邱成英 朱道謀 鄧穎云 盧磊 邢舒旺 曾唯峰

支氣管肺發(fā)育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)是早產(chǎn)兒常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，由于肺發(fā)育不成熟以及肺表面活性物質(zhì)缺乏，早產(chǎn)兒特別是胎齡<32周的極早產(chǎn)兒BPD的發(fā)病率可以達(dá)到70%以上[1]。BPD病因復(fù)雜，發(fā)病機制尚未明確，近期的研究顯示肺部炎癥失調(diào)，可以阻礙肺發(fā)育[2]，單核細(xì)胞是機體內(nèi)常見的炎性細(xì)胞，其可以分為M1(經(jīng)典活化巨噬細(xì)胞)和M2(替代活化巨噬細(xì)胞)兩個亞型，在炎癥反應(yīng)中分別發(fā)揮不同的作用[3]。本研究檢測了BPD患兒氣管抽吸物中單核細(xì)胞亞型的變化，借此探討其與BPD的相關(guān)性。

資料與方法

一、研究對象

選取我院2018年 1月至 2019 年6月需要機械通氣治療的呼吸窘迫綜合征(RDS)早產(chǎn)兒62例，超過28天仍氧依賴患兒為BPD組，氧依賴未到28天患兒為對照組，納入對象：符合RDS[4]和BPD[5]診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴發(fā)先天性心臟病、肺畸形、遺傳代謝病或者難以獲得氣管抽吸物患兒。

二、單核細(xì)胞亞型的檢測

使用流式細(xì)胞儀(美國BD公司，LSRFortessa)檢測患兒氣管抽吸物中單核細(xì)胞亞型M1和M2所占的比例。FITC-CD68、FITC-CD86和FITC-CD163抗體購自美國Abcam公司，檢測方法簡述如下：患兒氣管抽吸物加入等體積的PBS緩沖液(含1%胰蛋白酶)，37 ℃消化90 min，1000 g離心10 min，收集細(xì)胞沉淀，0.5 mL PBS懸浮細(xì)胞，每份樣品按照抗體試劑盒說明書分別加入FITC-CD68、FITC-CD86或FITC-CD163，避光染色60min，置冰上送流式細(xì)胞儀檢測，以FL1通道做門，檢測CD68陽性單核細(xì)胞、CD86陽性M1和CD163陽性M2所占的比例。

三、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素 1(IL-1)和白介素 10(IL-10)的檢測

使用ELISA法檢測患兒氣管抽吸物中TNF-α、IL-1和IL-10表達(dá)水平。檢測試劑盒購自北京擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司，檢測方法簡述如下：患兒氣管抽吸物加入4倍體積的4%氫氧化鈉，37 ℃ 液化2 h，1000 g離心10min，取上清，按照試劑盒說明書加入相關(guān)試劑，美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)AU5800全自動生化分析儀檢測各樣品吸光度值的變化，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各樣品中TNF-α、IL-1和IL-10表達(dá)水平。

四、統(tǒng)計學(xué)分析

SPSS 16.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為統(tǒng)計學(xué)有顯著性差異。

結(jié) 果

一、兩組早產(chǎn)兒一般臨床資料的比較

從表1可見兩組早產(chǎn)兒性別比例無顯著性差異(P> 0.05)，BPD組胎齡和出生體重顯著低于對照組(P<0.05)，用氧時間和機械通氣時間顯著高于對照組(P<0.01)(見表1)。

表1 兩組早產(chǎn)兒一般臨床資料的比較

二、兩組早產(chǎn)兒單核細(xì)胞以及其M1和M2亞型比例的比較

兩組早產(chǎn)兒氣管抽吸物中單核細(xì)胞比例無顯著性差異(P>0.05)，BPD組M1占7.65±1.28%，顯著高于對照組的3.57±0.54%(P<0.01)，BPD組M2占3.38±0.44%，顯著低于對照組的7.35±1.32%(P<0.01)(見表2，圖1)。

表2 兩組早產(chǎn)兒單核細(xì)胞以及其M1和M2亞型的比較

三、兩組早產(chǎn)兒TNF-α、IL-1和IL-10表達(dá)水平的比較

BPD組早產(chǎn)兒氣管抽吸物中TNF-α和IL-1表達(dá)顯著高于對照組(P<0.01)，BPD組IL-10表達(dá)顯著高于對照組(P<0.01)(見表3)。

表3 兩組TNF-α、IL-1和IL-10表達(dá)水平的比較

討 論

支氣管肺發(fā)育不良(BPD)是早產(chǎn)兒最常見的后遺癥，近年來隨著早產(chǎn)兒存活率提高，BPD發(fā)生率也逐漸提高[6]，BPD患兒預(yù)示著慢性呼吸障礙和神經(jīng)發(fā)育遲緩等不良后果，積極有效防治BPD是早產(chǎn)兒恢復(fù)正常生活質(zhì)量的有力保障[7]。早產(chǎn)和出生低體重是BPD的重要危險因素，本研究觀察也顯示了BPD患兒胎齡和出生體重顯著低于對照組。

炎癥在BPD致病中發(fā)揮著重要的作用，臨床上皮質(zhì)類固醇可以顯著降低BPD發(fā)生率以及嚴(yán)重程度，說明了調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)可以預(yù)防早產(chǎn)兒BPD的發(fā)生[8]，單核巨噬細(xì)胞是炎癥常見的浸潤細(xì)胞[9]，但本研究顯示BPD組和對照組氣管抽吸物中單核細(xì)胞比例無顯著性差異，最近研究顯示單核細(xì)胞分為M1和M2兩種亞型，單核細(xì)胞向M1極化時細(xì)胞主要分泌TNF-α和IL-1促進炎癥發(fā)生，向M2極化時分泌IL-10減輕炎癥過程，促進組織修復(fù)和再生[10]。在哮喘的研究中發(fā)現(xiàn)M2具有促進組織重建和恢復(fù)肺組織微環(huán)境平衡的作用[11]，孫瑤[12]等的研究顯示間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞極化后可以治療急性肺損傷，上述結(jié)果說明了單核細(xì)胞的不同極化表型是一些炎癥性損傷的調(diào)節(jié)反應(yīng)。本研究觀察發(fā)現(xiàn)BPD組患兒氣管抽吸物中M1所占比例顯著高于對照組，而M2所占比例又顯著低于對照組。上述結(jié)果說明了BPD患兒單核細(xì)胞向M1極化增多，而向M2極化減少，進一步研究單核細(xì)胞極化機制，或者調(diào)解極化方向?qū)锽PD提供一個很好的治療策略。

圖1 單核細(xì)胞以及其亞型的流式細(xì)胞儀檢測

綜上所述，本研究顯示BPD患者單核細(xì)胞主要向M1亞型極化，M1比例升高的早產(chǎn)兒要注意預(yù)防發(fā)展成BPD的可能，調(diào)控單核細(xì)胞向M2極化有可能成為BPD治療的靶點。