張 晗， 張超彥， 謝秋霞， 田建輝

（1.北京航天總醫(yī)院健康管理中心，北京 100076；2.北京航天總醫(yī)院職業(yè)病科，北京 100076；3.中國運載火箭研究院，北京 100076）

EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）屬皰疹病毒科γ亞科，對B淋巴細胞、鼻咽部上皮細胞等有極強的親和力和致癌性，1999年被國際癌癥研究會定為一級致癌物。大量研究結(jié)果表明，EBV與鼻咽癌、傳染性單核細胞增多癥等多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[1]。侵入人體鼻咽部上皮細胞的EBV是誘發(fā)鼻咽部細胞分裂癌變的病理主因[2]。鼻咽癌是耳鼻喉科最常見的惡性腫瘤，約占頭頸部惡性腫瘤的78%，約占上呼吸道癌的93%[3-5]。因此，在體檢人群中進行EB病毒抗體檢測能有效提高鼻咽癌的早診早治率。絕大多數(shù)的鼻咽癌患者血清中有抗EBV多種抗原的抗體存在，血清學EBV抗體檢測已成為鼻咽癌篩查及診斷的重要生物學標志物。EBV核心有1條雙鏈DNA，包含基因組分屬于EBV潛伏期和裂解期。編碼蛋白早期抗原（early antigen，EA）是裂解晚期基因的表達產(chǎn)物。衣殼抗原（viral capsid antigen，VCA）則是病毒活躍復制期的蛋白。編碼蛋白Rta是EBV裂解期的入口蛋白，是立早基因BRLF1被激活突變時的表達產(chǎn)物，是引發(fā)細胞癌變的信號蛋白[6]。2015年，有研究首次揭示鼻咽部上皮細胞膜上的一種特殊受體分子神經(jīng)纖毛蛋白1是介導EBV感染鼻咽上皮細胞的重要分子。在鼻咽上皮細胞內(nèi)，EBV激活神經(jīng)纖毛蛋白1依賴的表皮生長因子癌癥信號通路，誘導細胞核內(nèi)DNA突變，癌細胞生成，引起鼻咽癌[7-8]。而且在鼻咽癌確診前4個月至4年即可在患者血清中檢出EBV的相關(guān)抗體[9]。將EBV相關(guān)抗體的檢測，用于體檢人群的篩查，有利于早期發(fā)現(xiàn)鼻咽癌患者及鼻咽癌高危人群。本研究對近年在北京航天總醫(yī)院健康管理中心體檢的健康人群進行3種EB病毒抗體聯(lián)合檢測的結(jié)果進行分析。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2017年1月1日—2018年6月30日在北京航天總醫(yī)院健康管理中心進行3種EBV抗體聯(lián)合檢測的體檢人員4 251名，其中男2 255名、女1 996名，年齡18～90歲，中位年齡35歲。

1.2 方法

1.2.1 實驗試劑與儀器 EBV Rta-IgG、VCAIgA、EA-IgA檢測均采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測試劑盒含配套校準品及質(zhì)控品[同昕生物技術(shù)（北京）有限公司]。Multiskan FC型酶標儀購自賽默飛世爾（上海）儀器有限公司。

1.2.2 檢測方法 抽取受檢者靜脈血3 mL，3 000×g離心10 min取血清。嚴格按照試劑盒說明書和儀器操作規(guī)程進行操作，標本吸光度（absorbance，A）值/臨界值≥l.1為陽性。

1.2.3 “Rta三聯(lián)檢”鼻咽癌風險評估 根據(jù)中國健康促進基金會關(guān)于體檢人群鼻咽癌早期篩查及風險管理多中心研究專家組制定的早期篩查及處理方法進行風險評估?！癛ta三聯(lián)檢”即Rta-IgG、VCA-IgA和EA-IgA 3項的聯(lián)合檢查，Rta-IgG特異性強、權(quán)重最高，VCA-IgA權(quán)重次之，EA-IgA權(quán)重較小?！癛ta三聯(lián)檢”將鼻咽癌患病風險分為4級，即：高度風險、中度風險、輕度風險、低風險。高度風險：3項陽性或Rta-IgG與VCA-IgA雙陽性；中度風險：Rta-IgG單陽性或VCA-IgA與EA-IgA雙陽性；輕度風險：VCA-IgA或EA-IgA單陽性；低風險：3項陰性。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計分析，通過Excel軟件建立數(shù)據(jù)庫，率的比較用χ2檢驗。3種EBV抗體單項陽性率比較用多個相關(guān)樣本的非參數(shù)χ2檢驗，年齡以中位數(shù)表示。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 性別與年齡分析

