羅 毅，張永利，夏先江，孫宇龍，蘇有健，廖萬(wàn)有，王燁軍

（安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所，安徽 黃山 245000）

茶樹［Camellia sinensis（L.）O.Kuntze］是熱帶和亞熱帶地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)作物。在我國(guó)，茶樹的種植面積超過(guò)266.7萬(wàn)hm2，干毛茶產(chǎn)值超過(guò)1 519億元［1］。因此保持茶業(yè)產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康發(fā)展，對(duì)我國(guó)農(nóng)民增收和農(nóng)業(yè)發(fā)展有重要意義。然而由于茶樹為多年生木本植物，其生理特性和耕作管理措施有別于其它作物，因此土壤理化性狀在植茶后會(huì)發(fā)生顯著的變化，例如土壤pH值顯著降低，鈣、鎂等鹽基離子不斷減少，鋁、鐵、錳等元素相對(duì)累積，土壤微生物區(qū)系受到破壞，土壤供肥能力下降。另一方面，有“喜銨”肥特性的茶樹，每年的葉片采摘又會(huì)帶走大量的含氮營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，使得土壤氮素供給的壓力逐步增大［2］。有機(jī)肥料由于其養(yǎng)分種類全面，從而在改良土壤結(jié)構(gòu)和改善作物品質(zhì)方面具有化學(xué)肥料不可比擬的作用。但有機(jī)肥養(yǎng)分含量低，短期內(nèi)有效養(yǎng)分少，難以滿足當(dāng)季作物生長(zhǎng)的需求［3］，因此，茶農(nóng)為提高產(chǎn)量，每年向茶園中施入大量的化學(xué)肥料，從而進(jìn)一步加劇了土壤的酸化和養(yǎng)分失衡。在此背景下，利用植物根際促生菌Plant-Growth-Promoting Rhizobacteria（PGPR）生產(chǎn)微生物有機(jī)肥的研究逐漸成為熱點(diǎn)，前期報(bào)道較多的是利用芽孢桿菌屬（Bacillus spp.）和假單胞菌屬（Pseudomonas spp.）制備的微生物有機(jī)肥，其相關(guān)產(chǎn)品已在多種作物上起到良好的生物學(xué)效果［4-6］。這主要?dú)w功于促生微生物在植物根際的定殖和生長(zhǎng)為植物提供了養(yǎng)分和促生物質(zhì)。然而現(xiàn)有的微生物肥料多是針對(duì)中性土壤環(huán)境下篩選和應(yīng)用，肥料中的促生菌對(duì)酸性土壤中鋁毒害的耐受性很低。當(dāng)土壤中的Al3+含量達(dá)到100 μ mol/L時(shí)就會(huì)引起細(xì)胞中毒［7］，而茶園土壤的活性鋁含量普遍超過(guò) 1 mmol/L（27 mg/kg）［8］，微生物細(xì)胞在酸性土壤中定殖和促生能力有限。因此，有必要篩選和利用適用于茶園土壤的具有耐酸鋁特性的促生菌株來(lái)研發(fā)生物肥料或其他形式的制劑。

此外，微生物產(chǎn)品在田間施用過(guò)程中，容易與土著菌產(chǎn)生惡性競(jìng)爭(zhēng)，或者難以適應(yīng)溫度、水分、通氣和pH值等環(huán)境因子的劇烈變化，或因降水或灌溉造成流失，導(dǎo)致原本的高效菌株在土壤中的種群密度下降，難以發(fā)揮生物功能［9］。細(xì)胞固定化技術(shù)是通過(guò)物理或化學(xué)手段將游離的微生物或酶，定位于限定的空間區(qū)域并使其保持活性［10］。與其他應(yīng)用游離微生物的過(guò)程相比，固定化微生物技術(shù)可以使微生物在某一固定區(qū)域具有較高的密度，從而改變微環(huán)境，減輕或消除微生物的損失，提高微生物的使用效果［11-12］。例如姜天翔等［13］利用聚乙烯醇、1%的海藻酸鈉和活性炭作為包埋劑包埋石油降解菌在含油海水中使用，對(duì)石油的降解率較游離菌提高了22.6%。Bramhachari等［14］利用鄰苯二酚為唯一炭源，篩選到一株氧化木糖無(wú)色桿菌（Achromobacter xylosoxidans 15DKVB），游離菌體降解500 mg/L鄰苯二酚污染物需60 h，而利用海藻酸鈉包埋后42 h可去除相同濃度的鄰苯二酚，目前已被用于造紙廠污水和污染土壤處理方面。但是，目前利用該技術(shù)在茶園土壤上開展養(yǎng)分活化方面的相關(guān)報(bào)道尚少。

