董元 王志勝 張金 張兆鵬 劉玉瑩 李萍

摘要?目的：觀察補(bǔ)陽還五湯對(duì)局灶性缺血模型大鼠認(rèn)知能力的改善作用，同時(shí)探討其對(duì)PI3K-AKT信號(hào)通路的影響。方法：選取30只SD大鼠按數(shù)字隨機(jī)法分為假手術(shù)組、模型組及中藥組，每組10只。模型組及中藥組接受改良急性局灶性缺血模型制備（MCAO術(shù)）成模后中藥組大鼠接受補(bǔ)陽還五湯灌胃，1次/d，連續(xù)干預(yù)14 d。假手術(shù)組及模型組大鼠接受等劑量的生理鹽水灌胃，時(shí)間同中藥組。干預(yù)結(jié)束后，比較各組行為學(xué)、腦梗死體積、海馬形態(tài)學(xué)、腦組織PI3K、Akt、p-Akt蛋白/mRNA水平變化。結(jié)果：補(bǔ)陽還五湯可明顯縮短大鼠游泳軌跡路程及逃避潛伏期，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;補(bǔ)陽還五湯可縮小MCAO大鼠的腦梗死體積，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;補(bǔ)陽還五湯可減少M(fèi)CAO后大鼠海馬組織病理損傷征象，上調(diào)PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白及mRNA表達(dá)，降低Bax蛋白及mRNA水平，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：補(bǔ)陽還五湯可改善MCAO大鼠認(rèn)知能力，其作用機(jī)制可能與介導(dǎo)PI3K-AKT信號(hào)通路有關(guān)。

關(guān)鍵詞?局灶性缺血;模型大鼠;補(bǔ)陽還五湯;認(rèn)知;水迷宮;腦梗死體積;PI3K-AKT信號(hào)通路;機(jī)制

Effects of Buyang Huanwu Decoction on Cognitive Ability and the PI3/KAKT Signaling Pathway in Model Rats with Focal Ischemia

DONG Yuan，WANG Zhisheng，ZHANG Jin，ZHANG Zhaopeng，LIU Yuying，LI Ping

（Sunshine Union Hospital，Weifang 261000，China）

Abstract?Objective：To observe improvement effect of Buyang Huanwu Decoction in cognitive ability of focal ischemia model rats and explore its effects on the PI3K-AKT signaling pathway.Methods：A total of 30 SD rats were randomly divided into sham operation group（n=10），model group（n=10）and Chinese materia medica group（n=10）.The rats in the model group and the Chinese materia medica group received modified acute focal ischemia modeling（MCAO）.After the modeling，the rats in the Chinese materia medica group received intragastric administration of Buyang Huanwu Decoction once a day for 14 d.The rats in the sham operation group and the model group were given the same dose of normal saline for the same time as the Chinese materia medica group.After the intervention，behavior，volume of cerebral infarction，morphology of hippocampus and levels of PI3K，Akt and p-Akt protein/mRNA in brain tissue were compared in each group.Results：1）Buyang Huanwu Decoction could significantly shorten the swimming track and escape latency of rats，and there was significant difference compared to that in the model group（P<0.05）.2）Buyang Huanwu Decoction could reduce the cerebral infarction volume of MCAO rats，and there was significant difference compared to that in the model group（P<0.05）.3）Buyang Huanwu Decoction could reduce pathological injury signs of hippocampal tissue after the MCAO，up-regulate the expressions of PI3K，p-Akt，Bcl-2 protein and mRNA，and decrease the levels of Bax protein and mRNA，which were significantly different from those in the model group（P<0.05）.Conclusion：Buyang Huanwu Decoction can improve the cognitive ability of MCAO rats，and its mechanism may be related to mediating the PI3K-AKT signaling pathway.