4 251名受檢者來自2017年1月1日—2018年6月30日在北京航天總醫(yī)院健康管理中心的體檢人群，年齡18～90歲，中位年齡35歲。其中男性2 255名（53.0%），中位年齡34歲；女性1 996名（47.0%），中位年齡37歲；男性年齡＜女性年齡（t=-9.748，P=0.000）。

2.2 3種EBV抗體的單項陽性結(jié)果比較

4 251名受檢者3種EBV抗體單項陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2=12.465，P=0.000），陽性率由高至低的順序依次為VCA-IgA 、EA-IgA、Rta-IgG；不同性別比較，VCA-IgA陽性率男性高于女性（χ2=19.770，P=0.000），EA-IgA、Rta-IgG陽性率男性、女性無差別。見表1。

表1 3種EBV抗體檢測陽性率比較

2.3 不同年齡組3種EBV抗體陽性檢測結(jié)果比較

不同年齡組3種EBV抗體陽性率總體隨年齡增長而增高，EA-IgA（χ2=25.597，P=0.000）及Rta-IgG（χ2=11.103，P=0.003 8）在不同年齡組中陽性率有顯著差異，在60歲以上的受檢者中EA-IgA和Rta-IgG陽性率最高，分別為6.3%和3.7%。VCA-IgA在不同年齡組中差異不顯著（χ2=2.869，P=0.238），51歲以上的受檢者VCA-IgA陽性率較高。見表2。

表2 不同年齡人群3種EBV抗體陽性檢測結(jié)果比較

2.4 3種EBV抗體檢測結(jié)果聚集情況

在4 251名EBV受檢者中，92.9% 3項均為陰性，6.4% 1項陽性，0.7% 2項陽性，未發(fā)現(xiàn)3項陽性人群。男性與女性聚集情況比較差異無統(tǒng)計學意義（χ2=1.732，P=0.421），見表3。在2項檢查均為陽性的28名受檢者中，耳鼻喉科檢查未見異常12名（占42.9%），鼻炎或鼻竇炎9名（占32.1%），其他異常7名（占25.0%）。

表3 3種EBV抗體陽性聚集情況比較

根據(jù)3種EBV抗體聚集情況，預測其鼻咽癌發(fā)病風險，男性與女性的風險無差別（χ2=3.605，P=0.301），見表4。對于陽性人群進行“Rta三聯(lián)檢”風險評估分成高度風險、中度風險、輕度風險、低風險人群，其中高度風險的5名受檢者中，結(jié)合其臨床表現(xiàn)及耳鼻喉科檢查發(fā)現(xiàn)患有過敏性鼻炎3名，說明“Rta三聯(lián)檢”風險評估與受檢者臨床表現(xiàn)與疾病診斷有一定關(guān)聯(lián)性。

表4 不同性別人群鼻咽癌風險的比較

2.5 Rta-IgG陽性人員情況

在81名Rta-IgG陽性受檢者中，72名VCAIgA和EA-IgA均為陰性，占88.9%；VCA-IgA陽性5名（4.9%）；EA-IgA陽性4名（6.2%），VCA-IgA與EA-IgA檢出率無差別（χ2=0.000，P=1.000）；EA-IgA陽性4名，均為女性，其中1名患有萎縮性鼻炎；VCA-IgA或者EA-IgA任何一個出現(xiàn)陽性的檢出率為11.1%。見表5。