本試驗(yàn)以篩選得到的適應(yīng)茶園酸性土壤環(huán)境的促生微生物為材料，通過(guò)活性炭、海藻酸鈉和瓊脂的吸附和包埋作用制備固化菌球，結(jié)合茶園有機(jī)肥施用措施，比較和評(píng)價(jià)功能菌在土壤中的定殖狀況及其對(duì)茶園土壤養(yǎng)分轉(zhuǎn)化的作用，為改善茶園土壤養(yǎng)分狀況和肥料的高效利用提供新的方法。

1 材料與方法

1.1 土壤樣品采集和培養(yǎng)基

本研究篩菌所用的土壤為黃山、霍山、武夷山、東至和南京等地的茶園土壤。所用培養(yǎng)基有：S-LB培養(yǎng)基：蛋白胨0.5 g，酵母提取物0.2 g，NaCl 10 g，用土壤浸提液定容至1 L，固體加入2.5%的瓊脂，加AlCl3至不同的濃度；GM培養(yǎng)基：葡萄糖10 g，NaCl 5 g，酵母提取物0.2 g，蛋白胨0.5 g，MgSO4·7H2O 0.2 g，固體加入2.5%的瓊脂，蒸餾水1 L；阿須貝無(wú)氮菌培養(yǎng)基：KH2PO40.2 g，MgSO4·7H2O 0.2 g，NaCl 0.2 g，CaCO35.0 g，甘露醇 10.0 g，CaSO4·2H2O 0.1 g，瓊脂粉18～20 g，蒸餾水1 L，pH值7.0。

1.2 耐酸鋁促生菌的篩選和鑒定

稱取5 g土壤放入45 mL的S-LB液體培養(yǎng)基（鋁離子濃度50 mmol/L）30℃培養(yǎng)過(guò)夜，靜置后取上清液100 μL，涂布于含相同鋁離子濃度的S-LB固體培養(yǎng)基上，倒置培養(yǎng)，將長(zhǎng)出的菌落，劃線到鋁濃度100 mmol/L（pH=3.0）的S-LB固體培養(yǎng)基上，倒置培養(yǎng)。將分離純化的菌株，點(diǎn)接于阿須貝無(wú)氮培養(yǎng)基上，30°C恒溫培養(yǎng)，挑選菌落較大的菌株。將初篩獲得的耐酸鋁促生菌，活化后用Salkowski比色法［15］對(duì)其生長(zhǎng)素分泌能力進(jìn)行檢測(cè)。挑選生長(zhǎng)素分泌較高的菌株接入含10 mL蛋白胨的無(wú)菌水（10 g/L）試管中，28℃培養(yǎng)3 d后，每管加入0.5 mL Nessler’s試劑，測(cè)定其有無(wú)有機(jī)質(zhì)礦化后的產(chǎn)氨能力，出現(xiàn)紅褐色沉淀視為礦化產(chǎn)氨的陽(yáng)性反應(yīng)［16］。菌株鑒定采用分子生物學(xué)方法進(jìn)行，菌株送生物（上海）公司測(cè)序鑒定。使用BLAST將測(cè)序結(jié)果在 NCBI（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）上比對(duì)，根據(jù)同源性搜索結(jié)果，使用MEGA 5.0生物學(xué)軟件對(duì)測(cè)試菌株和相關(guān)菌株的多個(gè)序列進(jìn)行比對(duì)分析及Neighbor-Joining方法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.3 固定化菌劑的制備