Keywords?Focal ischemia; Model rats; Buyang Huanwu Decoction; Cognition; Water maze; Cerebral infarction volume; PI3K-AKT signaling pathway; Mechanism

中圖分類號(hào)：R289.5;R543文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.05.014

腦卒中具有極高的死亡率及致殘率，是腦組織血液循環(huán)障礙性疾病，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)水平的逐年提高，腦卒中的死亡率在逐年下降，但仍有接近80%的患者遺留明顯的神經(jīng)功能缺損[1-3]，其中認(rèn)知障礙是重要的后遺癥之一，影響患者康復(fù)訓(xùn)練的依從性，阻礙康復(fù)。中醫(yī)在治療腦卒中方面的優(yōu)勢有目共睹，其分為氣虛血瘀、痰瘀阻絡(luò)、肝腎虧虛等證型，其中氣虛血瘀臨床發(fā)病率最高[4-6]。補(bǔ)陽還五湯是經(jīng)典傷寒經(jīng)方，數(shù)百年來均廣泛運(yùn)用于中風(fēng)病及其相關(guān)后遺癥的治療，目前臨床資料顯示該湯劑可有效治療氣虛血瘀型腦卒中[7-9]，但其作用機(jī)制目前尚不明了。PI3K-AKT信號(hào)通路示迄今為止最重要的細(xì)胞凋亡相關(guān)性通路[10-12]，大量腦保護(hù)因子通過介導(dǎo)PI3K-AKT信號(hào)通路而產(chǎn)生療效。我們將MCAO大鼠作為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行補(bǔ)陽還五湯干預(yù)，并檢測PI3K-AKT信號(hào)通路標(biāo)志性蛋白水平的變化，以期進(jìn)一步完善補(bǔ)陽還五湯的作用機(jī)制。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?動(dòng)物

選取6周齡的雄性SPF級(jí)的SD大鼠30只納入研究，體質(zhì)量230～250 g，平均體質(zhì)量（215±9.38）g，均購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)：2007000509960，許可證號(hào)：SC-SCXK（滬）2007-0005，飼養(yǎng)于本院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.1.2?試劑與儀器

電泳凝膠成像分析系統(tǒng)（Bio-Rad，型號(hào)：ChemiDocXRS+，購自上海伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司），BCA蛋白檢測試劑盒（西安晶彩生物科技有限公司，批號(hào)28392），SDS-PAGE電泳凝膠試劑盒（購自碧云天生物公司，批號(hào)A293）、PI3K單克隆一抗抗體（美國CST公司，批號(hào)17366S）、Akt單克隆一抗抗體（美國CST公司，批號(hào)4685S）、p-Akt單克隆一抗抗體（美國CST公司，批號(hào)：4060T）、Bcl-2單克隆一抗抗體（美國CST公司，批號(hào)15071T），Bax單克隆一抗抗體（美國CST公司，批號(hào)5023T），β-actin抗體（美國CST公司，批號(hào)3700T）。

1.2?方法

1.2.1?分組與模型制備

將30只大鼠隨機(jī)數(shù)字法分為假手術(shù)組、模型組及中藥組，每組10只。各組大鼠在體質(zhì)量、鼠齡等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。具有可比性。其中模型組及中藥組大鼠參照改良的Zea Longa線栓法進(jìn)行MCAO模型的制備[6]：所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，造模前動(dòng)物禁食不禁水，參照改良的Zea Longa線栓法進(jìn)行MCAO模型的制備[10]。采用10%水合氯醛以0.3 mL/kg比例進(jìn)行腹腔注射麻醉，頸部正中切口，鈍性分離皮下組織，逐漸分離出右側(cè)頸總動(dòng)脈（CCA）、頸外動(dòng)脈（ECA）及頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA），將ECA近心端結(jié)扎，于CCA處（距離ECA、ICA交叉口0.5 cm）做一大小約0.25 mm切口，線栓經(jīng)ICA插進(jìn)去至大腦中動(dòng)脈入口，長18～20 mm，隨后將線栓固定于CCA，隨后縫合皮膚，將線栓尾部暴露于皮膚外，2 h后輕輕拔出線栓。假手術(shù)組大鼠僅進(jìn)行麻醉及分離血管后縫合皮膚。實(shí)驗(yàn)過程中大鼠保溫（24 ℃）喂養(yǎng)，自由攝食飲水。

