周 力，郭連軍，梁 林，馮義志，張愛娟，潘金菊，吳亞玉*

(1.山東省農(nóng)藥檢定所，山東 濟(jì)南 250100；2.招遠(yuǎn)市綜合行政執(zhí)法大隊(duì)，山東 煙臺(tái) 265400；3.山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院，山東 濟(jì)南 250033)

氟鈴脲(hexaflumuron)，化學(xué)名稱為1-[3，5-二氯-4-(1，1，2，2-四氟乙氧基)苯基]-3-(2，6-二氟苯甲酰基)脲[1]，是一種苯甲酰脲類殺蟲劑，其主要作用是抑制昆蟲幾丁質(zhì)的合成，阻礙昆蟲正常蛻皮生長(zhǎng)[2]，以胃毒作用為主，兼有觸殺和拒食作用。氟鈴脲在我國(guó)已登記甘藍(lán)、韭菜、棉花等十種作物，但目前尚未規(guī)定氟鈴脲在韭菜中的 MRL 值。因此，研究氟鈴脲在韭菜上的殘留具有一定的意義。

目前有關(guān)氟鈴脲在農(nóng)作物中的殘留主要涉及棉花、甘藍(lán)、黃瓜、大白菜、番茄等作物。何紅梅等[3]采用高效液相色譜測(cè)定了黃瓜、大白菜、番茄和甘藍(lán)中氟鈴脲的殘留；Huang等[4]和楊麗華等[5]采用高效液相色譜法分別測(cè)定了大白菜和甘藍(lán)中氟鈴脲的殘留量；毛江勝等[6]和郭正元等[7]研究了氟鈴脲在棉花中的殘留與降解行為；韓紅新等[8]采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS)檢測(cè)了氟鈴脲在蔬菜中的殘留。盛宇等[9]和劉永利等[10]建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)棉花和土壤中的氟鈴脲殘留；陸澄瀅等[11]氣相色譜法檢測(cè)甘藍(lán)及土壤中的氟鈴脲殘留。而氟鈴脲在韭菜中殘留的分析方法未見報(bào)道。本文研究并建立氟鈴脲在韭菜中殘留的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，并對(duì)5%氟鈴脲乳油在韭菜上的安全使用進(jìn)行了評(píng)估。

1 材料與方法

1.1 供試材料 供試農(nóng)藥：5%氟鈴脲乳油；氟鈴脲標(biāo)準(zhǔn)品(純度為99.1%)；供試作物：韭菜；品種：山東為阜豐一號(hào)、河北為漢中雪韭，安徽為平韭四號(hào)，內(nèi)蒙古為竹桿青韭菜。Shimadzu液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(LCMS-8030)，配ESI源；多功能食品加工機(jī)(XBLL-25A)；電子天平；離心機(jī)。氯化鈉(分析純)；乙腈(色譜純)。

1.2 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)地點(diǎn)：山東、河北、安徽和內(nèi)蒙古；試驗(yàn)時(shí)間：2018年；按照《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[12]要求設(shè)試驗(yàn)小區(qū)，小區(qū)面積30 m2，重復(fù)3次，小區(qū)間設(shè)保護(hù)帶。另設(shè)對(duì)照小區(qū)。5%氟鈴脲乳油在韭菜上防治韭蛆的推薦使用制劑量：4 500～7 500 g/ha(225～375 g a.i/ha)，在韭菜割后2～3d，根部噴淋，1～2次施藥，施藥間隔7d，推薦安全間隔期為14d。

1.2.1 消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn) 消解動(dòng)態(tài)按制劑量11 250g/ha(562.5 g a.i/ha，推薦最高劑量的1.5倍)于韭菜收割后2～3d噴霧施藥，待韭菜生長(zhǎng)至10cm左右時(shí)開始采樣(0d)，之后按1、3、5、7、14、21、28、35d采集韭菜植株樣品。另設(shè)清水空白對(duì)照。每次取3份，縮分后留樣，于-20℃低溫冷凍保存，待測(cè)。