以終體積的0.25%添加活性炭到步驟1.2篩選出的菌株生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的培養(yǎng)液中，10～12℃，轉(zhuǎn)速130 r/min過(guò)夜，分別稱取一定質(zhì)量的海藻酸鈉、瓊脂和30%甘油，煮沸溶解，配成一定含量的混合溶液，冷卻至40℃左右加入一定量的活性炭吸附的菌懸液包埋，攪拌均勻后用注射器滴入4%的CaCl2溶液與飽和硼酸溶液組成（用NaCO3調(diào)節(jié)pH值至6.7）的交聯(lián)劑中進(jìn)行交聯(lián)，完成后用蒸餾水沖洗2～3次，保存于生理鹽水（0.9%）中待用。對(duì)其溶脹性、完整性和菌體生長(zhǎng)傳質(zhì)性進(jìn)行測(cè)定，依此優(yōu)化包埋劑和包菌量。溶脹性測(cè)定：取一定數(shù)目的固定化菌劑放入燒杯中，加入蒸餾水后進(jìn)行持續(xù)曝氣，觀察小球溶脹、破損情況。完整性：取一定數(shù)目的固定化菌劑放入燒杯中，加入蒸餾水后利用攪拌器進(jìn)行攪拌（200 r/min），查看攪拌后剩余結(jié)構(gòu)完整的小球數(shù)量。傳質(zhì)性：取一定數(shù)量固定化菌劑投入盛有200 mL GM液體培養(yǎng)基（含10 mmol/L鋁離子）中培養(yǎng)，48 h后測(cè)定培養(yǎng)液中OD600值。

1.4 田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)

田間試驗(yàn)于2018年6月布置于安徽省黃山市屯溪示范茶場(chǎng)，地處118.27°E，29.69°N，海拔143.4 m，年平均降水量1 670 mm，年平均氣溫15.8℃，屬北亞熱帶濕潤(rùn)性季風(fēng)氣候。試驗(yàn)茶園0～20 cm土層土壤的基本理化性質(zhì)為：pH值4.68，有機(jī)質(zhì)15.6 g/kg，總氮1.05 g/kg，堿解氮86.50 mg/kg，有效磷（Olsen-P）32.76 mg/kg，速效鉀47.97 mg/kg，銨態(tài)氮43.8 mg/kg。茶樹品種為當(dāng)?shù)厝后w種。試驗(yàn)共設(shè)置4個(gè)處理：分別為CK（空白對(duì)照）、T1（2 250 kg/hm2商品有機(jī)肥+WYS2菌懸液，108cfu/g有機(jī)肥）、T2（2 250 kg/hm2商品有機(jī)肥+WYS2固定化菌劑，108cfu/g有機(jī)肥）、OM（2 250 kg/hm2商品有機(jī)肥對(duì)照）。試驗(yàn)開始于2018年6月上旬，距茶樹行20 cm處開溝施肥，開溝深度為15～20 cm，2018年7月中旬取樣。采用完全區(qū)組設(shè)計(jì)，3次重復(fù)，小區(qū)面積3 m×5 m=15 m2。整個(gè)試驗(yàn)于2018年8～10月重復(fù)一次，試驗(yàn)結(jié)果相似。

1.5 土樣采集和指標(biāo)測(cè)定方法

土壤取樣時(shí)間為試驗(yàn)處理40 d后，采集0～20 cm土壤樣品，每個(gè)小區(qū)隨機(jī)取5點(diǎn)，同小區(qū)混合后過(guò)2 mm篩，平均分成兩份，一份新鮮保存以測(cè)微生物性狀，一份風(fēng)干后測(cè)土壤養(yǎng)分性狀。土壤微生物區(qū)系采用高通量測(cè)序法，測(cè)序采用Miseq（Illumina，美國(guó)）高通量平臺(tái)，選用的引物針對(duì)真菌ITS1-2區(qū)。前引物序列為5’-CTTGGTCATTTA GAGGAAGTAA-3’，后引物序列為5’-GCTGC GTTCTTCATCGATGC-3’［17］測(cè)序后的DNA序列拼接，同時(shí)對(duì)序列的質(zhì)量和拼接效果進(jìn)行質(zhì)控過(guò)濾，然后按照barcode標(biāo)簽序列識(shí)別并區(qū)分樣品得到有效數(shù)據(jù)。采用Usearch軟件（vsesion 7.1 http：//qiime.org/），設(shè)置97%相似性，對(duì)有效DNA序列數(shù)據(jù)進(jìn)行操作分類單元（OTU）統(tǒng)計(jì)和分類［18］。測(cè)定土壤有機(jī)質(zhì)含量采用重鉻酸鉀氧化容量法-外加熱法；測(cè)定全氮含量采用半微量凱式定氮法；測(cè)定堿解氮含量采用堿解擴(kuò)散法；測(cè)定有效磷含量采用碳酸氫鈉提取-鉬銻抗比色法（Olsen-P）；測(cè)定速效鉀含量用乙酸銨浸提-火焰光度法；測(cè)定銨態(tài)氮含量用氯化鉀提取-靛酚藍(lán)比色法［19］。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和方差分析，用LSD法比較處理間的差異顯著性，用Origin 8作圖。Miseq測(cè)序后的物種分類是利用blastn將OTU序列與對(duì)ITS真菌核糖體數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//rdp.cme.msu.edu/misc/resources.jsp）進(jìn)行比對(duì)，篩選出OTU序列的最佳比對(duì)結(jié)果，并對(duì)比對(duì)結(jié)果進(jìn)行過(guò)濾，滿足相似度＞90%且coverage＞90%的序列被用來(lái)分類，不滿足條件的序列則被歸為unclassified，樣本聚類樹圖是根據(jù)物種多樣性距離矩陣進(jìn)行層次聚類（Hierarchical cluatering）分析，再使用非加權(quán)組平均法UPGMA（Unweighted pair group method with arithmetic mean）算法構(gòu)建，反映出樣品間的相似性和差異，以上分析均利用R軟件（version2.15.1，http：//www.r-project.org/）完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 耐酸鋁促生菌的篩選與鑒定分析

