潘正坤 ，孫迪 ，左至恒 ，何天慶 ，陳嗣建 ，李啟標 ，卓孝磊 ，梁鈞然 ，鄒記興 ，周愛國 ，

（1.華南農(nóng)業(yè)大學海洋學院，廣東 廣州 510642；2.連山壯族瑤族自治縣農(nóng)業(yè)科學研究所（示范農(nóng)場）；廣東 連山 513200；3.清遠市農(nóng)業(yè)科技推廣服務(wù)中心，廣東 清遠 511510；4.碧波農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司，廣東 肇慶 526000）

禾花鯉屬鯉科溫水性小型魚類，原產(chǎn)于廣西桂林，是中國特有的鯉科魚類，因以稻田禾花為食而得名。禾花鯉活動能力較弱，故而能在稻田小水體中養(yǎng)殖。近年來，由于其鮮香味美、生態(tài)健康的特點，深受消費者歡迎，成為鯉科魚類中新興熱門養(yǎng)殖品種。稻田養(yǎng)殖禾花鯉，充分提高了資源利用效率，水稻為禾花鯉提供了食物，禾花鯉排泄物也為水稻生長提供了營養(yǎng)元素，加速了物質(zhì)循環(huán)，提高了農(nóng)田綜合利用率。禾花鯉養(yǎng)殖周期短，市場價格高，經(jīng)濟效益可觀，全國多地已在推廣稻田養(yǎng)殖禾花鯉。麥溪鯉原產(chǎn)地肇慶高要區(qū)，養(yǎng)殖水源為優(yōu)質(zhì)的西江水，麥溪鯉生性活躍，游泳迅速，喜歡逆水而上，養(yǎng)出的魚肉質(zhì)肥嫩，甘香可口。麥溪鯉因其高品質(zhì)深受市場青睞，是肇慶的暢銷特產(chǎn)。2012年，麥溪鯉榮獲國家地理標志產(chǎn)品保護。

魚類的血液生理生化及免疫指標可以反映魚體自身抗病力，相關(guān)物質(zhì)的含量和活性可以在很大程度上衡量判斷養(yǎng)殖魚類的免疫能力，是魚類免疫能力的物質(zhì)基礎(chǔ)。研究不同養(yǎng)殖條件下的鯉魚血液生理生化及免疫指標，可以綜合評價不同養(yǎng)殖模式下鯉品種的免疫能力，以期為高效養(yǎng)殖模式的探索提供一定的理論依據(jù)。該試驗，選取清遠連山稻田養(yǎng)殖禾花鯉品種和肇慶的池塘養(yǎng)殖麥溪鯉品種，測定其血液生理生化及免疫指標，分析兩個鯉品種的免疫特性，為禾花鯉和麥溪鯉的健康養(yǎng)殖提供一定的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

禾花鯉采集于清遠連山壯族瑤族自治縣示范農(nóng)場稻田養(yǎng)魚示范基地（30～50 g），麥溪鯉采集于肇慶碧波農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司的池塘養(yǎng)殖品種（80～100 g）。飼養(yǎng)于水產(chǎn)養(yǎng)殖系實驗室水族箱，暫養(yǎng)一周。每組設(shè)3個平行，每個平行放養(yǎng)10尾魚，水族箱規(guī)格：1 m×1 m×0.8 m。采樣前禁食24 h，再進行樣品采集。

1.2 樣本和數(shù)據(jù)采集

從每個水族箱隨機捕撈5尾魚，稱重。用注射器從尾部抽取靜脈血，注入1.5 mL離心管，一部分用EDTA-二鉀抗凝，收集到離心管中用于生理指標的測定。另一部分以肝素鈉抗凝的魚血，靜置4 h后，4 000 r/min離心8 min，收集上清液用于免疫和生化指標的測定。

1.3 血清生理生化指標測定

參照徐革鋒等的方法[1]，使用全自動血細胞分析儀（型號為 Cell-Dum3700，購自美國 Abbott Laboratories公司），測定16項生理指標；參照張永泉等的方法[2]，使用全自動生化分析儀（型號為BS-200，購自深圳邁瑞公司），測定23種血液生化指標。用南京建成試劑盒測兩種鯉魚血清的超氧化物歧化酶、微量丙二醛、溶菌酶、酸性磷酸酶、谷胱甘肽過氧化物酶這五個免疫酶指標。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析方法