1.2.2?給藥方法

中藥組大鼠在造模第二天開始接受補(bǔ)陽還五湯灌胃治療：赤芍12 g、川芎12 g、當(dāng)歸尾9 g、地龍9 g、黃芪30 g、桃仁9 g、紅花9 g。水煎，劑量按照按人/鼠公斤體質(zhì)量的等效劑量計(jì)算，1次/d，連續(xù)干預(yù)7 d。模型組及假手術(shù)組以等體積生理鹽水灌胃。

1.2.3?檢測指標(biāo)及方法

水迷宮：將各組大鼠于造模前及干預(yù)后進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，將水迷宮池（規(guī)格：直徑2.0 m），高0.5 m，水深0.3 m水溫（25±2）℃，將水迷宮池分為4等距離點(diǎn)象限，選定第一象限后將直徑6 cm的平臺(tái)放置于低于水平面2 cm處的中央位置，設(shè)置為水迷宮定位航行平臺(tái)，將大鼠于第一象限放入水中，記錄其尋找平臺(tái)的游泳軌跡以及時(shí)間（逃避潛伏期）。

2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色：預(yù)結(jié)束后從各組大鼠中隨機(jī)選取3只大鼠，麻醉處死后冰上將大鼠腦袋迅速取出，并將腦袋置于-20 ℃冰箱中冰凍30 min，隨后沿著冠狀面將腦組織切成6個(gè)薄片，每個(gè)薄片厚度約2 mm，將切好的腦組織薄片浸泡于TTC溶液中，避光條件下反應(yīng)，每2 min用毛筆翻動(dòng)腦片1次，讓TTC溶液充分接觸腦片使其充分染色，反應(yīng)結(jié)束后將腦片輕輕置于帶有刻度的平臺(tái)上，用高分辨率相機(jī)拍攝（佳能powershot 600X），使用Image-Pro Plus圖像分析處理系統(tǒng)（Motic Med 6.0 System）計(jì)算每片腦梗死體積。

HE染色：干預(yù)結(jié)束后從各組大鼠中隨機(jī)選取3只大鼠，麻醉脫頸處死后將事先配制好的多聚甲醛溶液從下腔靜脈灌流固定，隨后取出海馬組織浸泡于4%甲醛溶液，梯度乙醇進(jìn)行脫水，再用二甲苯進(jìn)行透明組織，將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中，放入溶蠟箱保溫。待石蠟完全浸入組織塊后進(jìn)行包埋，再將蠟塊切成薄片，撈片后將組織置于45 ℃恒溫箱中烘干，再用二甲苯、梯度乙醇脫蠟，再用蘇木精染色15 min，再用伊紅染色數(shù)秒，隨后再次用梯度乙醇及二甲苯處理后利用中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察海馬組織的病理結(jié)構(gòu)。

Western blotting檢測：干預(yù)結(jié)束后從各組大鼠中隨機(jī)選取3只大鼠，麻醉處死后冰上將大鼠腦袋迅速取出，并分離出海馬組織，加入1 mL的RIPA裂解液和10 μL PMSF進(jìn)行組織裂解，充分反應(yīng)后將樣本置于4 ℃，12 000×g分離15 min，吸取上清液后加入4X蛋白上樣緩沖液，在金屬浴儀中進(jìn)行蛋白變性7 min，將樣品加入至事先配制好的SDS-PAGE電泳凝膠內(nèi)，總蛋白兩30 μg、電泳結(jié)束后將目標(biāo)蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜（PVDF膜），轉(zhuǎn)膜后用脫脂奶粉封閉2 h，用0.01 mol/L磷酸緩沖鹽溶液（PBS）沖洗干凈后分別加入PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax以及β-actin一抗抗體，4 ℃下孵育24 h，次日取出PVDF膜后用TBST清洗3次，10 min/次，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗（1∶1 000）室溫下孵育1 h，加入ECL溶液，反應(yīng)1 min后進(jìn)行曝光掃描，用Image J軟件掃描條帶灰度值。

