伍明超,萬爭艷

(武漢市優(yōu)撫醫(yī)院精神科，湖北武漢 430023)

阿爾茨海默癥(AD)是最常見的癡呆癥，是一種神經(jīng)退行性疾病，其特征是進(jìn)行性認(rèn)知衰退，例如記憶喪失和執(zhí)行功能障礙，以及精神癥狀和行為障礙[1]。至2030年，預(yù)計(jì)癡呆癥患者人數(shù)將從2 400萬增加到超過6 500萬[2]。目前，AD的明確診斷只能在死后進(jìn)行，AD的臨床診斷仍然很困難，特別是對于非?？漆t(yī)生[3]。目前診斷AD的方法包括詳細(xì)的病史詢問和神經(jīng)心理學(xué)測試以確定癡呆的存在?？扇苄陨窠?jīng)調(diào)節(jié)蛋白-1(sNRG-1)是神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-1(NRG-1)的可溶形式，是神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白家族成員之一，并且在神經(jīng)系統(tǒng)中起重要作用[4]。CHANG等[5]報(bào)道，血漿sNRG-1可能是AD早期診斷的新型可靠生物標(biāo)志物。微管相關(guān)蛋白Tau(T-tau)可促進(jìn)微管組裝和提升穩(wěn)定性，并可能參與神經(jīng)元極性的建立和維持[6]。T-tau在AD的臨床階段增加，并且與腦萎縮和認(rèn)知衰退相關(guān)[7]。神經(jīng)絲蛋白(NFL)在細(xì)胞內(nèi)到軸突和樹突的轉(zhuǎn)運(yùn)過程發(fā)揮作用[8]。IDLAND等[9]發(fā)現(xiàn)NFL與較低腦容量以及海馬萎縮之間存在關(guān)聯(lián)?；诖?，本研究旨在探討血清中NFL、T-tau、sNRG-1聯(lián)合對AD的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 納入2017年7月至2018年7月本院收治的AD患者70例為研究組，年齡60～80歲，平均年齡(73.51±8.12)歲。納入的AD患者均根據(jù)DSM-Ⅳ臨床指南進(jìn)行診斷[10]，CDR評分>1、MMSE評分<24。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)長期使用皮質(zhì)類固醇激素及免疫抑制劑者；(2)患有精神疾病者；(3)患有癌癥者；(4)患有慢性腎病者；(5)多胎妊娠者；(6)接受相關(guān)治療者。納入2017年7月至2018年7月至本院體檢的70例血管性癡呆患者作為對照組，年齡60～77歲，平均(72.48±7.49)歲。本研究獲本院倫理委員會批準(zhǔn)，且受試者家屬均簽署知情同意書。AD患者與血管性癡呆患者的基礎(chǔ)臨床資料，見表1。AD患者與血管性癡呆患者在年齡、男性比例和體質(zhì)量指數(shù)等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 AD患者與血管性癡呆患者的基礎(chǔ)臨床資料

1.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 于患者治療前采取70例AD患者和70例血管性癡呆患者的肘前靜脈血6 mL，收集血液中血清置于-80 ℃冰箱保存，待樣本全部收集完畢一起進(jìn)行ELISA。NFL ELISA試劑盒購自上?？祈樕锟萍加邢薰?。T-tau ELISA試劑盒購自焦作路非凡生物科技有限公司。sNRG-1 ELISA試劑盒購自廈門研科生物技術(shù)有限公司(Abnova)。根據(jù)相應(yīng)說明書檢測2組患者血清NFL、T-tau、sNRG-1的水平。3個(gè)指標(biāo)為同一批樣本分批檢測，去除極大值和極小值保留其余數(shù)據(jù)。使用ELISA兼容的PVC透明微量滴定板(96孔)并確定測定所需的孔數(shù)。將100 μL捕獲抗體溶液分配到孔中。在板的頂部涂上密封膠帶防止蒸發(fā)。將板在4 ℃孵育過夜。孵育后取出膠帶并吸出每個(gè)孔試劑。每孔加入400 μL洗滌緩沖液。再將板洗滌2次，然后將倒置的板輕拍在紙巾上晾干。通過向每個(gè)孔中分配300 μL試劑稀釋劑來封閉板，并在室溫下孵育板60 min。將100 μL稀釋的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品加入適當(dāng)?shù)目字胁⑸w上板。在室溫下孵育平板2 h。孵育后，揭開平板并吸出每個(gè)孔。向每個(gè)孔中分配100 μL檢測抗體溶液。在室溫下孵育2 h并蓋上板。將100 μL底物溶液分配到每個(gè)孔中。蓋上平板并在室溫下孵育20 min。顯色后，取下蓋子，每孔注入50 μL終止液，停止酶促反應(yīng)。使用具有適當(dāng)吸光度設(shè)置的分光光度計(jì)/讀板儀立即檢測每個(gè)孔的吸光度。

