姜武，王聲淼，葉傳盛，梅建偉，吳志剛，陶正明*

(1.浙江省亞熱帶作物研究所，浙江 溫州 325005；2.慶元縣農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)發(fā)展服務中心，浙江 麗水 323800；3.麗水億康生物科技有限公司，浙江 麗水 323800；4.慶元縣慶元林場，浙江 麗水 323800)

黃精藥材味甘，性平，其食藥同源的特性，自古就被我國佛家、道家以及醫(yī)藥學家所重視[1]。我國黃精屬藥用植物豐富，全球有60余種，其中31種分布于除我國南方熱帶以外的廣大地區(qū)[2]。多花黃精(PolygonatumcyrtonemaHua)為百合科黃精屬多年生草本植物，其干燥根莖為《中國藥典》2015年版收載品種之一，始載于《名醫(yī)別錄》[3-4]。多花黃精野生資源主要分布在安徽、貴州、浙江、湖南、云南等地。發(fā)展林藥經(jīng)濟符合“綠水青山就是金山銀山”的理念，符合“一畝山萬元錢”發(fā)展思想。遮陰有利于多花黃精的生長[5]，作為重要的林源藥材資源，近年來多花黃精人工種植發(fā)展迅速。

黃精藥材含有多種活性成分，主要包括多糖、萜類、生物堿、黃酮類、甾醇類及揮發(fā)油等[6-8]，其中多糖在黃精中含量最大，為其主要藥效成分，2015年版《藥典》將黃精多糖和醇浸出物作為評價黃精藥材質(zhì)量的主要依據(jù)[9-10]。多花黃精采收時間是黃精生產(chǎn)加工的關鍵問題之一，不同采收時期直接影響藥材的產(chǎn)量和品質(zhì)[11]。歷代本草有記載，黃精宜“二月采”或“八月采”，而《藥典》則規(guī)定“春秋二季采挖”[12]。然而，上述采收時期只提供了采收月份的建議，對于生長幾年黃精的質(zhì)量最優(yōu)和采后初加工的成分變化均未提及。多花黃精分布廣泛，各栽培省份在氣候和土壤等方面存在差異，如貴州、云南產(chǎn)多花黃精最佳采收期為12月至翌年1月[13-14]，泰山產(chǎn)黃精宜在春秋季采收[15]，陜西產(chǎn)黃精最佳采收期在10月底至11月初[16]。近年來多花黃精人工栽培面積在浙江省逐年增加，而浙產(chǎn)多花黃精最佳采收期的相關研究卻未見報道。因此，研究評價不同種源地浙產(chǎn)多花黃精的品質(zhì)，揭示不同生長年限、不同采收月份對浙產(chǎn)黃精有效成分的影響，對浙江黃精產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展有一定意義。

1 材料與方法

1.1 試驗樣品采集及處理

于2018年8—9月采集浙江省共11個多花黃精種源(表1)，每個種源采集5株以上。樣品經(jīng)溫州大學胡仁勇副教授鑒定為多花黃精。樣品洗凈，除去須根，統(tǒng)一選取2～3年生齡節(jié)測定不同種源地黃精多糖及醇溶性浸出物。

不同齡節(jié)多花黃精品質(zhì)及初加工研究。2018年11月(地上部分剛枯萎)，采集麗水億康生物科技有限公司錐栗林下多花黃精栽培示范基地五年生植株，區(qū)分1～5年生齡節(jié)，將供試樣品洗凈、除須根，備用。

不同月份多花黃精品質(zhì)研究。2018年3月至2019年1月，每隔2個月采集麗水億康生物科技有限公司錐栗林下多花黃精栽培示范基地五年生植株，將供試樣品洗凈、除須根，選取3年生齡節(jié)備用。

1.2 儀器

UV-6100型紫外可見分光光度計(上海美譜達儀器有限公司)；BSA124S型萬分之一天平(賽多利斯科學儀器有限公司)；SXL-1002型程控箱式電爐(上海精宏實驗設備有限公司)；ZN28YC808-130型電蒸鍋(浙江蘇泊爾股份有限公司)；BGZ-146型電熱鼓風干燥箱(上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司)；YCH-4型水浴鍋(金壇市城西崢嶸實驗儀器廠)。

