劉永嘉　單非　齊思

摘 要：現(xiàn)行食品檢驗(yàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中給出一些方法的時(shí)效性和實(shí)用性有待提高，實(shí)際檢驗(yàn)過(guò)程中也存在各種各樣的問(wèn)題需要解決。本文從實(shí)際檢驗(yàn)操作出發(fā)，總結(jié)方法經(jīng)驗(yàn)，改進(jìn)并提高了幾個(gè)微生物檢驗(yàn)技術(shù)方法的合理性，增強(qiáng)了方法的可操作性，為檢驗(yàn)工作提供了良好的參考價(jià)值。

關(guān)鍵詞：食品微生物;檢驗(yàn);方法改進(jìn)

Abstract：The timeliness and practicability of some methods given in the national food inspection standards need to be improved， the actual inspection process will appear all sorts of problems to solve. This paper embarks from the actual inspection， summarize method of experience， improve and enhance the rationality of several microbiological technology method， to enhance the operability of the method. It provides a good reference value for the inspection work.

Key words：Food microorganism; Inspection; Methods to improve

中圖分類號(hào)：R155.5

現(xiàn)行的食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)方法中仍有可以提高改善的部分，本文從多個(gè)方面做出改進(jìn)嘗試，為檢驗(yàn)工作者提供技術(shù)參考，為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的完善提供實(shí)踐參考，為食品檢驗(yàn)整體水平的提高作出貢獻(xiàn)。

1 一次性接種環(huán)平板劃線取菌量過(guò)多的處理方法改進(jìn)

劃線接種是食品微生物檢驗(yàn)中的基礎(chǔ)操作，也是衡量檢驗(yàn)員實(shí)操過(guò)程中基本能力的要素之一。目前的劃線操作中，常用一次性的塑料接種環(huán)，由于這種接種環(huán)與菌落的接種面積比傳統(tǒng)鉑金環(huán)要大，所以會(huì)出現(xiàn)挑取菌量過(guò)多，分離出單菌落個(gè)數(shù)少的問(wèn)題。

方法改進(jìn)：①挑取菌落時(shí)用點(diǎn)蘸的方式，一點(diǎn)即走，從而減少取菌量。②劃線完一個(gè)平板后，用同一根接種環(huán)直接畫第二個(gè)平板，這樣第二個(gè)平板上的菌量就會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于第一個(gè)板，即可得到漂亮的劃線結(jié)果。圖1從左到右就是按上述方法得到的菌量依次減少的劃線結(jié)果。

2 培養(yǎng)基傾注平板后干燥處理的方法改進(jìn)

培養(yǎng)基配制后需經(jīng)過(guò)高溫滅菌，然后冷卻到一定溫度后傾注平板備用。這一過(guò)程中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)傾注完的平板蓋子上有液滴殘留。有的資料上給出的解決方法是將有液滴的培養(yǎng)基放到培養(yǎng)箱里一段時(shí)間，用蒸干的方法來(lái)除去液滴，但是該方法太過(guò)耗時(shí)，短時(shí)間內(nèi)無(wú)法徹底除去液滴。

方法改進(jìn)：在無(wú)菌間內(nèi)傾注完平板先不蓋上蓋子，等待平板內(nèi)培養(yǎng)基凝固的同時(shí)打開紫外燈，確保無(wú)菌環(huán)境，30 min后關(guān)閉紫外燈，蓋上蓋子。這樣就可以省時(shí)省力地得到干燥的培養(yǎng)基。

3 革蘭氏鏡檢快速鎖定目標(biāo)圖像的方法改進(jìn)

顯微鏡是微生物檢驗(yàn)中必不可少的儀器，快速找到目標(biāo)視野、調(diào)好焦距是檢驗(yàn)人員追求的目標(biāo)。傳統(tǒng)顯微鏡的操作是先在低倍鏡下找到視野，然后換到高倍油鏡調(diào)焦距。