表5 81名Rta-IgG抗體陽性受檢者VCA-IgA和EA-IgA陽性檢出率比較

3 討論

鼻咽癌是耳鼻喉科最常見的惡性腫瘤，約占頭頸部惡性腫瘤的78%，約占上呼吸道癌的93%[3-5]。近年來鼻咽癌呈現(xiàn)發(fā)病率逐年上升的趨勢，發(fā)病年齡也呈現(xiàn)年輕化的趨勢。鼻咽癌病變隱蔽，早期癥狀不明顯，死亡率高，如何早期篩查和及時發(fā)現(xiàn)高危人群是多年來研究的熱點、重點和難點。鼻咽癌是一種典型的、發(fā)病因素明確、由遺傳易感-環(huán)境污染-EBV感染3種因素相互作用而形成的惡性腫瘤。盡管相關(guān)研究很多，但始終未尋找到適合臨床實際使用的篩選方法和評估方案。有臨床實踐證明，“Rta三聯(lián)檢”可獲得與EBV-DNA檢測相同高水平的敏感性和特異性[10]。本研究應用VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG 3種EBV抗體聯(lián)合檢測方法，做到了EBV病毒譜的全覆蓋，篩查更為全面。把最為特異的立早基因編碼蛋白Rta和裂解晚期編碼蛋白EA，以及病毒感染復制的衣殼蛋白VCA結(jié)合檢測，大大提高了檢測敏感性及特異性，適合大規(guī)模人群健康體檢篩查。

EBV的VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG 3項抗體聯(lián)合檢測，為鼻咽癌高危人群的篩查提供了分層依據(jù)，使人群分類管理成為可能。4 251名受檢者3種EBV抗體單項陽性率的比較有差別，陽性率由高至低依次為VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG；在不同性別間，VCA-IgA陽性率男性高于女性；不同年齡組3種EBV抗體陽性率總體隨年齡增長而增高，EA-IgA及Rta-IgG在不同年齡組中陽性率有顯著差異，在61歲以上的受檢者中EA-IgA和Rta-IgG陽性率最高，分別為6.3%和3.7%，VCA-IgA在51歲以上的受檢者中陽性增高。受檢人群中92.9% 3項均為陰性，6.4% 1項陽性，0.7% 2項陽性，未發(fā)現(xiàn)3項均陽性者，抗體陽性檢測結(jié)果在男性與女性聚集情況比較無差別，抗體檢出陽性的人群在耳鼻喉科檢查發(fā)現(xiàn)鼻炎、鼻竇炎及其他異常的比例較高。1項檢測陽性和2項檢測陽性者301名，我們將對其進行隨訪，完善鼻咽癌篩查全流程，促進鼻咽癌的早期預防和治療。

此外，Rta-IgG檢測在3項檢查中具有特殊意義。分析Rta-IgG陽性人群（81名），其中VCA-IgA陽性檢出率（4.9%）與EA-IgA的陽性檢出率（6.2%）無差別，但均高于其相應的普通體檢人群（3.0%、2.8%）的陽性檢出率，且VCA-IgA或EA-IgA任何1項出現(xiàn)的陽性率增高至11.1%。因此，有必要重視Rta-IgG陽性人群并追蹤其他抗體檢測結(jié)果。“Rta三聯(lián)檢”中，還應重視耳鼻喉科檢查。在2項檢測陽性人群（28名）中，鼻炎或鼻竇炎患者占32.1%（9/28）；在具有鼻咽癌高度風險的5名受檢者中，發(fā)現(xiàn)3名受檢者患有過敏性鼻炎。血清學改變與耳鼻喉檢測結(jié)果有相互驗證的特點，進一步證明EBV抗體聯(lián)合鼻咽鏡檢查將有利于鼻咽癌的早期篩查。

結(jié)合本研究“Rta三聯(lián)檢” 的人群特點，EBV 3種抗體的陽性率與性別和年齡都有一定的關(guān)系，50歲以上的人群應作為重點篩查對象，這與在上海、東莞及云浮地區(qū)健康人體檢EBV抗體檢測陽性率及年齡研究結(jié)果相符[11-13]。EBV抗體聯(lián)合檢查陽性受檢者推薦鼻咽鏡檢查，為鼻咽癌的早期篩查提供依據(jù)。“Rta三聯(lián)檢”在體檢人群中推廣是可行性的，有利于鼻咽癌的早期預防和早期治療。