孟碩 彭勍 張鵬 劉建勛

摘要?目的：建立麻荊顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：應(yīng)用高效液相色譜法測定麻荊顆粒中麻黃堿、黃芩苷、甘草苷的含量，建立麻荊顆粒的高效液相指紋圖譜。結(jié)果：鹽酸麻黃堿在0.289 2～2.892 0 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9），黃芩苷在0.208 0～2.080 0 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9），甘草苷在0.192 0～1.920 0 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 9）。初步建立了麻荊顆粒顆粒的高效液相色譜指紋圖譜，相似度均在0.96以上，10批次樣品中確定了12個共有峰，并指認(rèn)其中5個共有峰。結(jié)論：本方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確可靠，能有效的為麻荊顆粒質(zhì)量控制提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞?麻荊顆粒;麻黃;黃芩;甘草;指紋圖譜;高效液相;提取工藝;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

Study on Quality Standard of Majing Granule

MENG Shuo，PENG Qiong，ZHANG Peng，LIU Jianxun

（Institute of Basic Medical Sciences of Xiyuan Hospital，China-Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing Key Laboratory of Chinese Materia Pharmacology，Beijing 100091，China）

Abstract?Objective：To establish the quality standard of Majing Granule.Methods：The contents of ephedrine，baicalin and glycyrrhizic glycoside were measured by HPLC.The HPLC fingerprint of Majing Granules was established.Results：There was a good linear relationship of ephedrine hydrochloride in the range of 0.289 2～2.892 0 μg（r=0.999 9）.There was a good linear relationship of baicalin in the range of 0.208 0～2.080 0 μg（r=0.999 9）.There was a good linear relationship of liquiritin in the range of 0.192 0～1.920 0 μg（r=0.999 9）.The HPLC fingerprint of Majing granules was preliminarily established，and the similarity was above 0.96.A total of 12 common peaks were identified in 10 batches of samples，and 5 of them were identified.Conclusion：This method is stable，accurate and reliable，which can provide the basis for the quality control of Majing Granule.

Keywords?Majing Granule; Herba Ephedrae; Radix Scutellariae; Radix Glycyrrhizae; Fingerprint; HPLC; Extraction process; Quality standard

中圖分類號：R286;R283.6文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.05.012

麻荊顆粒由麻黃、黃芩、甘草和牡荊油四味[此處麻荊顆粒是四味中藥，參見“《麻荊顆粒制備工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究》（碩士論文）/孟碩/中國中醫(yī)科學(xué)院/2016年”]中藥組成，來源于臨床驗(yàn)方，具有宣肺祛邪、清熱化痰的功效，臨床用來治療感冒后咳嗽、慢性支氣管炎等，經(jīng)臨床應(yīng)用多年，療效顯著[1]。為了更好的對麻荊顆粒進(jìn)行質(zhì)量控制，提高該制劑安全性和有效性，我們分別建立了這前三味藥材中的主要藥效成分鹽酸麻黃堿、黃芩苷、甘草苷的高效液相色譜含量測定方法[2]，并建立了麻荊顆粒高效液相指紋圖譜控制模式，嚴(yán)格控制該制劑的質(zhì)量[3-6]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本方法穩(wěn)定有效、準(zhǔn)確可靠，可為制定麻荊顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)做參照。

1?儀器與試藥

1.1?儀器

KQ-300型超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司）;AE240型精密分析天平（Mettler）;LABOROTA4001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Heidolph）;DZF-6050A型真空干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）;Agilent 1200系列高效液相色譜儀。

1.2?試劑

鹽酸麻黃堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：171241-200506）;麻黃對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：121051-201005）;黃芩苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110715-201016）;黃芩對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：120955-201309）;甘草酸銨對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110731-200615）;甲醇（色譜純Fisher）;乙腈（色譜純Fisher）;磷酸（色譜純Fisher）;三乙胺（色譜純Fisher）;水為娃哈哈純凈水。

2?方法與結(jié)果

2.1?麻黃堿含量測定

2.1.1?色譜條件?色譜柱：Phenomenex Polar-RP80A（4.6 mm×150 mm，4 μm）;流動相：甲醇-0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）（1.5∶98.5）[7];流速：1.0 mL/min;柱溫：30 ℃;檢測波長為210 nm，該色譜條件下，麻黃堿能與其他色譜峰達(dá)到基線分離。色譜圖見圖1。

2.1.2?對照品溶液的制備?取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成濃度為0.289 2 mg/mL的鹽酸麻黃堿對照品溶液，備用。

2.1.3?供試品溶液的制備?取麻荊顆粒0.50 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加入水至刻度超聲溶解，濾過，作為供試品溶液。精密稱取不含麻黃的陰性對照制劑0.50 g，同法制成陰性對照溶液。

2.1.4?線性關(guān)系的考察?取鹽酸麻黃堿對照品溶液，分別配制成濃度為28.92、57.84、115.68、173.52、231.36、289.20 μg/mL的溶液，進(jìn)樣10 μL，依據(jù)上述色譜條件測定，記錄峰面積。根據(jù)回歸分析繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程Y=20.552X-18.19（r=0.999 9），表明鹽酸麻黃堿在0.289 2～2.892 0 μg范圍線性關(guān)系良好。