方法改進(jìn)：革蘭氏染色時(shí)，盡量挑取少量菌涂布在一個(gè)小的區(qū)域內(nèi)，約一滴香柏油覆蓋的區(qū)域大小，這樣在之后的鏡檢時(shí)就可以直接上油鏡，越過(guò)低倍鏡找視野的步驟。如果旁邊有電腦成像系統(tǒng)，那么在慢慢地抬高載物臺(tái)的同時(shí)，目光只需盯著電腦屏幕即可，這時(shí)加快上調(diào)的速度，直到在屏幕中看到圖像，然后從目鏡觀察，此時(shí)減緩上調(diào)的速度慢，就可以很快地觀察到目標(biāo)圖像。

4 三塘鐵試驗(yàn)的方法改進(jìn)

在做沙門氏菌生化實(shí)驗(yàn)[1]，接種三塘鐵斜面時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定培養(yǎng)18～24 h，必要時(shí)可延長(zhǎng)48 h。沙門氏菌的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象應(yīng)該是底層產(chǎn)酸變黃，斜面產(chǎn)堿變紅，產(chǎn)硫化氫使中間部分變黑，實(shí)際情況是可能會(huì)出現(xiàn)整只試管都變黑，而無(wú)法得知底層和斜面上的顏色變化。這是產(chǎn)生的硫化氫過(guò)多造成的，黑色掩蓋了其他顏色，原因可能是培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或者菌量過(guò)多。

方法改進(jìn)：①控制時(shí)間。從培養(yǎng)17 h開始觀察，每30 min觀察一次，并記錄顏色的變化情況。②控制取菌量，不要過(guò)多。

5 血清學(xué)凝集實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象觀察的方法改進(jìn)

血清學(xué)鑒定[1]在食品微生物檢驗(yàn)中并不常做，再加上國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中只是規(guī)定了觀察凝集現(xiàn)象，而對(duì)于凝集現(xiàn)象并沒(méi)有任何的文字表述。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)明確了現(xiàn)象觀察要對(duì)著黑色背景，但當(dāng)凝集不明顯時(shí)，對(duì)著黑色背景反而不利于觀察。

方法改進(jìn)：凝集現(xiàn)象就是出現(xiàn)細(xì)沙狀、絨毛狀的顆粒，觀察時(shí)要對(duì)著光線看，把載玻片舉過(guò)頭頂，眼睛從載玻片的下面對(duì)著燈光看，這樣更容易觀察到少量的凝集現(xiàn)象。

6 傾注平板時(shí)培養(yǎng)基冷卻的方法改進(jìn)

做菌落總數(shù)測(cè)定[2]時(shí)，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求平板計(jì)數(shù)瓊脂要冷卻到46 ℃再傾注平板。培養(yǎng)基從高溫滅菌鍋里拿出來(lái)時(shí)溫度很高，要使溫度降到46 ℃，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)給出的方法是放入（46±1）℃的恒溫水浴鍋中，但是這種方法很耗時(shí)。

方法改進(jìn)：把裝有培養(yǎng)基需要冷卻的三角燒瓶在室溫水流的均勻沖擊下40 s左右，溫度即可達(dá)到

46 ℃附近，此時(shí)再把該三角燒瓶放到（46±1）℃的恒溫水浴鍋中保溫，隨時(shí)備用。

7 結(jié)語(yǔ)

以上方法改進(jìn)都是在實(shí)際工作過(guò)程中完成的，希望能夠幫助到一線的檢驗(yàn)員們，同時(shí)也為檢驗(yàn)行業(yè)的蓬勃發(fā)展添磚加瓦，促使檢驗(yàn)行業(yè)越來(lái)越規(guī)范有序，檢驗(yàn)事業(yè)蒸蒸日上。

參考文獻(xiàn)：

[1]國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.GB 4789.4-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.

[2]國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.GB 4789.2-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.