用S-LB培養(yǎng)基逐級(jí)提高鋁離子濃度降低pH值，分別從5個(gè)地區(qū)的茶園土壤中純化、篩選到4株耐酸鋁能力較強(qiáng)的菌株。由于茶樹對(duì)氮素的需求較大，占干物質(zhì)重的3.5%～5.8%［20］。因此對(duì)這4株菌進(jìn)行促生特性復(fù)篩時(shí)以無(wú)氮生長(zhǎng)和對(duì)有機(jī)質(zhì)礦化的產(chǎn)氨特性為主要參考。其相關(guān)促生指標(biāo)如表1所示，其中菌株WYS2可在無(wú)氮培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，同時(shí)具有產(chǎn)氨和較強(qiáng)生長(zhǎng)素分泌能力，因此選擇該菌為材料進(jìn)行下一步試驗(yàn)。

表1 4株耐酸鋁菌株的促生特性

菌株WYS2在S-LB平板表面生長(zhǎng)的菌落呈圓形、紅色，表面光滑、邊緣整齊（圖1），通過(guò)分子生物學(xué)鑒定發(fā)現(xiàn)，其26S rRNA D1/D2序列與紅酵母菌（Rhodotorula spp.）26S D1/D2區(qū)核糖體序列相似度達(dá)100%，其系統(tǒng)發(fā)育樹如圖2所示。因此將菌株WYS2命名為Rhodotorula sp.WYS2，將其序列保存于美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心（NCBI）的GeneBank中，登錄號(hào)為KY670833。

2.2 固化菌劑特性研究

由表2可知，4%海藻酸鈉（SA）+1%瓊脂（AG）+2%包菌量制備的1#固定化小球的溶脹率最低、完整性最高，表明其機(jī)械強(qiáng)度最高，但生長(zhǎng)傳質(zhì)性能較差，培養(yǎng)48 h后培養(yǎng)液中的菌體濃度較低；同樣包埋劑濃度條件下增加包埋菌量的2#固定化小球其生長(zhǎng)傳質(zhì)性能也較差，表明包埋劑濃度影響菌株從球體到外部的穿通性。降低SA并升高AG濃度后發(fā)現(xiàn)，球體的生長(zhǎng)傳質(zhì)性能提高，但包菌量較大處理（4#）的球體穩(wěn)定性較差，在水中曝氣一定時(shí)間后容易發(fā)生溶脹現(xiàn)象。而使用1%SA+2%AG包埋2%菌體制作的小球（3#），在水中曝氣時(shí)的溶脹率變化較低，200 r/min攪拌4 h過(guò)程中所有小球表面保持光滑完整，溶液保持澄清，同時(shí)其生長(zhǎng)傳質(zhì)性能也較好。因此選擇3#小球作為下一步試驗(yàn)的材料，其外表形狀如圖3所示。