2.1.5?精密度實(shí)驗(yàn)?取濃度為173.52 μg/mL的鹽酸麻黃堿對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，按上述色譜方法進(jìn)行測定，RSD為0.31%。

2.1.6?重復(fù)性實(shí)驗(yàn)?取麻荊顆粒樣品，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備6份樣品溶液，用高效液相法進(jìn)行含量測定測得平均含量為1.69 mg/g，RSD為1.10%。

2.1.7?穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)?取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣10 μL，鹽酸麻黃堿峰面積RSD為1.11%。

2.1.8?加樣回收率實(shí)驗(yàn)?取同一批號的麻荊顆粒樣品（含量為4.55 mg/g）6份，0.25 g/份，精密稱定，分別加入1.140 8 mg鹽酸麻黃堿對照品，依法制備樣品溶液，并進(jìn)行含量測定，計算回收率[8]。結(jié)果顯示，鹽酸麻黃堿的平均回收率為101.94%，RSD為0.71%。結(jié)果見表1。

2.1.9?樣品含量測定?取3批麻荊顆粒樣品，依據(jù)供試品溶液制備方法分別制成供試品溶液，高效液相色譜法測定樣品中麻黃堿的含量，結(jié)果見表4。

2.2?黃芩苷的含量測定

2.2.1?色譜條件?色譜柱：Waters Symmetry C18（3.9 mm×150 mm，3.5 μm）;流動相：甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）[9-10];流速：1.0 mL/min;檢測波長為280 nm。該色譜條件下，黃芩苷能與其他色譜峰達(dá)到基線分離。色譜圖見圖2。

2.2.2?對照品溶液的制備?取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為0.208 0 mg/mL的溶黃芩苷對照品溶液，備用。

2.2.3?供試品溶液的制備?取麻荊顆粒0.50 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加水至刻度，超聲溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。精密稱取不含黃芩的陰性對照制劑0.50 g，同法制成陰性對照溶液。

2.2.4?線性關(guān)系的考察?精密吸取黃芩苷對照品溶液，分別配成濃度為20.80、41.60、83.20、124.80、166.40、208.00 μg/mL的溶液，進(jìn)樣10 μL，依據(jù)上述色譜條件測定，記錄峰面積。根據(jù)回歸分析繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程Y=33.2X-37.863（r=0.999 9），表明黃芩苷在0.208 0～2.080 0 μg范圍線性關(guān)系良好。

2.2.5?精密度實(shí)驗(yàn)?取黃芩苷對照品溶液，進(jìn)樣6次，高效液相法進(jìn)行測定，結(jié)果RSD為0.23%。

2.2.6?重復(fù)性實(shí)驗(yàn)?取麻荊顆粒樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備6份樣品溶液，用高效液相法進(jìn)行含量測定，測得平均含量為17.40 mg/g，RSD為1.24%。

2.2.7?穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)?取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣10 μL，黃芩苷峰面積RSD為1.003%。

2.2.8?加樣回收率實(shí)驗(yàn)?取同一批次的麻荊顆粒樣品（含量為58.9 mg/g）6份，每份0.025，精密稱定，分別加入1.488 mg黃芩苷對照品，依法制備樣品溶液，并進(jìn)行含量測定，計算回收率。結(jié)果顯示，黃芩苷的平均回收率為98.37%，RSD為2.22%。結(jié)果見表2。

2.2.9?樣品含量測定?取3批麻荊顆粒樣品，依據(jù)供試品溶液制備方法分別制成供試品溶液，用高效液相法測定黃芩苷的含量，結(jié)果見表4。

2.3?甘草苷含量測定

2.3.1?色譜條件?色譜柱：Waters Symmetry C18（3.9 mm×150 mm，3.5 μm）;流動相：乙腈為流動相A，以0.05%磷酸為流動相B，梯度洗脫（0～8 min，19%A;8～35 min，19%～50%A;35～36 min，50%～100%A）[8];流速：1.0 mL/min;檢測波長為237 nm。該色譜條件下，甘草苷能與其他色譜峰達(dá)到基線分離。色譜圖見圖6。

2.3.2?對照品溶液的制備?稱取甘草苷對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成濃度為0.192 0 mg/mL的甘草苷對照品溶液，備用。

2.3.3?供試品溶液的制備?精密稱取麻荊顆粒0.20 g，置25 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻使其充分溶解，濾過，取濾液作為供試品溶。精密稱取不含甘草的陰性對照制劑0.20 g，同法制成陰性對照溶液。

2.3.4?線性關(guān)系的考察?精密吸取甘草苷對照品溶液，分別配成19.20，38.40，76.80，115.20，153.60，192.00 μg/mL的溶液，進(jìn)樣10 μL，依據(jù)上述色譜條件測定，記錄峰面積。根據(jù)回歸分析繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程Y=16.069X+14.99（r=0.999 9）。表明甘草苷在0.192 0～1.920 0 μg范圍線性關(guān)系良好。