1.3?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）來描述，組間比較采用兩樣本t檢驗(yàn)或兩樣本秩和檢驗(yàn);組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)或配對(duì)秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?各組大鼠游泳軌跡和逃避潛伏期比較

與假手術(shù)組比較，模型組及中藥組大鼠游泳軌跡和逃避潛伏期延長，其中中藥組較模型組改善明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1及圖1。

2.2?各組腦梗死體積比較

假手術(shù)組未見腦梗死病灶，模型組和中藥組可見明顯腦梗死病灶（表現(xiàn)為蒼白色區(qū)域），中藥組干預(yù)后的腦梗死病灶體積百分比明顯小于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.3?各組海馬組織病理結(jié)構(gòu)比較

假手術(shù)組組織結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞排列整齊，模型組海馬組織細(xì)胞排列紊亂，大量的壞死神經(jīng)元細(xì)胞，部分存活的神經(jīng)元細(xì)胞明顯縮小;中藥組大鼠海馬組織細(xì)胞排列較模型組整齊，僅有部分細(xì)胞排列散亂，部分神經(jīng)元細(xì)胞出現(xiàn)壞死征象，大部分神經(jīng)元細(xì)胞體積大與模型組。見圖2。

2.4?各組Western blotting結(jié)果

Western blotting顯示造模后大鼠腦組織PI3K、p-Akt、Bcl-2表達(dá)降低，Bax水平減少，經(jīng)過補(bǔ)陽還五湯干預(yù)后上述指標(biāo)有所恢復(fù)，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3及圖3。