1.2.2 最終殘留試驗(yàn) 設(shè)2個(gè)施藥劑量：低劑量按制劑量7 500g/ha(375 g a.i/ha，推薦最高劑量)，高劑量按制劑量11 250 g/ha(562.5 g a.i/ha，推薦最高劑量的1.5倍)，各施1～2次藥，施藥間隔期7d。1次施藥按照藥后間隔10、14、21d采集韭菜樣品；2次施藥按照末次藥后間隔7、10、14d采集韭菜樣品。每處理3次重復(fù)，設(shè)空白對(duì)照區(qū)，于-20 ℃低溫冷凍保存待測(cè)。

1.3 分析方法

1.3.1 色譜聯(lián)用儀條件 色譜柱：Shim-pack XR-ODSⅡ色譜柱(75 mm×2.0 mm，2.2 μm)；樣品室溫度：15 ℃;進(jìn)樣體積：1 μL;流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液和乙腈;梯度洗脫參數(shù)(表1)。

表1 梯度洗脫參數(shù)

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源(ESI)；加熱塊溫度：400 ℃；干燥氣溫度：250 ℃；干燥氣流量：15 L/min；霧化氣流量：3.0 L/min；反應(yīng)氣(Ar)壓力：230kpa；采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式[MRM(+)]；定量離子對(duì)：458.85>175.05，CE：35eV；定性離子對(duì)：458.85>276.00，CE：15eV。

1.3.2 樣本前處理 將韭菜樣品用食品調(diào)理儀進(jìn)行粉碎，準(zhǔn)確稱取10.0g樣品至50mL具塞離心管內(nèi)，加入10 mL乙腈，2 500 rpm渦旋5min。加入5g氯化鈉，劇烈振搖30s，4 000 rpmin離心5min。取上清液1mL，轉(zhuǎn)移至裝有50mg PSA和50 mg無水硫酸鎂的2mL離心管內(nèi)，渦旋1min。靜置后，取上清液過0.22μm有機(jī)系濾膜，待測(cè)。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 將1 000mg/L的氟鈴脲標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈稀釋配得 2.0、1.0、0.5、0.1、0.05、0.01mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1.3.1節(jié)色譜條件下進(jìn)行測(cè)定(圖1)。

1.3.4 添加回收率測(cè)定 在10.0g空白韭菜中分別用1、10和500mg/L氟鈴脲標(biāo)準(zhǔn)品各自添加100μL，每個(gè)濃度5次平行。按1.3.2節(jié)方法進(jìn)行提取、凈化，按1.3.1節(jié)色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.3.5 膳食攝入量 膳食攝入評(píng)估是在毒理學(xué)和殘留化學(xué)評(píng)估的基礎(chǔ)上，對(duì)居民因膳食攝入帶來的農(nóng)藥殘留對(duì)身體健康造成癿風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行定量評(píng)價(jià)，包括長(zhǎng)期和短期膳食攝入評(píng)估。其中長(zhǎng)期膳食攝入量的評(píng)估是依據(jù)各國(guó)政府發(fā)布的《不同人群消費(fèi)膳食分組食譜》中的日膳食結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)，結(jié)合殘留化學(xué)評(píng)估推薦的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值或已制定的最大殘留限量(MRLs)，計(jì)算國(guó)家估算每日攝入量(NEDI)，與毒理學(xué)評(píng)估推薦的每日允許攝入量(ADI)進(jìn)行比較。而短期膳食攝入評(píng)估是指當(dāng)在短時(shí)間內(nèi)(例如一次性戒一天)攝入某一食品時(shí)，存在因農(nóng)藥殘留量過高而造成急性毒性風(fēng)險(xiǎn)。本試驗(yàn)只對(duì)氟鈴脲進(jìn)行長(zhǎng)期膳食攝入評(píng)估。

依據(jù)原衛(wèi)生部2002年發(fā)布的《中國(guó)不同人群消費(fèi)膳食分組食譜》或權(quán)威參考資料中的膳食結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)，結(jié)合殘留化學(xué)評(píng)估推薦的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值和已制定的最大殘留限量(MRLs)，計(jì)算該農(nóng)藥的國(guó)家估算每日攝入量(NEDI)，計(jì)算公式如下：

國(guó)家估算每日攝入量：NEDI =∑[STMRi(STMR-Pi)× Fi)]