圖1 菌株WYS2形態(tài)特征

圖2基于26S序列構(gòu)建的菌株WYS2系統(tǒng)發(fā)育樹

表2 不同包埋劑量制備出的固定化小球性能測(cè)試

圖3 固定化菌劑

2.3 促生菌的土壤定殖效果

對(duì)土壤真菌宏基因組高通量測(cè)序以探究施用固化菌劑后菌株Rhodotorula sp.WYS2在茶園土壤中的定殖效果和對(duì)土壤真菌的影響。從土壤定殖效果來(lái)看，有機(jī)肥+固化菌劑處理（T2）的土壤中Rhodotorula（紅酵母菌）基因序列數(shù)量約為有機(jī)肥+菌懸液處理（T1）的293倍（表3），表明T2處理在較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)可以保持紅酵母菌的種群密度。從真菌的區(qū)系組成（圖4）來(lái)看，在T2處理的土壤中紅酵母菌基因豐度比例占土壤真菌總和的35.33%，是最為主要的真菌類群；而T1處理的紅酵母菌基因豐度僅占真菌總量的0.12%；純有機(jī)肥處理（OM）和空白對(duì)照（CK）中均沒有檢測(cè)到紅酵母基因序列。其結(jié)果表明固定化技術(shù)使用后菌株WYS2在茶園土壤中具有良好的定殖效果，同時(shí)也增加了土壤青霉菌（Penicillium，占30.41%）、踝節(jié)菌（Talaromyces，占13.87%）和裸傘菌（Gymnopilus，11.04%）等在土壤真菌中的豐度比，而其它各處理及對(duì)照的真菌區(qū)系主要是由未分類的真菌屬組成。從區(qū)系組成的相似度聚類結(jié)果來(lái)看，T1處理和純施有機(jī)肥處理（OM）的真菌群落組成極為相似，同時(shí)與對(duì)照組真菌群落組成也較為相似，這可能由于直接將菌懸液與有機(jī)肥接種后WYS2在土壤中的定殖效果不佳，未對(duì)土壤原著菌群造成影響有關(guān)；另一方面，T2處理的真菌群落結(jié)構(gòu)與其他處理間存在較大差異。

表3 各樣本主要菌種屬水平上序列數(shù)（前5） （條數(shù)/g土）

圖4 土壤真菌區(qū)系及聚類圖

2.4 施用固定化菌劑對(duì)茶園土壤養(yǎng)分性狀的影響

如表4所示，有機(jī)肥+固定化菌劑處理（T2）、有機(jī)肥+菌懸液處理（T1）和有機(jī)肥施用處理（OM）與空白對(duì)照（CK）相比，土壤養(yǎng)分均有顯著增加，但施用有機(jī)肥的3個(gè)處理之間的土壤有機(jī)質(zhì)、全氮含量無(wú)顯著差異。此外，T2處理顯著提升了茶園土壤的堿解氮、速效鉀和銨態(tài)氮含量，其堿解氮含量與T1相比增加了23.4%，與OM處理相比增加了39.8%；其速效鉀含量較T1和OM處理分別提高了25.1%和18.1%；對(duì)于茶樹最易吸收利用的氮素形態(tài)（銨態(tài)氮）含量，T2處理較T1處理增加了36.4%，較OM處理增加了45.1%，而有效磷的含量T2與T1處理無(wú)顯著差異。因此從茶樹的需肥規(guī)律和施肥效果來(lái)看，含紅酵母菌WYS2的固定化菌劑+有機(jī)肥的處理有助于茶園土壤肥力的提升。在該處理中紅酵母菌WYS2基因在土壤中有較高的豐度比，土壤中有效態(tài)氮、磷和鉀的養(yǎng)分含量最高，其中堿解氮、銨態(tài)氮和速效鉀含量均顯著高于其它處理，而有機(jī)肥接種紅酵母菌WYS2菌懸液的處理，紅酵母菌WYS2基因在土壤中的豐度比較低，同時(shí)除土壤有效磷外，氮和鉀的有效態(tài)養(yǎng)分含量與純有機(jī)肥處理無(wú)顯著差異。