1.3 試驗方法

1.3.1 折干率

供試備用的多花黃精根莖洗凈晾干后稱取鮮重，65 ℃烘干至恒重后稱取干重，計算折干率。

折干率/%=干重/鮮重×100。

1.3.2 樣品制備及加工炮制

將多花黃精根莖于105 ℃殺青30 min，60 ℃烘干至恒重。粉碎，過0.3 mm篩，即得試樣粉末樣品。

取3年生11月采集的多花黃精根莖，平均分成10份，分別盛放于硼硅酸鹽玻璃盒，再將玻璃盒置電蒸鍋蒸屜中蒸8 h后燜過夜，次日曬干，直至重復9次止，得9份不同炮制次數(shù)的樣品及1份未炮制樣品，粉碎后過0.3 mm的篩，即得炮制試樣粉末。

1.3.3 灰分及水分測定

取各供試品2 g，精密稱定于坩堝中，用電爐緩緩加熱，注意避免燃燒，至完全炭化至無煙，將坩堝置于程控箱式電爐中，逐漸升高溫度至(550±25)℃，保持2 h，使之完全灰化并至恒重。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中含總灰分的百分數(shù)。水分測定按2015年版《藥典》四部通則0832第四法甲苯法測定。

1.3.4 浸出物含量測定

取各供試品1 g，精密稱定于100 mL的錐形瓶中，精密加入50%乙醇溶液40 mL，加塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，加塞，再稱定重量，用50%乙醇溶液補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過。精密量取濾液10 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。

1.3.5 總糖及多糖含量測定

對照品溶液的制備。精密稱取經(jīng)105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品33 mg，置于100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得質(zhì)量濃度為0.33 g·L-1無水葡萄糖對照品溶液。

標準曲線的制備。精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分別置15 mL離心管中，各加水至2.0 mL，搖勻，緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液8 mL，加蓋混勻，放冷至室溫，以相應試劑為空白，在582 nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程y=1.106 1x-0.001 7(R2=0.999 1)。

總糖含量的測定。精密稱取供試品0.5 g于50 mL離心管中，加50 mL水，沸水浴2 h。趁熱過濾，取濾液0.5 mL置于50 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻得待測液。取待測液2 mL置于15 mL離心管中，緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液8 mL，加蓋混勻，放冷至室溫，以水為空白，在582 nm波長處測定吸光度，帶入標準曲線，計算得總糖含量。

多糖含量的測定。精密稱取供試品0.25 g于圓底燒瓶中，加80%乙醇溶液150 mL，置于沸水浴中加熱回流1 h，趁熱過濾，殘渣用80%熱乙醇溶液洗滌3次，將殘渣及濾紙置于燒瓶中，加水150 mL，置于沸水浴中加熱回流1 h，趁熱過濾，殘渣及燒瓶用熱水洗滌4次，合并濾液至250 mL容量瓶中，放冷至室溫，加水定容，搖勻即得待測液。取待測液1 mL置15 mL離心管中，加1 mL水，混勻后緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液8 mL，加蓋混勻，放冷至室溫，以水為空白，在582 nm波長處測定吸光度，帶入標準曲線，計算得總糖含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 浙產(chǎn)多花黃精不同種源地品質(zhì)比較

由表1可知，不同浙產(chǎn)種源地的多花黃精多糖含量和浸出物含量存在顯著差異。其中，多糖質(zhì)量分數(shù)7.48%～12.85%，浸出物質(zhì)量分數(shù)42.74%～70.87%，且以麗水慶元種源品質(zhì)最佳，多糖和浸出物含量顯著高于其他種源地。

表1 浙產(chǎn)多花黃精不同種源地采集信息及品質(zhì)檢測

注：同列無相同小寫字母表示組間差異達顯著水平，表2～3同。

2.2 浙產(chǎn)多花黃精不同齡節(jié)質(zhì)控參數(shù)比較

折干率可以反映植物代謝水平和干物質(zhì)存儲量，折干率越高，代謝水平則越高，干物質(zhì)積累越多，在一定程度上也影響藥材干品產(chǎn)量。由表2可知，二年生和三年生樣品的折干率分別達到27.3%和26.9%，高于一年生和五年生樣品，顯著高于四年生樣品。表明浙產(chǎn)多花黃精的代謝水平和干物質(zhì)積累能力在五年內(nèi)有先升高后下降的趨勢，且在第四年顯著下降，第五年略有回升。