以“平均值±標準誤”表示試驗結(jié)果。應(yīng)用SPSS 24.0軟件進行生物學統(tǒng)計分析，通過獨立樣本的t檢驗區(qū)分各生理生化指標差異的統(tǒng)計學意義。當P＞0.05表示沒有統(tǒng)計學意義性差異；0.01＜P＜0.05表示存在統(tǒng)計學意義性差異；P＜0.01表示存在極具統(tǒng)計學意義性差異。

表1 禾花鯉、麥溪鯉血液生理指標比較

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種鯉魚生理生化指標的對比分析

由檢測結(jié)果可知，禾花鯉血液中的淋巴細胞百分比、嗜酸性粒細胞百分比、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白、平均紅細胞血紅蛋白含量、平均紅細胞血紅蛋白濃度分別為（26.3±3.36）%、（0.17±0.07）%、（1.14±0.24）1012/L、（89.3 ±8.17）g/L、（82.67 ±10.72）/pg 和（498±44.16）/%，顯著低于麥溪鯉（P＜0.05）。禾花鯉血液中的中性粒細胞百分比、白細胞計數(shù)分別為（71.57±4.22）%、（69.7±22.98）1012/L，高于麥溪鯉，但不顯著（P＞0.05）。禾花鯉血液中的單核細胞百分比、紅細胞壓積、血小板計數(shù)分別為（1.4±0.7）%、（17.63±3.77）%、（49.33±12.33）1012/L，低于麥溪鯉，但不顯著（P＞0.05）。兩種魚血液中的其他生理指標相差較小，差異不明顯。

由檢測結(jié)果可知，禾花鯉的血清總蛋白、血清白蛋白、球蛋白分別為（30.2±0.81）g/L、（10.77±0.44）g/L、（19.43±1.12）g/L，顯著高于麥溪鯉（P＜0.05）。禾花鯉的血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、肌酐分別為（385.3±49.93）IU/L、（725.33±21.14）IU/L、（29.33±5.17）μmol/L，極顯著高于麥溪鯉（P＜0.01）。禾花鯉和麥溪鯉血液中的血鉀、血鈉、血氯、血總鈣、血糖相比差異不具統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表2 禾花鯉、麥溪鯉血液生化指標比較

2.2 免疫指標的對比分析

2.2.1 兩種鯉魚血清的超氧化物歧化酶（SOD酶）活性比較 由圖1可知，禾花鯉血清中SOD酶活性為（175±2.89）U/mL，略低于麥溪鯉（182.7±1.67）U/ml，但差異不具統(tǒng)計學意義（P＞0.05）說明兩種鯉魚之間SOD酶活性沒有顯著差異。

2.2.2 兩種鯉魚血清的丙二醛（MDA酶）含量比較由圖2可知，禾花鯉血清中微量丙二醛的含量為（5.09±0.22）nmol/mL，顯著高于麥溪鯉血清中微量丙二醛的含量（2.66±0.30）nmol/mL（P＜0.05）。說明兩種鯉魚血清中的丙二醛降解酶活性存在差異，且麥溪鯉的丙二醛酶活性強于禾花鯉。

2.2.3 兩種鯉魚血清的溶菌酶（LZM）活性比較 由圖3可知，禾花鯉血清中溶菌酶的活性為（221.7±11.3）U/mL，極顯著低于麥溪鯉血清中溶菌酶的活性（524.3±23.1）U/mL（P＜0.01）。說明麥溪鯉的血清溶菌酶活性極顯著強于禾花鯉。

2.2.4 兩種鯉魚血清的酸性磷酸酶（ACP）活性比較由圖4可知，禾花鯉血清中酸性磷酸酶活性為（3.58±0.173）U/mL，麥溪鯉血清中酸性磷酸酶活性為（3.56±0.127）U/mL，差異不具統(tǒng)計學意義（P＞0.05）說明兩種鯉魚之間超氧化物歧化酶活性沒有統(tǒng)計學意義差異。