表4 施用固定化菌劑對(duì)土壤養(yǎng)分的影響

3 討論

本研究篩選獲取了紅酵母菌屬的一株酵母菌，其具有良好的耐酸鋁特性，是酸性土壤中常見的土壤真菌，也是對(duì)植物生長(zhǎng)有促生作用的一類菌群［21-22］。紅酵母屬在生長(zhǎng)過(guò)程中能合成大量的不飽和脂肪酸、類胡蘿卜素和生長(zhǎng)因子等高附加值和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的代謝產(chǎn)物，因此已被工業(yè)化培養(yǎng)用于油脂生產(chǎn)［23］、保健品生產(chǎn)［24］和水產(chǎn)養(yǎng)殖［25］等領(lǐng)域，而對(duì)紅酵母屬真菌在茶園土壤中的定殖利用和養(yǎng)分轉(zhuǎn)化作用方面的研究報(bào)道尚少。植物促生功能菌結(jié)合有機(jī)肥的施用在一定程度上具有促進(jìn)有機(jī)肥中養(yǎng)分的轉(zhuǎn)化效率、增加產(chǎn)量、提升品質(zhì)和保護(hù)環(huán)境等優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)，被認(rèn)為是提高肥料利用效率、減少化肥施用的有效措施之一［6］。但由于功能菌群需在土壤中定殖、繁殖后方可發(fā)揮效用，而菌群的生長(zhǎng)又具有周期性，肥效見效過(guò)程較長(zhǎng)，同時(shí)，微生物活性受很多因素影響，導(dǎo)致施用后的短時(shí)期內(nèi)（25 d）功能菌數(shù)量就急劇減少，效果不穩(wěn)定［4，26］，這與本研究中利用游離菌劑結(jié)合有機(jī)肥施用的結(jié)果相類似，本研究中40 d后紅酵母菌WYS2在土壤中定殖數(shù)量較低，基因豐度僅占土壤真菌比例的0.12%。而固定化后配合有機(jī)肥施用的結(jié)果表明，在施用40 d后可顯著提高紅酵母菌WYS2在土壤中的定殖效果，同時(shí)可改變土壤真菌群落結(jié)構(gòu)。

氮素和鉀素是茶樹生長(zhǎng)發(fā)育不可或缺且需求量最大的兩類礦質(zhì)元素，在高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)茶園中，土壤堿解氮和速效鉀均應(yīng)≥100 mg/kg，同時(shí)研究表明茶樹吸收利用銨態(tài)氮能力較強(qiáng)，而對(duì)硝態(tài)氮的利用能力較差［27］。吳志丹等［28］認(rèn)為純有機(jī)肥施用會(huì)提升土壤堿解氮和速效鉀含量，但會(huì)降低土壤銨態(tài)氮含量，而配合50%～75%化肥（以氮素投入量計(jì)）可顯著提高土壤銨態(tài)氮含量9.5～11.3倍。本試驗(yàn)中施用紅酵母菌WYS2固定化菌劑后對(duì)土壤堿解氮含量的提升作用高于前者的試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)銨態(tài)氮含量的提升作用低于前者的試驗(yàn)結(jié)果，這種差異可能是兩地土壤性狀和有機(jī)肥種類等因素造成，例如，其有機(jī)肥處理中土壤銨態(tài)氮含量?jī)H為7.61 mg/kg，而本試驗(yàn)有機(jī)肥處理土壤銨態(tài)氮含量為78.2 mg/kg。此外與任軼等［29］報(bào)道的木霉微生物肥相比，木霉對(duì)土壤有機(jī)質(zhì)礦化為銨態(tài)氮的過(guò)程無(wú)顯著作用，而本試驗(yàn)中紅酵母菌WYS2固定化菌劑加有機(jī)肥處理可顯著提升土壤銨態(tài)氮含量，因此本試驗(yàn)菌株更適合于茶樹生長(zhǎng)的養(yǎng)分需求。本試驗(yàn)有機(jī)肥接種紅酵母菌WYS2固定化菌劑后對(duì)土壤有效磷和速效鉀含量也有顯著提升，其對(duì)土壤速效鉀（與純有機(jī)肥處理相比）含量的提升率為18.1%，較付學(xué)琴等［30］報(bào)道的硅酸鹽細(xì)菌肥料對(duì)水稻土速效鉀41.5 %的提升率而言略低，這可能是與硅酸鹽細(xì)菌和紅酵母菌兩種微生物間不同的解鉀特性有關(guān)。

4 結(jié)論

紅酵母屬的菌株WYS2具有良好的耐酸鋁性和促生特性。

利用0.25%活性炭吸附2% WYS2菌體后，再用1%海藻酸鈉+2%瓊脂包埋制作的促生菌固化菌劑具有良好的機(jī)械強(qiáng)度和生長(zhǎng)傳質(zhì)性。

制成的固定化菌劑配合有機(jī)肥施用，不僅提高了促生菌株在茶園土壤中的定殖效率，還可以影響土壤微生物群落結(jié)構(gòu)，從而提高茶樹可利用的氮素和鉀素養(yǎng)分含量，改善土壤肥力狀況。