趙 美，曾 亞，周曉英

(1.新疆維吾爾自治區(qū)伊犁州中醫(yī)醫(yī)院，新疆 伊寧 835000；2.新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011；3.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011)

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

阿爾泰金蓮花，采自新疆博樂溫泉，粉碎過篩，備用。

DPPH自由基、Tris、鹽酸、鄰苯三酚、硫酸亞鐵、水楊酸、過氧化氫、抗壞血酸等均為分析純；葒草苷對(duì)照品、牡荊素對(duì)照品，寶雞辰光生物科技有限公司。

752型紫外可見分光光度計(jì)，上海菁華科技儀器有限公司；ME204E型電子天平，上海梅特勒-托利多儀器有限公司；KQ-5200DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山超聲儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 阿爾泰金蓮花總黃酮粗提物的制備

稱取阿爾泰金蓮花粉末50 g，加入12倍量60%乙醇，回流提取2次，每次 1.5 h，過濾；合并濾液，減壓濃縮(60 ℃)至無醇味；濃縮液真空干燥(60 ℃)，得阿爾泰金蓮花總黃酮粗提物。

1.2.2 阿爾泰金蓮花總黃酮純化物的制備

稱取阿爾泰金蓮花粉末 50 g，加入12倍量60%乙醇，回流提取2次，每次1.5 h，過濾；合并濾液，減壓濃縮(60 ℃)至無醇味；濃縮液經(jīng)大孔樹脂吸附，水洗除雜后用 30%乙醇洗脫；洗脫液減壓濃縮，真空干燥(60 ℃)，得阿爾泰金蓮花總黃酮純化物。

1.2.3 阿爾泰金蓮花總黃酮對(duì) DPPH自由基的清除實(shí)驗(yàn)

在文獻(xiàn)[7-9]的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)。分別稱取阿爾泰金蓮花總黃酮粗提物、純化物5 mg，用蒸餾水溶解，定容于25 mL容量瓶中，吸取適當(dāng)體積，稀釋，配制成0.20 mg·mL-1、0.15 mg·mL-1、0.10 mg·mL-1、0.05 mg·mL-1、0.02 mg·mL-1、0.01 mg·mL-1、0.005 mg·mL-1的樣品溶液。樣品組：在試管中加入2 mL樣品溶液及 2 mL 1.0×10-4DPPH自由基溶液，搖勻，室溫下暗處靜置 30 min，測(cè)定517 nm處吸光度(A1)；空白組：用同體積的蒸餾水替代樣品溶液，測(cè)定517 nm處吸光度(A2)；空白對(duì)照組：用同體積的95%乙醇溶液替代DPPH自由基溶液，測(cè)定517 nm處吸光度(A3)；以VC為陽性對(duì)照。每個(gè)樣品平行測(cè)定3次，按式(1)計(jì)算DPPH自由基清除率。

同法測(cè)定葒草苷和牡荊素對(duì)DPPH自由基的清除率。

(1)

(2)

1.2.5 阿爾泰金蓮花總黃酮對(duì)·OH的清除實(shí)驗(yàn)

在文獻(xiàn)[13-15]的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)。分別稱取阿爾泰金蓮花粗提物、純化物225 mg，用蒸餾水溶解，定容于25 mL容量瓶中，吸取適當(dāng)體積，稀釋，配制成 9.0 mg·mL-1、7.2 mg·mL-1、5.4 mg·mL-1、3.6 mg·mL-1、2.7 mg·mL-1、0.90 mg·mL-1、0.54 mg·mL-1的樣品溶液。樣品組：分別向試管中加入 1 mL 7.55 mmol·L-1硫酸亞鐵溶液、 1 mL 7.5 mmol·L-1水楊酸溶液、1 mL樣品溶液、6.5 mL水和 0.5 mL 0.3%過氧化氫，搖勻，37 ℃水浴 30 min，測(cè)定510 nm處吸光度(Ax)；空白組：在試管中加入 1 mL 7.55 mmol·L-1硫酸亞鐵溶液、1 mL 7.5 mmol·L-1水楊酸溶液、7.5 mL水和 0.5 mL 0.3%過氧化氫，搖勻，37 ℃水浴 30 min，測(cè)定510 nm處吸光度(A0)；空白對(duì)照組：分別向試管中加入 1 mL 7.55 mmol·L-1硫酸亞鐵溶液、1 mL 7.5 mmol·L-1水楊酸溶液、1 mL樣品溶液、7 mL水，搖勻，37 ℃水浴 30 min，測(cè)定510 nm處吸光度(Ax0)；以VC為陽性對(duì)照。每個(gè)樣品平行測(cè)定3次，按式(3)計(jì)算·OH清除率。

(3)

2 結(jié)果與討論

2.1 阿爾泰金蓮花總黃酮對(duì) DPPH自由基的清除作用(圖1)

圖1 阿爾泰金蓮花總黃酮對(duì)DPPH自由基的清除作用

由圖 1可知，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的濃度范圍內(nèi)，阿爾泰金蓮花總黃酮的粗提物和純化物、葒草苷、牡荊素對(duì)DPPH自由基的清除率隨著濃度的增加而升高，且具有一定的量效關(guān)系。當(dāng)濃度為0.005 mg·mL-1時(shí)，純化物和葒草苷對(duì)DPPH自由基的清除率分別為28.9%和32.1%，高于VC；同樣濃度下，粗提物和牡荊素對(duì)DPPH自由基的清除率分別為10.8%和6.7%，低于VC；當(dāng)濃度為0.05 mg·mL-1時(shí)，粗提物、純化物、葒草苷、牡荊素對(duì)DPPH自由基的清除率分別為69.9%、83.1%、78.8%、10.5%。由此可看出，阿爾泰金蓮花總黃酮對(duì)DPPH自由基有明顯的清除作用，且純化后的總黃酮的清除作用更強(qiáng)。

2.2 阿爾泰金蓮花總黃酮對(duì)的清除作用(圖2)

圖 2 阿爾泰金蓮花總黃酮對(duì)的清除作用

2.3 阿爾泰金蓮花總黃酮對(duì)·OH的清除作用(圖3)

圖3 阿爾泰金蓮花總黃酮對(duì)·OH的清除作用

由圖 3可知，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的濃度范圍內(nèi)，阿爾泰金蓮花總黃酮的粗提物和純化物對(duì)·OH的清除率隨著濃度的增加而升高，且具有一定的量效關(guān)系。當(dāng)濃度為 0.54 mg·mL-1時(shí)，粗提物、純化物對(duì)·OH的清除率分別為 4.58%、8.68%。由此可看出， 在一定的濃度范圍內(nèi)，阿爾泰金蓮花總黃酮對(duì)·OH有清除作用，且純化后的總黃酮的清除作用更強(qiáng)。

3 結(jié)論