鄧琳琳

南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 南陽 473000

研究表明，無論是自然妊娠還是輔助生殖技術(shù)后妊娠，多囊卵巢綜合征（PCOS）患者的自然流產(chǎn)率均高于健康女性[1]。因此尋求改善PCOS患者子宮內(nèi)膜容受性的途徑成為解決其生殖障礙的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)通過動物實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證補(bǔ)腎活血方是否能對促排卵PCOS模型大鼠的子宮內(nèi)膜容受性產(chǎn)生正面作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組 6周齡雌性SD大鼠30只，體質(zhì)量220～240g。采購于河南省動物實(shí)驗(yàn)中心，生產(chǎn)許可證號SCXK（豫）2013-0001，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天（溫度20～26℃，濕度40～60%，光照10小時(shí)/天）。隨機(jī)分為正常組10只和建模組20只，正常組予以1%CMC溶液灌胃，模型組以來曲唑溶液連續(xù)灌胃21天。尾靜脈取血行血清學(xué)檢測，確定建模結(jié)果。將建模成功的PCOS大鼠隨機(jī)分為對照組10只和方劑組10只，分別予以克羅米芬溶液、補(bǔ)腎活血方配合克羅米芬溶液灌胃，同時(shí)繼續(xù)給與正常組1%CMC溶液灌胃，5天后寰椎脫臼法處死取子宮內(nèi)膜。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及制備 來曲唑片（芙瑞，2.5mg/片，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司），溶于1%CMC溶液中，以1mg/kg·d給大鼠灌胃?？肆_米芬片（枸櫞酸氯米芬膠囊，50mg/粒，廣州康和藥業(yè)有限公司），溶于1%CMC溶液中，以5mg/kg·d給大鼠灌胃。補(bǔ)腎活血方（中藥顆粒制劑，深圳三九醫(yī)藥公司）包含：菟絲子顆粒 0.5 克/包、桑寄生顆粒1克/包、續(xù)斷顆粒1.5克/包、當(dāng)歸顆粒3克/包、熟地顆粒3克/包、丹參顆粒1.5克/包、白芍顆粒1克/包、黃芪顆粒1克/包、山茱萸顆粒1克/包、紫河車顆粒1克/包、鹽杜仲顆粒 1克/包、制香附顆粒1克/包混合并加入30ml的沸水，充分溶解后以10ml/kg·d給大鼠灌胃。

1.3 檢測方法 放免法測定大鼠血清性激素水平；免疫組化法檢測大鼠子宮內(nèi)膜上雌激素受體（ER）和孕激素（PR）受體的表達(dá)情況；RT-PCR法檢測整合素ανβ3 mRNA在大鼠子宮內(nèi)膜上的表達(dá)差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，均數(shù)比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.01為具有極顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠子宮內(nèi)膜ER、PR的表達(dá)結(jié)果 ER、PR表達(dá)于子宮內(nèi)膜細(xì)胞的胞核（見圖1），利用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)，檢測各物質(zhì)表達(dá)的平均光密度，表達(dá)其陽性率，結(jié)果如下：

圖1 各組大鼠子宮內(nèi)膜ER、PR的表達(dá)情況

利用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)，通過檢測各物質(zhì)表達(dá)的平均光密度，表達(dá)其陽性率，結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠子宮內(nèi)膜ER、PR的表達(dá)情況

正常大鼠子宮內(nèi)膜ER、PR的表達(dá)低于其他組（P＜0.05），在PCOS大鼠中，方劑組的ER、PR的表達(dá)低于對照組（P＜0.05），與正常組相似（P＞0.05）。

2.2 各組大鼠子宮內(nèi)膜整合素ανβ3 mRNA的表達(dá) 用RTPCR檢測各組大鼠子宮內(nèi)膜整合素ανβ3 mRNA的表達(dá)，結(jié)果分別是：正常組1.52±0.35；對照組1.27±0.21；方劑組1.33±0.48。整合素ανβ3 mRNA在正常組的表達(dá)量最高（P＜0.05），且在方劑組表達(dá)高于對照組（P＜0.05）。

3 討論

PCOS在中醫(yī)古典文獻(xiàn)中并無明確記載，但根據(jù)臨床表現(xiàn)，PCOS當(dāng)屬中醫(yī)學(xué)中“閉經(jīng)”、“月經(jīng)后期”及“不孕癥”的范疇[2]。中醫(yī)學(xué)者將其劃分為三種證型：“腎虛血瘀型”、“脾虛痰濕型”和“痰瘀互結(jié)型”，其中“腎虛血瘀型”是最為常見的?？紤]腎主生殖，故中醫(yī)多采用“補(bǔ)腎”療法來提高患者成孕。西醫(yī)則通過做人工周期和促排卵作為解決PCOS患者排卵障礙的一線療法，雖然經(jīng)過治療大多數(shù)患者能順利的排卵和受精，但受精卵的低著床率卻制約了妊娠的成功[3]。改善子宮內(nèi)膜的容受性，提高著床幾率成為治療育齡期PCOS患者的關(guān)鍵所在。

目前研究較多的是整合素ανβ3，它在增殖期內(nèi)膜中幾乎無表達(dá)，而在分泌期中表達(dá)呈陽性[4]，尤其是在胚泡植入前這段時(shí)間，表達(dá)量最高，說明它與內(nèi)膜的容受性密切相關(guān)，參與調(diào)節(jié)胚胎著床[5]。而我們發(fā)現(xiàn)PCOS模型大鼠子宮內(nèi)膜的整合素ανβ3的表達(dá)量是降低的，說明內(nèi)膜允許胚胎著床的能力下降。在經(jīng)過補(bǔ)腎活血方的治療后，ανβ3的表達(dá)量有所增加，證明此方劑可以有效改善PCOS模型大鼠子宮內(nèi)膜的容受性。

激素的作用在胚胎著床過程中廣為人知，影響子宮內(nèi)膜容受性的主要激素就是來源于卵巢的雌、孕激素，這兩種激素通過各自的受體進(jìn)行調(diào)節(jié)。有研究表明，子宮內(nèi)膜整合素的表達(dá)受增加的雌/孕激素比值調(diào)節(jié)，其中孕激素受體在植入窗期子宮內(nèi)膜的腺上皮內(nèi)表達(dá)下降[6]。這與我們觀察到的結(jié)果基本一致。所以說，孕激素的變化對子宮內(nèi)膜整合素ανβ3的表達(dá)調(diào)節(jié)更為重要。

綜上所述，補(bǔ)腎活血方可以調(diào)節(jié)促排卵PCOS大鼠子宮內(nèi)膜上雌孕激素受體含量，并增加整合素ανβ3的表達(dá)，從而改善PCOS大鼠子宮內(nèi)膜容受性，可以用來提高受精卵的著床幾率，降低生殖障礙。