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        不同采收期絞股藍(lán)中總皂苷的含量比較研究

        2020-04-09 01:43:06王珊許海燕侯敏娜劉艷紅王青
        關(guān)鍵詞:方法

        ◎王珊 許海燕 侯敏娜 劉艷紅 王青

        絞股藍(lán)Gynostemma pentaphyllum(Thumb。)Makino為葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物,絞股藍(lán)藥材產(chǎn)地分布較為廣泛,全世界約有16種2變種,我國有14種2變種,主要分布在秦嶺及長江以南地區(qū)。曾被列為待開發(fā)的第一位的“名貴中藥材”,且其也是藥食兩用常用藥材。研究發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)皂苷為絞股藍(lán)的主要活性成分,主要含達(dá)瑪烷型皂苷,其具有較好的調(diào)血脂、保肝等作用。目前絞股藍(lán)絞股藍(lán)以其獨(dú)特的身份,在醫(yī)藥、保健、養(yǎng)殖等行業(yè)已有較好的應(yīng)用。但絞股藍(lán)的品種較為混亂,不同采收期的絞股藍(lán)的質(zhì)量差別較大,因此開展不同采收期絞股藍(lán)的質(zhì)量評價(jià)具有重要意義,因此本研究主要對不同采收期的絞股藍(lán)總皂苷的含量進(jìn)行比較研究,該研究為絞股藍(lán)的采收加工及質(zhì)量評價(jià)提供一定的理論依據(jù)。

        一、材料

        T6-新世紀(jì)紫外分光光度計(jì)(北京普析通用股份有限公司)、十萬分之一電子天平(METTLER-XP-205,深圳市盛美儀器有限公司)、KQ-5200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、WELCH真空泵LVS 302 Z(伊爾姆真空設(shè)備貿(mào)易有限公司)、SB-1100型EYELA水浴鍋(東京理化器械株式會社)。

        人參皂苷Re對照品(批號:110754-201834,中國食品藥品檢定所),水為純凈水,石油醚、香草醛、冰醋酸、高氯酸、乙醇、正丁醇等其余試劑均為分析純。

        絞股藍(lán)樣品均為2019年從道地產(chǎn)區(qū)直接收集,經(jīng)陜西國際商貿(mào)學(xué)院雷國蓮教授鑒定為為葫蘆科絞股藍(lán)屬植物絞股藍(lán)(Gynostemma pentaphyllum(Thumb。)Makino的干燥全草。

        二、方法與結(jié)果

        1.對照品溶液制備。精密稱取人參皂苷Re對照品適量,加甲醇溶解制成濃度為0.501 mg.mL-1的對照品溶液,備用。

        2.供試品溶液的制備。分別稱取5、6、7、8、9五個不同采收期絞股藍(lán)藥材干燥粉末(過20目篩)約1g,加石油醚適量,超聲處理兩次每次30 min,棄去石油醚,加60%乙醇50 mL,超聲處理兩次,每次45min,過濾,合并濾液,揮至無醇味,水溶液加水飽和正丁醇30 mL萃取3次,合并正丁醇溶液,蒸干,殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?5 mL,即得不同采收期絞股藍(lán)總皂苷供試品溶液。

        3.最大波長的確定。將顯色后的供試品和對照品在200~700 nm波長范圍下掃描,結(jié)果發(fā)現(xiàn)最大波長為550 nm。

        4.標(biāo)準(zhǔn)曲線制定。精密量取人參皂苷Re對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,分別置于 10 mL 試管中,揮干溶劑,分別精密加入0.2 mL5%的香草醛冰醋酸溶液和0.8 mL的高氯酸,混勻,密塞,置于60℃水浴鍋中15 min,取出后、冷卻,再加5 mL冰醋酸,混勻,以空白試劑為對照,在550 nm波長處測定吸收度。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其中以吸光度A為縱坐標(biāo)(Y),以對照品取樣量(mg)為橫坐標(biāo)(X),進(jìn)行線計(jì)算回歸方程為:Y=3.145X-0.0289,R2=0.998(n=5)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果顯示,人參皂苷Re在0.967~0.501 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

        5.精密度試驗(yàn)。精密吸取同一份人參皂苷Re對照品溶液,按照2.4項(xiàng)下方法操作,在同一條件下連續(xù)測定6次吸光度,計(jì)算人參皂苷Re吸光度的RSD為0.4%,表明儀器精密度良好。

        6.穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。取同一批絞股藍(lán)樣品,按照2.2項(xiàng)下方法,按照 2.4 項(xiàng)下方法操作,分別于 0、0.5、1、1.5、2.5、3 h 測定吸光度,計(jì)算人參皂苷Re吸光度的RSD為0.3%,表明絞股藍(lán)樣品在3 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

        7.重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批絞股藍(lán)樣品,按照2.2項(xiàng)下方法,平行制備6個批次供試品溶液,按照2.4項(xiàng)下下方法操作,重復(fù)測定6次,計(jì)算人參皂苷Re吸光度的RSD為0.6%,表明該方法重復(fù)性良好。

        8.加樣回收率試驗(yàn)。取已知含量(23.1 mg)的絞股藍(lán)藥材樣品6份,每份0.5g,精密稱定,每份分別精密加入一定量(23.1 mg)的人參皂苷Re對照品,按照2.2項(xiàng)下方法,按照2.4項(xiàng)下方法操作,測定吸光度,計(jì)算回收率,結(jié)果平均回收率為98.3%,RSD為2.13%(n=6),結(jié)果表明該方法的回收率良好。

        9.樣品測定。分別精密量取不同采收期的絞股藍(lán)供試品溶液,按照2.4項(xiàng)下方法操作,平行測定3次測定吸光度,結(jié)果如表1所示。從表1結(jié)果可以看出,不同采收期對絞股藍(lán)皂苷的含量影響較大,隨著絞股藍(lán)生長時(shí)間的延續(xù)總皂苷的含量呈上升趨勢,在7月份的時(shí)候總皂苷的含量(平均含量為4.519%)達(dá)到最高,之后呈下降趨勢。該研究結(jié)果為絞股藍(lán)的產(chǎn)地采收加工及質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

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