2.2.5 兩種鯉魚谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活性比較 由圖5可知，禾花鯉血清中谷胱甘肽過氧化物酶的活性為（106.7±5.2）U/mL，顯著低于麥溪鯉血清中谷胱甘肽過氧化物酶活性（140.4±3.1）U/mL（P＜0.05）。說明麥溪鯉的血清谷胱甘肽過氧化物酶活性明顯強于禾花鯉。

3 討論

3.1 兩個鯉品種血液生理生化指標的差異分析

研究表明，魚類血液的多項指標與其活動能力及食性密切相關(guān)，正常情況下，活動能力強的魚類高于活動能力弱的魚類[3]。該研究中，禾花鯉與麥溪鯉血液生理特點與其活動特性也表現(xiàn)出了上述規(guī)律。由表1中兩個鯉魚品種血液生理指標可知，禾花鯉血液中的淋巴細胞百分比、嗜酸性粒細胞百分比、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白、平均紅細胞血紅蛋白含量、平均紅細胞血紅蛋白濃度，顯著低于麥溪鯉（P＜0.05）。紅細胞能夠運輸氧氣及二氧化碳和調(diào)節(jié)機體免疫功能。一般情況下，魚類血液中的血紅蛋白數(shù)量與魚類耐低氧能力和水環(huán)境中的含氧量有關(guān)[4]。由表1可知，禾花鯉血液中的紅細胞數(shù)和平均紅細胞血紅蛋白含量都顯著低于麥溪鯉，說明禾花鯉的耐低氧能力弱于麥溪鯉。魚類白細胞承擔魚類機體特異性免疫和非特異性免疫的主要機能，白細胞的數(shù)量變化情況可以作為機體免疫指標[5-6]。由表1可知，禾花鯉血液中的嗜酸性粒細胞、淋巴細胞百分比顯著低于麥溪鯉。根據(jù)試驗結(jié)果分析，禾花鯉的耐低氧能力和凝血能力弱于麥溪鯉，與根據(jù)紅細胞數(shù)分析得出的禾花鯉的耐低氧能力弱于麥溪鯉的結(jié)論一致。魚類機體的營養(yǎng)和代謝情況可以在血液中的相關(guān)指反映出來。由表2中兩個鯉魚品種血液生化指標可知，禾花鯉的血清總蛋白、血清白蛋白、球蛋白顯著高于麥溪鯉，說明禾花鯉的吸收與代謝水平高于麥溪鯉。

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶與天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶是重要的轉(zhuǎn)移酶，酶活性與肝細胞健康程度成反比。由表2可知，禾花鯉的兩種轉(zhuǎn)移酶活性均極顯著高于麥溪鯉，表明麥溪鯉肝臟比麥溪鯉更加健康。血清肌酐的濃度與腎小球濾過能力成反比，由表2可知，禾花鯉的肌酐濃度極顯著高于麥溪鯉，表明麥溪鯉腎小球的濾過能力比禾花鯉更強。

根據(jù)對兩個鯉品種血液生理指標的分析，得出結(jié)論禾花鯉的耐低氧能力和凝血能力弱于麥溪鯉。正常情況下，活動能力強的魚類耐低氧能力高于活動能力弱的魚類，研究結(jié)果與實際情況相符合。所以，在禾花鯉養(yǎng)殖中要注意保證水中的溶氧量，必要時采取人工增氧措施。在活魚運輸過程中要特別注意增氧，避免禾花鯉因缺氧死亡而造成損失。禾花鯉的血清總蛋白、血清白蛋白、球蛋白、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、肌酐顯著高于麥溪鯉，表明禾花鯉的蛋白質(zhì)吸收與代謝水平高于麥溪鯉，但麥溪鯉的肝臟和腎臟的解毒、濾過能力強于麥溪鯉。肝膽綜合征已成為困擾水產(chǎn)業(yè)的一個流行病癥，在禾花鯉的池塘養(yǎng)殖中，一方面要合理投喂、保持水質(zhì)，另一方面可在飼料中加入維生素或中藥制品，進行禾花鯉的保肝護肝。

