李艷青（編譯），朱秀高（校）

（1.濰坊科技學(xué)院生物研發(fā)中心，山東 壽光 262700；2.武漢回盛生物科技有限公司，湖北 武漢 430042）

1 簡介

非洲豬瘟是發(fā)生于野豬和家豬的一種致命疾病，對(duì)全球養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，特別是在中國、蒙古和南亞地區(qū)。它不僅影響大型豬場，還會(huì)影響小豬場。1921年該病首次在非洲發(fā)現(xiàn)，并成為非洲的地方流行性疾病，目前在全球主要養(yǎng)豬地區(qū)都已出現(xiàn)。歐亞地區(qū)的流行開始于2007年，首先在格魯吉亞，隨后擴(kuò)展到高加索地區(qū)、俄羅斯、烏克蘭和白俄羅斯。2014年非洲豬瘟在波羅的海國家和波蘭出現(xiàn)，并在當(dāng)?shù)匾柏i群呈地方流行性。接下來的幾年里捷克、匈牙利、羅馬尼亞和比利時(shí)相繼暴發(fā)。2018年，羅馬尼亞南部臨近保加利亞地區(qū)有數(shù)百散養(yǎng)戶暴發(fā)了非洲豬瘟。從此，保加利亞一直處于疾病傳入的高風(fēng)險(xiǎn)狀態(tài)。

散養(yǎng)戶的低標(biāo)準(zhǔn)生物安全措施使他們非常容易成為疾病傳入的門戶。但散養(yǎng)戶目前存在于世界上許多國家的農(nóng)村地區(qū)，是此類地區(qū)農(nóng)業(yè)的重要組成部分。這是由于豬不僅是當(dāng)?shù)厝酥匾蛭ㄒ坏娜馐称穪碓?，還給養(yǎng)殖戶提供了可觀收入。保加利亞96%豬場為散養(yǎng)戶（不超過10頭豬），他們飼養(yǎng)了全國34%的存欄生豬。2018年8月，保加利亞首例非洲豬瘟疫情出現(xiàn)在Varna地區(qū)一個(gè)存欄7頭豬的散養(yǎng)戶。

在報(bào)告中，我們?cè)敿?xì)報(bào)告了該散養(yǎng)戶的整個(gè)發(fā)病過程和所采取的控制措施，并通過所有可用數(shù)據(jù)，評(píng)估疾病可能傳入的時(shí)間點(diǎn)和發(fā)病過程中的高風(fēng)險(xiǎn)期。歐洲范圍內(nèi)目前僅有很少非洲豬瘟的案例報(bào)告，且多數(shù)都集中在大型規(guī)?；i場，還缺少散養(yǎng)戶的案例。因此這個(gè)報(bào)告可以讓大家更好地理解非洲豬瘟在散養(yǎng)戶的發(fā)病經(jīng)過。

2 方法

發(fā)病過程的調(diào)查由當(dāng)?shù)孬F醫(yī)主管部門根據(jù)歐盟法律進(jìn)行。為了解更多發(fā)病細(xì)節(jié)，我們對(duì)豬場設(shè)施進(jìn)行了采樣，利用半提綱化訪談從當(dāng)?shù)剞r(nóng)民處收集到了一些信息，訪談主題包括豬場基本情況、發(fā)病過程、發(fā)病及死后癥狀、生物安全措施、豬只移動(dòng)情況、近期進(jìn)入豬場的人員情況和飼料購買情況。另外將樣品的實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果作為參考。最后，根據(jù)可能性大小確定幾個(gè)不同的病毒傳入途徑。利用Nurmoja公布的方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果和臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)價(jià)，以預(yù)測高風(fēng)險(xiǎn)時(shí)期的死亡率數(shù)據(jù)。分析中潛伏期假定為5 d、ASFV 基因Ⅱ型感染后的病毒平均存活時(shí)間假定為10 d。

3 病例描述

3.1 豬場基本情況

感染豬場位于Varna農(nóng)村地區(qū)一個(gè)有120戶人家的小村子，村內(nèi)幾乎一半人家都散養(yǎng)了幾頭豬。村子周邊主要是大片平原性農(nóng)田，間或有一些森林位于小山坡上。村子里農(nóng)戶通過養(yǎng)豬或其他畜禽作為他們半自足式農(nóng)業(yè)的一部分。發(fā)病豬場的7頭豬（2頭母豬、4頭肥豬和1頭公豬）與綿羊、驢、兔子和雞在一塊飼養(yǎng)（見圖1）。每個(gè)豬圈大約6 m2，豬圈的一多半是半封閉式，這個(gè)區(qū)域內(nèi)豬只間可以通過圍欄的縫隙相互接觸；另一部分是全封閉式。豬的飲水來自當(dāng)?shù)仫嬎艿?，通過軟管進(jìn)入每個(gè)舍內(nèi)，飼料是利用本地農(nóng)業(yè)合作社提供的當(dāng)?shù)禺a(chǎn)農(nóng)作物（主要是向日葵種子和小麥），自己混合后制成的配合飼料。根據(jù)農(nóng)戶提供的信息，沒有給豬喂過剩菜剩飯。豬場主人和他家人的主要工作就是飼養(yǎng)這些動(dòng)物，忙不過來的時(shí)候會(huì)找同事或鄰居幫忙。除此之外，沒有其他人進(jìn)入過這家農(nóng)戶的院落和畜舍之間。所有豬都是2017年在該農(nóng)戶決定重新開始給豬配種時(shí)購入，公豬是為了配種從周邊豬場買入，最后一次買賣豬是在2018年5月。

