吳斌 梁文啟 王美堂

上海長海醫(yī)院急診科（上海200082）

膿毒癥是一種由感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）［1-3］。我國膿毒癥的發(fā)病率高，病死率也高［4-5］。雖然抗生素、血管活性劑和腎透析在膿毒癥治療中的應(yīng)用使疾病預(yù)后得到了極大改善，但膿毒癥的病死率仍較高［6-7］。因此，在膿毒癥中尋找新的有效的生物學標記物，對于提高診斷敏感性、監(jiān)測疾病進展和改善預(yù)后是必要的。

研究表明，通過調(diào)控炎癥相關(guān)基因的表達，多種lncRNA參與了對微生物感染的急性炎癥反應(yīng)［8］。而且，血清lncRNA ITSN1?2［9］、lncRNA NEAT1［10］和lncRNA ZFAS1［11］已被發(fā)現(xiàn)可作為生物學標志物用于膿毒癥診斷及評估疾病嚴重程度和患者預(yù)后。XU等［12］報道循環(huán)lncRNA IFNG?AS1的表達與冠狀動脈疾病患者疾病風險增加、疾病嚴重程度增加和炎癥因子升高相關(guān)，然而IFNG?AS1在膿毒癥中的作用尚不清楚。因此，本研究基于以往對IFNG?AS1相關(guān)研究，進一步探究IFNG?AS1在膿毒癥患者血清中的表達，了解其表達的意義及相應(yīng)的臨床應(yīng)用價值。

1 資料和方法

1.1 樣本采集 本研究共采集了70例膿毒癥患者和60例健康對照者（HC）的外周血并分離血清，樣本均在患者入院后24 h內(nèi)采集。本研究由本院研究倫理委員會批準，所有參與本研究的研究對象均簽署了知情同意書。

1.2 血清RNA提取及qRT?PCR 血清IFNG?AS1的表達采用qRT?PCR實驗進行檢測。血清樣品中的RNA使用Trizol LS試劑（Invitrogen）提取。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和qPCR反應(yīng)分別采用PrimeScript RT Reagent Kit試劑盒（Takara）和TB Green Fast qPCR Mix試劑盒（Takar）進行。引物序列，IFNG?AS1?F：5′?AAACGCTGGAGGAGAAGTCA?3′，IFNG?AS1?R：5′?GCCCCTCCAGGTCTAAATAA?3′；GAPDH為 內(nèi)參，GAPDH?F：5′?GAGTCAACGGATTTGGTCGT?3′，GAPDH?R：5′?TTGATTTTGGAGGGATCTCG?3′。

1.3 炎性細胞因子檢測 血清炎性細胞因子TNF?α、IL?1β、IL?6、IL?8和IL?10的濃度使用酶聯(lián)免疫檢測試劑盒（R&D公司）測定。

1.4 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件對統(tǒng)計分析，結(jié)果以均數(shù)±標準差表示。組間比較使用t檢驗，采用Spearman法進行相關(guān)性分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 基線資料比較 膿毒癥患者與健康對照者的性別、年齡和BMI差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。膿毒癥患者APACHEⅡ評分均值為（15.76±6.83）。見表1。

表1 膿毒癥患者與健康對照者臨床因素比較Tab.1 Comparison of clinical factors between sepsis patients and healthy controls M（P25，P75）

2.2 膿毒癥患者血清IFNG?AS1的表達及作為診斷標志物的價值 qRT?PCR檢測發(fā)現(xiàn)，膿毒癥患者血清IFNG?AS1的表達明顯高于健康對照者（圖1A，P＜0.05）。ROC曲線結(jié)果表明IFNG?AS1的對于診斷膿毒癥具有較高價值（圖1B，P＜0.001）。AUC=0.780，約登指數(shù)最大為0.460，此處敏感度和特異性分別為74.3%和71.7%。因此，IFNG?AS1有作為診斷膿毒癥的血清標志物的潛力。

圖1 膿毒癥患者和健康對照者血清IFNG?AS1表達及ROC曲線Fig.1 Serum IFNG?AS1 expression and ROC curve of sepsis patients and healthy controls

2.3 IFNG?AS1表達與APACHEⅡ評分、CRP和炎性細胞因子的相關(guān)性 相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，IFNG?AS1的表達與APACHEⅡ評分顯著正相關(guān)。同時，IFNG?AS1的表達與炎癥標志物CRP及炎性細胞因子TNF?α、IL?1β、IL?6、IL?8呈正相關(guān)，而與IL?10呈負相關(guān)。見表2。

表2 IFNG?AS1表達與APACHEⅡ評分、CRP和炎性細胞因子的相關(guān)性分析Tab.2 Correlation analysis of IFNG?AS1 expression with APACHEⅡscore，CRP and inflammatory cytokines

2.4 IFNG?AS1表達對膿毒癥患者預(yù)后的預(yù)測價值 70例膿毒癥患者中，有49例患者生存，21例患者死亡。死亡患者的IFNG?AS1表達顯著高于生存患者（圖2A）。ROC曲線結(jié)果表明IFNG?AS1可以作為區(qū)分膿毒癥生存患者和死亡患者的標志物（圖2B，P＜0.001），AUC=0.763，約登指數(shù)最大為0.374，此處敏感性和特異性分別為90.5%和46.9%。

3 討論

目前研究［13-18］表明，長非編碼RNA參與膿毒癥病理過程，包括NEAT1、ZNFX1、MALAT1等。本研究表明，膿毒癥患者血清IFNG?AS1的表達高于對照者，并且ROC曲線分析顯示IFNG?AS1對于診斷膿毒癥的最高敏感度和特異性可高達74.3%和71.7%。筆者認為IFNG?AS1可作為一個很好的血清標志物在臨床上用于膿毒癥的診斷。

圖2 膿毒癥生存患者和死亡患者血清IFNG?AS1表達及ROC曲線Fig.2 Serum IFNG?AS1 expression and ROC curve of survival and death patients with sepsis

此外，本研究通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血清IFNG?AS1表達與APACHEⅡ評分和CRP、TNF?α、IL?1β、IL?6、IL?8呈正相關(guān)，而與而與IL?10呈負相關(guān)。APACHEⅡ評分為急性生理與慢性健康評分，是對疾病嚴重程度的評估［19］。CRP為感染性炎癥標志物，TNF?α、IL?1β、IL?6、IL?8為促炎細胞因子，IL?10為抗炎細胞因子［20］。因此，血清IFNG?AS1水平可用于評估膿毒癥的嚴重程度及機體的炎癥反應(yīng)狀態(tài)。

在膿毒癥患者中，死亡患者血清IFNG?AS1的水平明顯高于生存患者，ROC分析顯示IFNG?AS1表達能夠區(qū)分死亡患者者和生存患者。此結(jié)果說明IFNG?AS1對于膿毒癥患者的預(yù)后具有較好的預(yù)測價值。本研究的新穎之處在于發(fā)現(xiàn)了可作為膿毒癥血清標志物的新基因——IFNG?AS1，且分析了其與臨床因素的相關(guān)性。本研究仍有不足之處，未研究IFNG?AS1高表達的機制及其在疾病進程中的作用，這也是下一步的研究方向。

綜上，在膿毒癥患者中，血清IFNG?AS1表達升高，可作為診斷膿毒癥的潛在生物學標志物；IFNG?AS1的表達水平與疾病嚴重程度、促炎細胞因子的表達以及疾病的預(yù)后相關(guān)。