2015年版《藥典》對黃精的水分、灰分、醇溶性浸出物及多糖含量均有要求。從表2可知，1～5年生齡節(jié)在醇溶性浸出物(≥45%)和水分含量(≤18%)方面均可達標，三年生醇溶性浸出物含量最高，顯著高于四年生和五年生樣品。五年生黃精的灰分含量達到4.25%，超過藥典標準(4%)，這可能是因為五年生黃精已經(jīng)趨向衰老，新有機物積累少，從而使無機鹽等比重上升。而構(gòu)成黃精有效成分的多糖含量，只有二年生與三年生樣品達到藥典標準規(guī)定(≥7%)，分別達到7.70%和8.78%，且三年生樣品含量最高，并顯著高于一、四、五年生樣品。三年生齡節(jié)總糖含量達66.4%，高于一、二年生樣品，顯著高于四、五年生樣品。不同年份多花黃精多糖含量的變化，大體上與總糖含量及浸出物含量變化保持先增大后減小的趨勢，且在第三年達到最大值。因此，浙產(chǎn)多花黃精三年生樣品品質(zhì)較其他年份樣品更優(yōu)，結(jié)合生產(chǎn)成本等因素，建議根莖繁殖在種后三年采收為宜。

表2 麗水慶元多花黃精不同齡節(jié)質(zhì)控參數(shù)檢測結(jié)果

2.3 浙產(chǎn)多花黃精不同月份采收的品質(zhì)比較

如表3所示，浙產(chǎn)多花黃精折干率從3—7月逐漸下降，從9月開始又逐漸上升，且以11月折干率最高，達27.70%。浙產(chǎn)多花黃精多糖含量在3—7月無顯著差異，而9月多糖含量最高，達8.20%，顯著高于其余月份?？偺呛吭?—11月呈逐漸增加的趨勢，至11月達到最高，為62.29%，隨后開始下降。結(jié)合浙產(chǎn)多花黃精花期的時間，說明開花影響多花黃精的品質(zhì)，且在9—11月地上部分枯萎時期，為浙產(chǎn)多花黃精生物量積累的關鍵時期，此期間也是地下根莖新芽萌動時期，是采收和留新種莖的適宜時期。

2.4 不同炮制次數(shù)對黃精性狀及品質(zhì)的影響

本研究采用“隔水蒸煮后晾曬干”的蒸制過程，對多花黃精樣品進行連續(xù)9次的處理，所得樣品外觀如圖1所示。從外觀上看，黃精樣品從表面黃白色逐漸變成表面棕褐色至黑色；從質(zhì)硬而韌、不易折斷到質(zhì)地柔軟；滋味上看，從氣微到氣似焦糖、香氣濃郁；從味甜、口感生硬到有焦糖味、口感軟糯，且第9次樣品已經(jīng)出現(xiàn)明顯苦味。從橫截面上看，第3次樣品內(nèi)部已經(jīng)基本蒸透，顏色已經(jīng)從黃白色變成棕褐色，從第4次到第9次已無明顯變化，呈黑色且微具光澤；隨著蒸煮烘干次數(shù)增多，從第6次開始，內(nèi)部結(jié)構(gòu)坍縮嚴重，形成大小不一的裂紋，導致口感略柴。這可能與根莖韌皮部細胞組織結(jié)構(gòu)被破壞，且與糖類物質(zhì)流失有關。