圖1是根據(jù)發(fā)病的時(shí)間先后順序和實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果重繪了可能的病毒傳播過程，并根據(jù)死亡時(shí)間點(diǎn)對(duì)豬進(jìn)行了編號(hào)。

3.2 發(fā)病過程

8 月16 日，發(fā)現(xiàn)1#懷孕母豬死亡，之前一天這頭豬出現(xiàn)發(fā)熱、沉郁和采食量下降等非特異性臨床癥狀，請(qǐng)獸醫(yī)進(jìn)行了對(duì)癥治療，由于該農(nóng)戶沒人在家，所以他的同事掩埋了死豬。8 月27 日，2#育肥豬在用抗生素和消炎藥治療后死亡，這頭豬也出現(xiàn)了跟1#母豬類似的非特異性臨床癥狀。8 月28 日，3#母豬也出現(xiàn)類似癥狀死亡，尸體與2#肥豬一起被農(nóng)戶掩埋。8 月29 日，4#公豬死亡后農(nóng)戶將這些信息告訴村長，由村長向官方獸醫(yī)部門匯報(bào)。隨后尸體解剖發(fā)現(xiàn)了很多指向ASF的癥狀，如淋巴結(jié)出血、脾臟腫大、腎臟皮質(zhì)點(diǎn)狀出血。采集的樣品在位于索菲亞的保加利亞國家參考實(shí)驗(yàn)室和位于馬德里的歐盟非洲豬瘟參考實(shí)驗(yàn)室，利用qPCR、IPA和病毒分離技術(shù)進(jìn)行初檢和復(fù)檢。結(jié)果顯示，4#公豬的脾臟、腎臟和淋巴結(jié)在IPA 和qPCR 檢測中均呈陽性，從脾臟和淋巴結(jié)中分離到了ASFV。8 月31 日官方確認(rèn)發(fā)病后，剩下的3頭豬5-7#被撲殺并進(jìn)行了采樣檢測，結(jié)果2 頭位于同一豬圈內(nèi)表現(xiàn)出相同非特異性癥狀的肥豬均為ASFV 陽性（病毒分離和基因檢測），其中5#肥豬的ASFV 抗體也是陽性（滴度偏低，1 ∶20），6#肥豬為抗體陰性。飼養(yǎng)在飼養(yǎng)管理通道另一側(cè)豬圈的7#肥豬既沒有表現(xiàn)任何臨床癥狀，實(shí)驗(yàn)室檢測抗原和抗體也均為陰性。2 頭之前死亡后掩埋的尸體挖出后進(jìn)行了取樣檢測，結(jié)果2 頭尸體的樣本均為ASFV 基因陽性。

3.3 控制措施

確診后當(dāng)?shù)馗鶕?jù)歐盟法規(guī)采取了控制措施。村內(nèi)所有豬共90 頭大豬和1 頭懷孕母豬全部進(jìn)行了撲殺，直至9 月3 日才完成。由于村子里這些豬場都沒有在官方注冊(cè)，所以保加利亞政府沒有給予撲殺后的補(bǔ)償，撲殺后的豬只根據(jù)保加利亞環(huán)保部要求在村子附近進(jìn)行了掩埋。所有可能受到污染的道路及撲殺過程中用的車輛和工具等都采取了清潔和消毒措施，發(fā)病場農(nóng)戶之前掩埋的3 頭死豬尸體也挖出與石灰一起重新掩埋在了2 m 深的位置，掩埋后地面和工具都用衛(wèi)可消毒劑進(jìn)行了消毒。為確認(rèn)該病是否已經(jīng)傳染到其他村子，對(duì)其附近10 km 區(qū)域內(nèi)的豬只進(jìn)行了取樣，從9 月3 日到18 日該區(qū)域內(nèi)的采樣量已經(jīng)占到總存欄數(shù)的90%（總計(jì)70 頭豬），所有樣品的qPCR 和ELISA 均呈ASFV 陰性。區(qū)域內(nèi)傳統(tǒng)散養(yǎng)模式豬場如East Balkan Swine 的農(nóng)戶被要求暫時(shí)待在豬場及附近區(qū)域內(nèi)；所有養(yǎng)豬農(nóng)戶被要求必須進(jìn)行官方注冊(cè)并采取一些基本的生物安全措施；受威脅區(qū)的農(nóng)戶被要求發(fā)現(xiàn)死豬后須立即向政府部門匯報(bào)以進(jìn)行ASF 檢測；在受威脅區(qū)內(nèi)獵戶被要求進(jìn)行所狩獵野豬的采樣檢測，并在發(fā)現(xiàn)死亡野豬后進(jìn)行匯報(bào)和采樣檢測，在野豬樣品檢測呈ASF 陰性之前不能移動(dòng)野豬尸體或銷售任何肉品。