2.3.5?精密度實(shí)驗(yàn)?取濃度為41.60 μg/mL的甘草苷對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，按上述色譜方法進(jìn)行測定，RSD為0.61%。

2.3.6?重復(fù)性實(shí)驗(yàn)?取麻荊顆粒樣品，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備6份樣品溶液，進(jìn)行高效液相含量測定，測得平均含量為2.56 mg/g，RSD為1.09%。

2.3.7?穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)?取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣10 μL，甘草苷峰面積RSD為1.103%。

2.3.8?加樣回收率實(shí)驗(yàn)?取同一批次的麻荊顆粒（含量為8.67 mg/g）6份，每份0.1 g，精密稱定，分別加入0.765 mg甘草苷對照品，用高效液相進(jìn)行含量測定，甘草苷的平均回收率為100.51%，RSD為1.71%，表明回收率的重復(fù)性良好。結(jié)果見表3。

2.3.9?樣品含量測定?取3批麻荊顆粒樣品，依據(jù)供試品溶液制備方法分別制成供試品溶液，進(jìn)行高效液相測定并計算甘草苷的含量，結(jié)果見表4。

2.4?指紋圖譜的建立

2.4.1?色譜條件?色譜柱：Phenomenex polar-RP80A（4.6×150 mm，4 μm）;以乙腈為流動相A，以0.5%磷酸水溶液為B，梯度洗脫;梯度洗脫（0～8 min，19%A;8～45 min，19%～50%A;45～46 min，50%～100%A;46～50 min，100%～19%A）檢測波長為210 nm;柱溫為25 ℃;流速為1.0 mL/min;進(jìn)樣量為10 μL。

2.4.2?混合對照品溶液的配制?精密稱定甘草苷、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、偽麻黃堿、甘草酸、麻黃堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.3 mg對照品的溶液，即得。

2.4.3?樣品溶液的配制?取麻荊顆粒0.1克，精密稱定置10 mL量瓶中，加水超聲溶解，定容至刻度，即得。

2.4.4?指紋圖譜的建立?取10批麻荊顆粒樣品，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，進(jìn)行高效液相測定，采用多點(diǎn)校正全譜峰匹配模式，共標(biāo)定12個共有峰。見圖4～5。并指認(rèn)峰1為麻黃堿，峰2為偽麻黃堿，峰7為甘草苷，峰8為黃芩苷，峰12為甘草酸。

將10批指紋圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2012版）軟件，進(jìn)行相似度評價。見表5。10批樣品相似度均大于0.96，說明10批麻荊顆粒的質(zhì)量穩(wěn)定。

3?討論

麻黃、黃芩和甘草是麻荊顆粒中三味主要藥材，其中麻黃辛散苦泄，溫通宣暢，入肺經(jīng)，外開皮毛之郁閉，內(nèi)降上逆之氣，宣發(fā)肅降，善治咳喘，故為君藥;黃芩苦寒，善清肺火及上焦實(shí)熱，配麻黃宣肺泄熱，平喘止咳;甘草，甘平，祛痰止咳，調(diào)和諸藥[11]。

本研究對麻荊顆粒方中三味藥材進(jìn)行了高效液相含量測定。參考中華人民共和國藥典以及文獻(xiàn)[12-17]報道，HPLC含量測定選取君藥麻黃的主要成分麻黃堿以及黃芩中的黃芩苷，甘草中甘草苷同時作為制劑含量測定的指標(biāo)成分，以確保麻荊顆粒質(zhì)量穩(wěn)定可靠。本實(shí)驗(yàn)建立了麻荊顆粒的高效液相指紋圖譜，系統(tǒng)地反映了其制劑化學(xué)成分的全貌，該圖譜方法的建立[18-19]，可作為麻荊顆粒的質(zhì)量控制方法。通過對麻荊顆粒顆粒的分析，共建立12個共有峰，其中指認(rèn)5個峰分別為麻黃堿、偽麻黃堿、黃芩苷、甘草苷、甘草酸。

在溶劑選擇過程中，分別采用水、甲醇作為溶劑對供試品進(jìn)行了溶解，結(jié)果顯示甲醇對供試品的溶解性較好，且在HPLC含量測定中，分離效果良好，雜質(zhì)峰無干擾，故選用純甲醇作為溶解溶劑。

麻荊顆粒由麻黃、黃芩、甘草和牡荊油四味藥組成，制劑中的化學(xué)成分復(fù)雜多樣。指紋圖譜可快速直觀的進(jìn)行制劑的定性鑒別，專屬性強(qiáng);選擇麻黃堿、黃芩苷、甘草苷作為HPLC含量測定的3個指標(biāo)性成分，進(jìn)行制劑的質(zhì)量控制。以上2種方法相結(jié)合，為麻荊顆粒臨床用藥的安全性和合理性提供了科學(xué)依據(jù)。

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（2018-11-08收稿?責(zé)任編輯：蒼寧）