3?討論

腦卒中是臨床發(fā)病率極高的高血管事件種類，其中缺血性腦卒中占近75%，是腦卒中的主要類型，因此研究缺血性腦卒中的治療方案具有重要臨床意義。在過去數(shù)十年間，全球近200種藥物進(jìn)入腦卒中治療的臨床實(shí)驗(yàn)，但僅有組織型纖維蛋白溶活劑（tissue-type Plasminogen Activator，tPA）獲得美國國家食品藥品管理局批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床治療，但有數(shù)據(jù)顯示僅有3%～5%的患者對(duì)tPA顯示出臨床敏感性[13-14]。高達(dá)95%～97%的缺血性腦卒中患者目前未有確實(shí)有效的治療藥物，形勢非常嚴(yán)峻。研究人員認(rèn)為，目前缺血性腦卒中療效不盡人意的主要原因有[15-16]：神經(jīng)保護(hù)類藥物作用機(jī)制過于單一;缺血性腦卒中后神經(jīng)修復(fù)時(shí)間窗短。因此具有較長作用“時(shí)間窗”的多靶點(diǎn)的神經(jīng)保護(hù)類藥物將是研發(fā)缺血性腦卒中藥物的關(guān)鍵。本研究利用補(bǔ)陽還五湯對(duì)MCAO大鼠進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示補(bǔ)陽還五湯可明顯改善缺血性腦卒中后大鼠的認(rèn)知能力，同時(shí)縮小其腦梗死組織的區(qū)域，并改善了海馬的組織結(jié)構(gòu)。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為人之一身離不開氣血，《黃帝內(nèi)經(jīng)》云：“人之所有者，血與氣耳”“氣血不和，則百病乃變化而生”。由此可見，氣血是諸病之主因。氣虛、氣滯則血運(yùn)失常而致瘀血內(nèi)生，而瘀血亦可加重氣機(jī)運(yùn)行不暢，惡化氣虛之證，二者互為因果。早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》即已記載正氣虧虛，風(fēng)邪趁虛而入，瘀血阻絡(luò)而成中風(fēng);東漢張仲景亦以“內(nèi)虛邪中”解釋中風(fēng)病病機(jī)，故認(rèn)為治療“本氣自虛”是本病的主要治則?！吨T病源候論》中寫到：“風(fēng)半身不遂者，脾胃氣弱，血?dú)馄摗薄９蕪臍庋澨撗芯恐酗L(fēng)的發(fā)生發(fā)展具有理論依據(jù)。劉完素亦認(rèn)為“人卒中，則氣血不通而偏枯也”，所以氣血運(yùn)行不暢是偏枯的緣由。王清任認(rèn)為人之氣血分為十，若氣血虧虛至五時(shí)則半身無氣，氣虛則血瘀，停滯脈絡(luò)，必然出現(xiàn)偏癱之證，故其創(chuàng)立了大補(bǔ)元?dú)狻⒒钛鐾ńj(luò)的補(bǔ)陽還五湯。方中黃芪為君藥，具有益氣健脾、升陽舉陷、益衛(wèi)固表、利尿消腫、托毒生肌之功，是大補(bǔ)元?dú)庵?，氣足則血行[17-18]。當(dāng)歸主要入心、肝、脾經(jīng)，有補(bǔ)血活血之功，是補(bǔ)血之圣藥，《醫(yī)學(xué)啟源》云：“當(dāng)歸，氣味溫甘，能和血補(bǔ)血，尾破血，身和血”。故本方用當(dāng)歸尾以奏活血化瘀之功。桃仁、紅花均可活血化瘀，瘀去則新血生，正如《本草匯言》有載“紅花，破血、行血、活血、調(diào)血之藥也”。川芎乃“血中之氣藥”，可行氣活血散瘀，《神農(nóng)本草經(jīng)》記載：“主中風(fēng)入腦頭痛、寒痹，筋脈緩急”?？梢姶ㄜ阂酁橹灰酗L(fēng)諸證之要藥[19]。赤芍微苦，有散瘀止痛之功，地龍善走串于經(jīng)絡(luò)間，有通絡(luò)、息風(fēng)之功，與黃芪、當(dāng)歸、川芎諸藥合用，可加強(qiáng)祛瘀通絡(luò)之功[20]。本研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)再次確認(rèn)補(bǔ)陽還五湯確對(duì)腦中風(fēng)具有理想的療效，其可明顯改善大鼠的認(rèn)知能力。

本研究發(fā)現(xiàn)PI3K-Akt信號(hào)通路的標(biāo)志性蛋白水平發(fā)生了變化，補(bǔ)陽還五湯上調(diào)PI3K、p-Akt、Bcl-2的表達(dá)水平，降低Bax的水平，這提示補(bǔ)陽還五湯對(duì)MCAO大鼠的神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)可能與抗凋亡通路有關(guān)。缺血性腦卒中的發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，但大部分病理過程與細(xì)胞的異常凋亡關(guān)系密切，PI3K-Akt信號(hào)通路是凋亡相關(guān)的重要生物學(xué)通路[10-11]。PI3K是脂質(zhì)激酶，磷酸化后生成磷脂酰肌醇磷酸，促使Akt移聚至細(xì)胞膜上引起其構(gòu)象改變，Akt是PI3K下游的靶向因子之一，PI3K通過磷酸化作用使其Ser473位點(diǎn)效應(yīng)產(chǎn)生改變，對(duì)Akt進(jìn)行聯(lián)級(jí)活化，發(fā)生核移位，影響大量轉(zhuǎn)錄子調(diào)節(jié)器和因子，其中包括Bcal-2及Bax等。有數(shù)據(jù)顯示PI3K-Akt信號(hào)通路對(duì)神經(jīng)突觸的生長及其可塑性關(guān)系密切，從而影響學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知功能的改變，本研究亦證實(shí)了這一觀點(diǎn)。

總之，補(bǔ)陽還五湯可改善局灶性缺血模型大鼠認(rèn)知能力，其作用機(jī)制可能與介導(dǎo)PI3K-AKT信號(hào)通路有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1]陳雨，謝懿，張榕，等.氯吡格雷聯(lián)合低分子肝素鈣治療進(jìn)展性缺血性腦卒中效果分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2018，24（28）：74-76.