表3 麗水慶元多花黃精不同時間品質(zhì)比較

圖1 不同炮制次數(shù)的制黃精外形比較

炮制黃精的總糖及多糖含量變化如圖2所示。從整體上看，總糖含量和多糖含量有相似的變化趨勢。經(jīng)過9次隔水蒸煮晾曬干后，總糖含量從原先的56.8%降至37.2%，降幅為34.5%；而多糖含量也從原先的7.93%降至4.82%，降幅為39.2%，且該多糖含量符合《浙江省中藥炮制規(guī)范(2015年版)》對制黃精多糖含量的要求(≥4.0%)。相對總糖而言，多糖含量下降更迅速，在第1次處理后多糖含量顯著大幅降低，而總糖含量在第5次處理后才有明顯下降，這可能是由于多次蒸煮烘干后，黃精外形發(fā)生皺縮，且內(nèi)部產(chǎn)生多孔性結(jié)構(gòu)，從而增大了與蒸汽的接觸面積，導致糖分隨著蒸汽加速而流失。而第8次炮制后的總糖及多糖含量又有所回升。

不同次數(shù)間無相同小寫字母表示組間差異達顯著水平。

3 討論

多花黃精的根莖年生一節(jié)，由于物質(zhì)轉(zhuǎn)運、積累、逆境因素和有機物重新分布，不同齡節(jié)的干重及其品質(zhì)并不均衡，隨著齡節(jié)的增大，衰老使得根莖組織結(jié)構(gòu)松散，活性成分流失，且降解大于合成，各項指標均出現(xiàn)下降[17]。因此，低齡節(jié)代謝活躍，有機物積累多，而過老的齡節(jié)易導致多花黃精根莖整體品質(zhì)下降。本研究結(jié)果表明，二、三年生浙產(chǎn)多花黃精根莖各項指標均優(yōu)于其他年份樣品，且從浸出物、總糖及多糖含量來看，黃精的物質(zhì)積累能力從第四年開始下降，而總灰分含量卻開始升高，說明地上莖葉趨向老化，光合作用能力不及前3年[18]。因此，結(jié)合生產(chǎn)成本等因素，建議浙江地區(qū)多花黃精根莖繁殖的采收周期以三年為宜。

多花黃精不同月份采收后品質(zhì)分析表明，浙產(chǎn)多花黃精9月多糖含量最高，在11月已基本完成有效成分的積累，且在翌年1月干物質(zhì)存儲量最高。這與實際生產(chǎn)及浙產(chǎn)多花黃精的物候期相符，8月光照時間長，此時浙產(chǎn)多花黃精莖葉量最大，是生長最旺盛的時期，到9月多糖積累最高，11月底地上部分已基本枯萎，不再進行光合作用制造有機物，建議浙產(chǎn)多花黃精采收宜在9月至翌年1月，這符合2015版《藥典》規(guī)定黃精“春秋二季”(陽歷3—5月，9—11月)采挖的時間。而大部分本草古籍推薦黃精在農(nóng)歷時間“二月、八月采”，即陽歷3月和9月采，這可能與野生黃精正好在9月開始倒苗，3月開始出苗，易于發(fā)現(xiàn)挖掘而定。

生黃精具有麻味，生品服用時，口舌麻木，刺激咽喉，故不宜生用，須經(jīng)炮制，消除其刺激性及副作用。自古黃精炮制方法眾多，以蒸煮法為主。黃精蒸制結(jié)果，從性狀上判斷均以將黃精蒸制內(nèi)外黑色滋潤、有微光澤、味甜無麻味為宜。有文獻及臨床實踐證明[19]，黃精中的黏液質(zhì)正是屬于水溶性多糖，黃精炮制后黏液質(zhì)大量被除去，導致藥材中多糖的提取收率下降，達到消除刺激咽喉副作用的目的，且在一定程度上改變黃精藥效。本研究表明，浙產(chǎn)黃精隨著炮制次數(shù)增加，黃精多糖和總糖含量逐漸下降，這與前人研究結(jié)果一致[20]。黃精蒸制須達到“色黑味甘，質(zhì)地柔軟，嚼之有黏性”的目的。本研究表明，第5次即可達成上述要求。而隨著炮制次數(shù)的增加，不僅導致黃精多糖和總糖的加速流失，還可導致制黃精口感變化，甚至出現(xiàn)焦糖的微苦口感。因此，結(jié)合生產(chǎn)成本，建議炮制次數(shù)宜根據(jù)生黃精肉質(zhì)厚薄、生長年份的不同，適當控制蒸煮次數(shù)。