王亞妮，武艷芍

（山西運城農(nóng)業(yè)職業(yè)技術學院，山西 運城 044000）

草莓，多年生草本植物，靠匍匐莖進行繁殖，經(jīng)過多年種植后易感染病毒，導致品質及產(chǎn)量降低，經(jīng)濟效益下降。目前，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，針對病毒病還沒有好的防治藥物，最好的解決辦法就是對植物進行脫毒。常用的脫毒方法有：熱處理法、莖尖培養(yǎng)脫毒法及其他脫毒法[1]。本文主要介紹在生產(chǎn)實踐中常用的、與組織培養(yǎng)有關的莖尖培養(yǎng)脫毒的方法。莖尖培養(yǎng)脫毒法，不僅可以快速繁殖大量優(yōu)質種苗，有利于品種提純和更新，還可以脫除病毒、增加無病毒種苗的繁殖，加快新品種推廣。本試驗采取莖尖培養(yǎng)法培養(yǎng)草莓苗，對脫毒草莓苗進行繼代培養(yǎng)及生根培養(yǎng)，觀察培育出的脫毒草莓苗生長情況。

1 草莓外植體接種

1.1 草莓外植體取材及莖尖培養(yǎng)脫毒法

莖尖培養(yǎng)脫毒法是指采取莖尖分生組織進行離體培養(yǎng)，獲取無病毒苗的一種方法。草莓莖尖培養(yǎng)多以匍匐莖的頂端作為外植體，采取4月中旬及10月中旬匍匐莖的頂端為最佳時機。

取材：4月—5月是匍匐莖生長最多的季節(jié)，當匍匐莖長到15～20 cm長的時候，從健壯植株上剪取頂芽梢段3～5 cm，一般最遲不宜超過4月18日；材料消毒：將從匍匐莖頂端采來的3～5 cm的芽剝?nèi)ゴ笕~片，用自來水沖洗干凈，用質量分數(shù)75%的酒精浸泡30 s，再用質量分數(shù)1%～3%的次氯酸鈉或5%～7%的漂白粉溶液消毒10～20 min，最后用無菌水沖洗外植體材料4～5次；剝?nèi)∏o尖：將已消毒好的芽放在滅過菌的濾紙上，置于解剖鏡下剝?nèi)∏o尖。首先剝?nèi)ネ鈱佑兹~，在解剖鏡下用鋒利且刀片尖細的解剖刀進行迅速準確地切取莖尖，切下帶1～2個葉原基的生長點（0.3～0.5 mm），圖1為顯微鏡下放大40倍后剝?nèi)∏o尖的圖片。

莖尖培養(yǎng)：將切取的莖尖立即接至提前制備好的初代培養(yǎng)基（MS培養(yǎng)基+6-BA1.0 mg/L+IBA0.2 mg/L+GA0.2 mg/L）上進行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：25℃+2℃，每天以10～16 h，2 000 Lx光照下培養(yǎng)。

莖尖培養(yǎng)脫毒法中，通常切取的莖尖越小，脫毒效果越好，但同時莖尖培養(yǎng)成活率又會變低，所以應準確把握好切取莖尖的大小。圖1為切取的莖尖顯微照片，芽莖分化一般需40～50 d；圖2為接種好的莖尖初代培養(yǎng)圖片；圖3為分化后的草莓脫毒苗。

1.2 脫毒草莓苗的繼代培養(yǎng)

草莓的增殖培養(yǎng)為MS培養(yǎng)基（其中蔗糖：30 mg/L，瓊脂7 g/L，pH5.8），激素使用 IBA:0.1mg/L；GA：0.1 mg/L ，本試驗中設置 3個 6-BA濃度：0.5 mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L，觀察不同濃度的6-BA條件下草莓脫毒苗分化及生長情況：當6-BA濃度過高時，形成的芽叢呈蓮座狀；當濃度過低時，形成的芽少，芽長勢好，但增殖較慢；當6-BA濃度為1.0 mg/L時，芽叢生長量多少適宜，芽勢生長良好，見表1。

表1 不同濃度6—BA條件下草莓增殖與生長情況Tab.1 Strawberry proliferation and growth under different concentrations of 6-BA

繼代培養(yǎng)條件：繼代接種后需要保持適宜的培養(yǎng)條件：25℃+2℃的溫度，16 h光照和2 000 Lx的光照度條件下進行培養(yǎng)。圖4為草莓脫毒苗繼代擴繁后圖片。

2 草莓脫毒苗的生根培養(yǎng)

草莓生根比較容易，在繼代培養(yǎng)過程中，個別苗也會長根，為了保證生根的統(tǒng)一整齊程度，把繼代培養(yǎng)后生長健壯的植株轉接入生根培養(yǎng)基中，其余植株轉接到新鮮的繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)擴繁。生根培養(yǎng)以MS為基本培養(yǎng)基，除去6-BA，GA激素，添加吲哚丁酸IBA，本試驗中設置了3個IBA濃度，分別為0.1 mg/L、0.2 mg/L和0.3 mg/L。經(jīng)過培養(yǎng)后觀察發(fā)現(xiàn)當IBA濃度為0.3 mg/L時草莓苗生根最好，根多且粗壯。圖5為草莓生根培養(yǎng)圖片。

生根后的瓶苗，直接移栽成活率不高，需要在溫室或大棚進行過渡，過渡煉苗后使瓶苗逐步適應外界生長環(huán)境，再移栽到大田，以提高瓶苗成活率[2]。具體方法如下：生根培養(yǎng)待瓶苗中的根長至2～3 cm，將瓶苗移出培養(yǎng)間，除去瓶蓋進行煉苗，此時需將瓶蓋虛掩蓋上，以免瓶苗會因適應外界環(huán)境變化出現(xiàn)萎蔫現(xiàn)象。煉苗待試管苗恢復正常后，再徹底去瓶蓋，其間一般需要7～10 d。

鍛煉后，將苗從瓶中取出，洗掉基部粘連的培養(yǎng)基，移栽到提前裝好基質的穴盤，置于塑料大棚中，且在大棚內(nèi)再做小拱棚以達到保濕效果。7～10 d后，待苗長出新葉后，再進一步除去塑料小拱棚，讓苗適應大棚環(huán)境。經(jīng)過20～30 d的過渡移栽后，可將脫毒草莓苗移栽到大田。圖6為脫毒草莓苗煉苗移栽圖片。

本試驗通過采取4月中旬草莓匍匐莖的頂端作為外植體，在解剖鏡下剝?nèi)∏o尖進行初代培養(yǎng)，獲得脫毒草莓苗；再對脫毒草莓苗進行繼代及生根培養(yǎng)，確定了草莓脫毒苗繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)時激素的最佳使用范圍和濃度，并介紹了煉苗移栽的做法，為草莓脫毒苗的快繁技術提供理論依據(jù)。