2 結(jié) 果

2.1AD患者與血管性癡呆患者血清中NFL、T-tau、sNRG-1的水平 AD患者血清中NFL、T-tau、sNRG-1水平均高于血管性癡呆患者(P<0.05)，見表2。

表2 AD患者與血管性癡呆患者血清中NFL、T-tau、sNRG-1的水平

注：與對照組比較,*P<0.05。

2.2AD患者與血管性癡呆患者血清NFL、T-tau、sNRG-1檢測的ROC曲線、AUC、靈敏度、特異度和約登指數(shù) 為了評估血清NFL、T-tau、sNRG-1用于AD與血管性癡呆鑒別診斷的價(jià)值，繪制ROC曲線，見圖1。NFL的ROC曲線的AUC為0.90(95%CI：0.848 8～0.958 4)，以740.2 pg/mL為NFL的陽性臨界值，其診斷靈敏度為87%，特異度為87%；T-tau的ROC曲線的AUC為0.86(95%CI：0.793 2～0.934 6)，以448.4 ng/L為T-tau的陽性臨界值，其診斷靈敏度為83%，特異度為85%；sNRG-1的ROC曲線的AUC為0.81(95%CI：0.725 7～0.898 7)，以1.59 ng/L為sNRG-1的陽性臨界值，其診斷靈敏度為85%，特異度為82%。見圖1和表3。

圖1 AD患者與血管性癡呆患者血清中NFL、T-tau、sNRG-1的ROC曲線

2.3血清中NFL、T-tau、sNRG-1聯(lián)合檢測用于診斷 Logistic回歸聯(lián)合多指標(biāo)診斷發(fā)現(xiàn)，血清中NFL、T-tau、sNRG-1三者聯(lián)合診斷的特異度和靈敏度均高于NFL、T-tau、sNRG-1兩兩聯(lián)合。血清中NFL、T-tau、sNRG-1聯(lián)合檢測對AD診斷的靈敏度為95%，特異度為83%。見圖2和表4、5。

圖2 血清中NFL、T-tau、sNRG-1對AD的聯(lián)合診斷ROC曲線

表3 AD患者與血管性癡呆患者血清中NFL、T-tau、sNRG-1的AUC、靈敏度、特異度和約登指數(shù)

表4 NFL、T-tau、sNRG-1的Logistic回歸分析

注：-表示該項(xiàng)無數(shù)據(jù)。

表5 血清中NFL、T-tau、sNRG-1對AD的聯(lián)合診斷價(jià)值

3 討 論

在世界范圍內(nèi)，AD是最常見的神經(jīng)退行性疾病[11-13]。我國AD的臨床漏診率高達(dá)76.8%。目前AD的早期診斷大都依賴精神量表評分、臨床癥狀和影像學(xué)指標(biāo)等，但能常規(guī)用于臨床AD診斷的檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)生物標(biāo)志物較少。因此，尋找新的生物標(biāo)志物對AD的診斷和治療至關(guān)重要。在本研究中，利用ELISA法測定血清NFL、T-tau、sNRG-1的水平后Logistic回歸聯(lián)合多指標(biāo)診斷發(fā)現(xiàn)，血清中NFL、T-tau、sNRG-1三者聯(lián)合診斷的特異度和靈敏度均高于NFL、T-tau、sNRG-1兩兩聯(lián)合。血清中NFL、T-tau、sNRG-1聯(lián)合對AD的診斷的靈敏度為95%、特異度為83%。