式中：

STMRi—農(nóng)藥在某一食品中的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值；

STMR-Pi —用加工因子校正的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值；

Fi—一般人群某一食品的消費(fèi)量。

ADI為每日允許攝入量，mg /kg bw;

bw為體重，kg，我國(guó)人均體重一般按 63 kg 計(jì)。

當(dāng) RQ >100 時(shí)，表示存在不可接受的風(fēng)險(xiǎn)，數(shù)值越大，風(fēng)險(xiǎn)越大;RQ <100 時(shí)，表示風(fēng)險(xiǎn)為可接受，數(shù)值越小，風(fēng)險(xiǎn)越小[13]。

2 結(jié)果與討論

2.1 線性范圍及定量限 以峰面積Y為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在0.01～2mg/L范圍內(nèi)，氟鈴脲峰面積與進(jìn)樣質(zhì)量濃度間呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y = 369 015x+41 610，r= 0.990 8，通過最小添加水平得到韭菜的定量限(LOQ)為0.01mg/kg。

2.2 添加回收率和精密度 在韭菜空白樣品中，分別添加3個(gè)不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氟鈴脲標(biāo)準(zhǔn)品溶液。結(jié)果表明(表2)：氟鈴脲在韭菜中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.01～5.0 mg/kg時(shí)，平均回收率85.8%～101.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差4.9%～6.3%，符合農(nóng)藥殘留分析標(biāo)準(zhǔn)要求。

表2 氟鈴脲在韭菜中添加回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3 氟鈴脲在韭菜中的消解動(dòng)態(tài) 氟鈴脲在韭菜中的消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)結(jié)果表明(表3)：氟鈴脲在韭菜中降解動(dòng)態(tài)符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程:山東保護(hù)地為C= 0.678e-0.089 7T，半衰期為7.7d；安徽露地為C = 2.19e-0.060 1T，半衰期為11.5d。

表3 韭菜中氟鈴脲殘留消解動(dòng)態(tài)

2.4 氟鈴脲在韭菜中的最終殘留 最終殘留試驗(yàn)山東保護(hù)地、河北保護(hù)地、安徽露地、內(nèi)蒙古露地韭菜進(jìn)行高劑量1次、高劑量2次，低劑量1次和低劑量2次施藥，施藥間隔期為7d。最終結(jié)果(表4).

表4 韭菜中氟鈴脲最終殘留數(shù)據(jù)匯總

最終殘留結(jié)果施藥1次，采收間隔10、14和21d，殘留中值分別為0.392、0.303和0.172 mg/kg；殘留最大值分別為1.74、1.45和1.52 mg/kg。最終殘留結(jié)果施藥2次，采收間隔7、10和14d，殘留中值分別為0.933、0.747和0.649 mg/kg；殘留最大值分別為3.22、2.35和2.12 mg/kg。

2.5 膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 目前氟鈴脲在我國(guó)登記作物有甘藍(lán)、韭菜、棉花、十字花科蔬菜，已制定甘藍(lán)和棉籽中的最大殘留限量。5%氟鈴脲乳油在韭菜上，按照制劑用量7 500～11 250g/667m2(375～562.5g a.i/ha)，施藥1～2次，施藥間隔7d，于韭蛆發(fā)生初期，韭菜收割后2～3d，根部噴淋，施藥后澆水1次。采收間隔期為14d的殘留中值為0.508mg/kg。結(jié)合我國(guó)農(nóng)藥登記情況和我國(guó)居民的人均膳食結(jié)構(gòu)，普通人群氟鈴脲的國(guó)家估算每日攝入量是0.14mg，風(fēng)險(xiǎn)商(RQ)為11，結(jié)果表明對(duì)一般人群健康不會(huì)產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。

3 結(jié)論

研究建立了采用LCMS/MS法測(cè)定韭菜中氟鈴脲殘留量的分析方法。結(jié)果表明：氟鈴脲在韭菜的定量限(LOQ)為0.01mg/kg。氟鈴脲在韭菜中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01～5.0 mg/kg時(shí)，平均回收率85.8%～101.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差4.9%～6.3%。方法的重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度、精密度及檢出限均可滿足該農(nóng)藥的殘留分析要求。

氟鈴脲在韭菜中的殘留消解均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，其在山東保護(hù)地和安徽露地的半衰期分別為7.7和11.5d。韭菜最終結(jié)果表明：5%氟鈴脲乳油在韭菜上，按照375～562.5g a.i/ha，施藥1～2次，施藥間隔7d，于韭菜收割后2～3d，根部噴淋，安全間隔期14d，對(duì)一般人群健康不會(huì)產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。