種子[1]，含有生物堿、黃酮及甙類、皂甙、揮發(fā)油及油脂、氨基酸和蛋白質(zhì)等[2]。目前，天然黃酮類抗氧化劑在保健、醫(yī)藥、食品、化妝品等領(lǐng)域的應(yīng)用日益廣泛，已成為新的研究熱點(diǎn)之一,抗氧化活性研究已成為保健食品和藥品評價(jià)的重要內(nèi)容[3-5]。

自由基是機(jī)體氧化反應(yīng)中產(chǎn)生的有害化合物，具有強(qiáng)氧化性，會(huì)損害機(jī)體的組織和細(xì)胞，引起慢性疾病及衰老[6]。體內(nèi)過量的自由基，與衰老、腫瘤、心血管疾病、免疫功能低下等多種疾病的關(guān)系密切[7]?；瘜W(xué)合成抗氧化劑伴隨有腎毒性、潛在致突變、致畸等安全問題，因此開發(fā)利用有天然抗氧化活性的植物，成為食品科學(xué)研究發(fā)展的方向[8]。

黃酮類化合物具有多種生物學(xué)作用，如抗炎抑菌、抗氧化、降血糖、降血脂、抗癌、抗腫瘤及增強(qiáng)免疫力等，安全無毒，已在醫(yī)藥、食品加工等方面得到廣泛應(yīng)用[9-10]。

超聲波提取對藥材的破碎過程是一個(gè)物理過程，能保證被浸提的生物活性物質(zhì)在短時(shí)間內(nèi)保持不變，同時(shí)提高了藥材破碎的速率，縮短了藥材破碎的時(shí)間，可以極大提高藥材的提取效率[11-12]。超聲技術(shù)應(yīng)用于提取皂角籽中黃酮類物質(zhì)的研究尚未見報(bào)道，為此，本實(shí)驗(yàn)用超聲波乙醇浸提法提取皂角籽中的總黃酮，對產(chǎn)品進(jìn)行鑒別，并研究總黃酮的體內(nèi)抗氧化作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 材料

皂角籽。普通級(jí)小白鼠，50 只雌性各半，質(zhì)量18～22g［動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（桂）2012-0003］。

1.2 試劑盒

過氧化氫酶（CAT）試劑盒、總超氧化物歧化酶（T-SOD）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）試劑盒及考馬斯亮藍(lán)蛋白定量試劑盒等。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 皂角籽總黃酮提取液的制備

準(zhǔn)確稱取皂角籽10g，粉碎，稱取皂角籽粉末約6g，加入95%乙醇80mL，超聲波提取2.5h，抽濾。濾渣再加95%乙醇80mL，超聲波提取2.5h，抽濾。合并2 次濾液，減壓回收乙醇，至濾液僅剩5～7mL，放置于100mL 容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得到皂角籽黃酮提取液。

2.2 動(dòng)物分組及給藥

取小鼠50 只，質(zhì)量18～22g，雌雄各半，隨機(jī)分為正常組、陽性組、高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組10 只。低劑量組、中劑量組、高劑量組分別按灌胃量0.15、0.3、0.6g·kg-1，每天灌胃1 次。陽性組給予維生素C，灌胃量為0.03g·kg-1，正常組給予生理鹽水。各組均連續(xù)給藥14d。

2.3 血清及肝、腦組織勻漿的制備

實(shí)驗(yàn)?zāi)┐谓o藥24h 后，眼球采血，血液室溫放置30 min 后，3500 r·min-1離心15min，分離上層血清備用。眼球取血后，頸椎脫臼法處死，迅速剝離肝臟和腦組織，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗數(shù)次，制成10%的組織勻漿，3500r·min-1離心10min，取上清液備用。

2.4 抗氧化指標(biāo)的測定

小鼠血清的T-SOD、MDA，腦組織、肝組織的T-SOD、MDA、CAT、GSH-Px 及蛋白含量的檢測，均按相應(yīng)的試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理

用SPSS 22 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，多組間比較采用單因素方差分析，當(dāng)P＜0.05時(shí)，為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 皂角籽總黃酮提取液對小鼠血清中T-SOD 活性和MDA 水平的影響

與正常組相比，陽性組、中劑量組、高劑量組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，低劑量組與正常組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果(表1)表明，皂角籽總黃酮提取液可以提高小鼠血清中的T-SOD 活性，降低體內(nèi)過氧化產(chǎn)物MDA 的水平，給藥劑量為0.6g·kg-1時(shí)尤為明顯。

表1 皂角籽總黃酮提取液對小鼠血清中T-SOD 活性和MDA水平的影響

3.2 皂角籽總黃酮提取液對小鼠肝組織中T-SOD、

CAT、GSH-Px 活性和MDA 水平的影響

與正常組相比，皂角籽總黃酮提取液能提高小鼠肝組織中的T-SOD、CAT、GSH-Px 活性，降低MDA 水平。其中，高劑量組各項(xiàng)檢測結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，陽性組的MDA、T-SOD，以及中劑量組的MDA、T-SOD、GSH-Px 均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

3.3 皂角籽總黃酮提取液對小鼠腦組織中T-SOD、CAT、GSH-Px 活性和MDA 水平的影響

與正常組相比，皂角籽總黃酮提取液能提高小鼠腦組織的T-SOD、CAT、GSH-Px 活性，降低MDA 水平。其中，高劑量組的各項(xiàng)檢測結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，陽性組的CAT、GSH-Px，以及中劑量組的T-SOD、CAT 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表3。

表2 皂角籽總黃酮提取液對小鼠肝組織中T-SOD、CAT、GSH-Px 活性和MDA 水平的影響

表3 皂角籽總黃酮提取液對小鼠腦組織中T-SOD、CAT、GSH-Px 活性和MDA 水平的影響

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，與正常組相比，中、高劑量組的皂角籽總黃酮提取物能夠提高小鼠血清中的T-SOD 活性，降低體內(nèi)過氧化產(chǎn)物MDA 的水平。與正常組相比，高劑量的皂角籽總黃酮提取物能提高小鼠體內(nèi)肝、腦組織中的T-SOD、CAT、GSH-Px活性，降低MDA 水平，表明皂角籽具有較強(qiáng)的體內(nèi)抗氧化作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為今后皂角籽的深入開發(fā)和臨床應(yīng)用提供數(shù)據(jù)參考。