sNRG-1可誘導(dǎo)上皮細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞的生長和分化[14]。在本研究中，發(fā)現(xiàn)AD患者血清中sNRG-1高于血管性癡呆患者(P<0.05)。血清中sNRG-1單項(xiàng)鑒別診斷AD患者和血管性癡呆患者的靈敏度和特異度分別為85%和82%。有研究表明，根據(jù)MMSE評分，血漿sNRG-1水平與疾病嚴(yán)重程度之間存在顯著相關(guān)性，且與年齡存在相關(guān)性。但是，血漿sNRG-1水平與血管性癡呆患者對照組的年齡沒有任何相關(guān)性[5]。因此，sNRG-1不僅反映生物學(xué)年齡并可作為衰老的候選生物標(biāo)志物，可作為AD的潛在標(biāo)志物。

NFL在神經(jīng)元軸突中很豐富，它們對于軸突徑向生長是必需的，但也存在于神經(jīng)元的體細(xì)胞和樹突中[15]。NFL在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元中表達(dá)，包括海馬神經(jīng)元[16]。因此，在神經(jīng)元損傷后，NFL被釋放到細(xì)胞外區(qū)室中，導(dǎo)致血清中NFL水平增加[17]。在本研究中，發(fā)現(xiàn)AD患者血清中NFL高于血管性癡呆患者(P<0.05)。血清中NFL單向診斷AD患者和血管性癡呆患者的靈敏度和特異度均為87%。以前的研究表明NFL可能反映了正在進(jìn)行的神經(jīng)變性的速度，且高水平的NFL與神經(jīng)退行性疾病的進(jìn)展相關(guān)[18]。因此，NFL可能反映出正在進(jìn)行類似的神經(jīng)退行性過程。

T-tau的C末端結(jié)合軸突微管，而N末端結(jié)合神經(jīng)質(zhì)膜組分，參與神經(jīng)元極性的建立和維持[19-20]。在本研究中，發(fā)現(xiàn)AD患者血清中T-tau高于血管性癡呆患者(P<0.05)。血清中T-tau單向診斷AD患者和血管性癡呆患者的靈敏度和特異度分別為83%和85%。目前，靶向AD中的病理性tau蛋白和相關(guān)的tau蛋白病在動(dòng)物模型中顯示出巨大的潛力[21]?？贵w介導(dǎo)的tau聚集體去除的幾種互補(bǔ)機(jī)制可能存在協(xié)同作用，并且每種的重要性可取決于抗體性質(zhì)、疾病及其階段[22]。tau免疫療法的臨床試驗(yàn)已經(jīng)開始，并且在不久的將來可能還會開展更多的試驗(yàn)[23]。因此，tau除了可作為診斷AD的潛在標(biāo)志，還可作為治療AD的潛在靶標(biāo)。

然而，本研究仍然存在不足之處：(1)本研究納入的樣本量較少，僅有70例AD，相應(yīng)的結(jié)果需要在更大的樣本量中驗(yàn)證；(2)血清中NFL、T-tau、sNRG-1的水平未與精神量表評分、臨床癥狀和影像學(xué)等臨床指標(biāo)做相關(guān)性分析；(3)盡管根據(jù)本研究，檢測血清中sNRG-1的變化對于發(fā)現(xiàn)AD的風(fēng)險(xiǎn)是很重要的，但是sNRG-1的表達(dá)異常是造成AD的病因還是患AD后引起的異常仍然未知，這仍需進(jìn)一步研究論證。如果是sNRG-1的表達(dá)異常導(dǎo)致了AD，可以通過靶向血清中的sNRG-1治療AD患者，以改善患者的癥狀。