[2]張耀軍.早期靜脈溶栓治療急性缺血性腦卒中的臨床療效[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2018，18（82）：9-10.

[3]符茂東，張雯，李笑笑，等.急性缺血性腦卒中病人Barthel指數(shù)與中醫(yī)證型的相關(guān)性分析[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2018，16（16）：2300-2303.

[4]潘亞茹，王厚強(qiáng)，王丹，等.中醫(yī)為主綜合治療缺血性腦卒中恢復(fù)期的臨床療效分析[J].臨床研究，2018，26（9）：24-25.

[5]徐俊，胡承志，丁斌，等.高血壓頸動(dòng)脈粥樣硬化患者血清25（OH）D及vWF水平變化及其關(guān)系[J].安徽醫(yī)學(xué)，2018，39（7）：813-815.

[6]韓陳香.中醫(yī)辨證治療缺血性進(jìn)展性腦卒中急性期的臨床觀察[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)（連續(xù)型電子期刊），2018，5（53）：31-32.

[7]高偉紅.補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合天麻鉤藤飲治療腦梗死的臨床效果[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2018，37（8）：28-29.

[8]靳向前，梁學(xué)艷，杜安民，等.補(bǔ)陽還五湯配合體外沖擊波穴位沖擊治療腦卒中后下肢肌力下降的臨床研究[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2018，37（8）：14-15.

[9]李亞，鮑治誠，曹君君，等.康復(fù)治療結(jié)合加味補(bǔ)陽還五湯方在腦梗死患者恢復(fù)過程中的價(jià)值研究[J].雙足與保健，2018，27（15）：181-182.

[10]秦春明.網(wǎng)絡(luò)藥理的大黃素及其類似物抗腫瘤分子機(jī)制研究[J].中國藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)，2019，14（4）：50-53，58.

[11]賴文芳，洪海棉，張小琴，等.紅景天苷通過激活PI3K/AKT/NRF2通路減輕MCAO大鼠的神經(jīng)細(xì)胞凋亡[J].中華中醫(yī)藥雜志，2016，31（5）：1883-1886.

[12]席晅，任小瓊.姜黃素通過PI3K/AKT信號(hào)通路調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞增殖和凋亡實(shí)驗(yàn)研究[J].新中醫(yī)，2016，48（3）：217-221.

[13]Goldstein LB.Acute ischemic stroke treatment in 2007[J].Circulation，2007，116（13）：1504-1514.

[14]Smith WS.Pathophysiology of focal cerebral ischemia：a therapeutic perspective[J].J Vasc Interv Radiol，2004，15（1 Pt 2）：S3-12.

[15]Muresanu DF，Buzoianu A，F(xiàn)lorian SI，et al.Towards a roadmap in brain protection and recovery[J].J Cell Mol Med，2012，16（12）：2861-2871.

[16]Fisher M，F(xiàn)euerstein G，Howells D W，et al.Update of the stroke therapy academic industry roundtable preclinical recommendations[J].Stroke，2009，40（6）：2244-2250.

[17]劉波.補(bǔ)陽還五湯結(jié)合川芎嗪對(duì)急性腦梗塞患者血液流變學(xué)的影響及療效探討[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2018，18（81）：134-135.

[18]楊天賜.中藥黃芪的藥理作用及臨床應(yīng)用效果臨床研究[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2018，24（25）：103-105.

[19]楊廣訓(xùn).補(bǔ)陽還五湯治療缺血性中風(fēng)氣虛血瘀型療效觀察[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2018，30（9）：1703-1704.

[20]應(yīng)鑫.加味補(bǔ)陽還五湯治療缺血性腦卒中后抑郁癥的臨床觀察[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2018，16（18）：86-87.

（2019-07-20收稿?責(zé)任編輯：楊覺雄）