3.2 兩個鯉品種血清免疫指標的差異分析

在測定的兩個鯉品種 5個血液免疫指標中，麥溪鯉血液中的丙二醛酶（MDA）、溶菌酶（LZM）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）均顯著強于禾花鯉（P＜0.05）。魚類的免疫能力以非特異性免疫為主，以上五種酶類在一定程度上代表了兩個鯉品種的抗氧化性能，可以作為分析不同鯉魚品種免疫能力的依據(jù)。丙二醛是生物體內(nèi)發(fā)生過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，可引起蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的交聯(lián)聚合，具有細胞毒性[7]。其能經(jīng)血液被運送到肝臟中，在肝臟中分解代謝，過多會導(dǎo)致代謝異常，損傷肝臟，進而影響機體的正常代謝。試驗結(jié)果顯示麥溪鯉血液中丙二醛的濃度顯著低于禾花鯉，表明其肝臟中分解丙二醛相關(guān)酶的活性強于禾花鯉，代謝丙二醛能力更強。溶菌酶可與病毒蛋白直接結(jié)合，與核酸、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活。實驗結(jié)果顯示麥溪鯉血液中溶菌酶的活性顯著高于禾花鯉，表明其水解病菌的能力強于禾花鯉，更能抵御水體中的細菌、病毒。谷胱甘肽過氧化物酶可以起到保護細胞、維持機體正常生理功能的作用[8]。其含量的變化可以間接反映環(huán)境中有毒污染物質(zhì)的存在，在污染物的存在下，谷胱甘肽過氧化物酶含量可能會發(fā)生增加或者抑制[9]。試驗結(jié)果顯示麥溪鯉血液中谷胱甘肽過氧化物酶的活性顯著高于禾花鯉，表明其抵御環(huán)境中有毒有害物質(zhì)和抗氧化能力強于禾花鯉。

綜合試驗結(jié)果，可以發(fā)現(xiàn)，所測定的五項免疫指標中，麥溪鯉有三項顯著高于禾花鯉，其余二項差異不顯著，可以確定麥溪鯉的綜合免疫能力強于禾花鯉。該試驗的禾花鯉品種采集自清遠連山，麥溪鯉品種采集自肇慶。禾花鯉的養(yǎng)殖模式為稻田養(yǎng)殖，相比麥溪鯉的池塘養(yǎng)殖，稻田水體小，水體環(huán)境日變化較大，故在養(yǎng)殖過程中應(yīng)加強巡田、定期觀測水質(zhì)、適時調(diào)節(jié)水深。由于禾花鯉市場價格較高，已有地區(qū)探索進行池塘養(yǎng)殖，養(yǎng)殖標準經(jīng)常是參考普通鯉魚品種的池塘養(yǎng)殖方法，采用高密度、高投入、高產(chǎn)出的養(yǎng)殖模式，但根據(jù)該試驗的測定結(jié)果，禾花鯉的免疫能力較普通鯉魚品種較弱。所以，在禾花鯉的養(yǎng)殖過程中，適當減少養(yǎng)殖密度，加強水質(zhì)調(diào)控，投喂優(yōu)質(zhì)餌料，不可為追求高收益而盲目進行高密度養(yǎng)殖。

綜上分析，禾花鯉的免疫能力、耐低氧能力和肝臟、腎臟的解毒能力均在一定程度上弱于麥溪鯉?？梢哉J為禾花鯉的養(yǎng)殖難度大于麥溪鯉，對養(yǎng)殖條件要求較高，這可能是禾花鯉市場價遠遠高于麥溪鯉的原因之一。在養(yǎng)殖禾花鯉的過程中，應(yīng)當考慮到禾花鯉的上述特性，做好水環(huán)境調(diào)控、增氧、保肝護肝等工作。該試驗得出的結(jié)論與實際情況較為符合，可以在一定程度上作為禾花鯉和麥溪鯉養(yǎng)殖參考。若要更深入禾花鯉與麥溪鯉的免疫與生理生化特性，可采集不同養(yǎng)殖模式中的禾花鯉或麥溪鯉做進一步檢測，以便為兩個鯉品種的健康養(yǎng)殖提供科學依據(jù)。