3.4 基因分析

從4#豬的脾臟采樣檢測ASFV的基因序列，檢測結(jié)果顯示ASFVBulgaria 2018/1 毒株的長度為190.587 bp，與東歐分離株、西歐分離株和亞洲分離株的同源性達(dá)到99.9%。

4 討論

4.1 高風(fēng)險(xiǎn)期

高風(fēng)險(xiǎn)期（HRP）是指ASFV開始在豬場出現(xiàn)到疾病確診的階段，對(duì)這一時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行預(yù)估，可以有效評(píng)估疾病的傳播路徑。為確定本次流行的HRP，對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測數(shù)據(jù)和豬場死亡率數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合分析。第1頭豬出現(xiàn)ASF 癥狀的時(shí)間為8 月16日，根據(jù)感染后10 d 的存活期計(jì)算，病毒進(jìn)入該豬場的時(shí)間應(yīng)為2018 年8 月初，這樣從病毒進(jìn)入豬場到出現(xiàn)疑似病例周期就是25 d，相比愛沙尼亞HRP 為11 d 的周期偏長，HRP越長、病毒的傳播機(jī)會(huì)越多。出現(xiàn)這一情況的原因很可能是發(fā)病后沒有及時(shí)向當(dāng)?shù)孬F醫(yī)主管部門報(bào)告，因此，應(yīng)讓農(nóng)戶更好地認(rèn)識(shí)ASF 的癥狀，可以使他們可以及時(shí)報(bào)告。此外，獸醫(yī)應(yīng)當(dāng)避免對(duì)ASFV 感染豬采取任何治療措施。在這一案例中，第1 頭豬和第2 頭豬之間的發(fā)病日期相差11 d，從而導(dǎo)致農(nóng)戶沒有將兩個(gè)病例進(jìn)行相互聯(lián)系。

4.2 可能的傳播過程

1#母豬是豬場死亡的第1 頭豬，之后11ü 15 d 間其他感染豬陸續(xù)發(fā)病死亡。病毒進(jìn)入豬場后1#母豬是唯一被感染的對(duì)象，2-6#豬很可能在剛開始沒有被感染，之后通過與1#母豬直接或間接接觸而被感染，7#豬直到所有豬都被撲殺后也沒有被感染。7#與其他豬唯一的隔離措施就是一條大約1 m 寬的飼養(yǎng)管理通道，雖然7#豬與其他豬無法直接接觸，但所有豬均共用飼喂和清潔工具。不過農(nóng)戶也無法清楚描述豬場的飼喂和清潔順序，以解釋為什么7#豬沒有被感染。豬只間通過血液或含血分泌物直接接觸傳播很可能是走廊另一側(cè)存欄豬相互傳染的方式，沒有直接接觸可以解釋為什么相互隔離的豬只間沒有被感染，這也證明該病具有顯著的緩慢傳播特性。

4.3 生物安全和潛在傳入途徑

在多數(shù)感染國家，ASF 主要出現(xiàn)在散養(yǎng)戶，這與此類豬場的低生物安全措施有關(guān)。同時(shí)，豬撲殺后多數(shù)沒有任何補(bǔ)償措施，導(dǎo)致農(nóng)戶考慮如何減少損失，從而出現(xiàn)很多售賣病豬肉的情況，這種帶毒病豬肉會(huì)賣的比較便宜，使其更容易進(jìn)入家庭的餐桌，進(jìn)而容易作為剩菜剩飯用于飼喂其他豬。盡管在歐盟使用剩菜剩飯喂豬是被禁止的，但在一些小豬場這種情況依然存在。本案例中，人為因素將該病毒帶入豬場的可能性最大。

4.4 控制措施

散養(yǎng)戶采取的控制措施必須根據(jù)當(dāng)?shù)貤l件針對(duì)性制定。法規(guī)中的ASF 控制和凈化方案更多是依據(jù)規(guī)?；i場確定，而忽略了散養(yǎng)戶這一群體的特點(diǎn)。本案例中保加利亞這個(gè)發(fā)病豬場所在村子有一半多都是散養(yǎng)戶，每戶的存欄量都是1 ～2頭。盡管每戶的豬都養(yǎng)在各自封閉的圈內(nèi)，但其生物安全措施非常低。因此整個(gè)村子都被作為疫區(qū)，作為預(yù)防措施，村內(nèi)所有豬都被撲殺。但從本案例可以發(fā)現(xiàn)，如果控制措施能夠被嚴(yán)格執(zhí)行，散養(yǎng)戶出現(xiàn)ASF 后是能夠被有效控制的。通常，散養(yǎng)戶都沒有在官方注冊(cè)，發(fā)病時(shí)一方面他們很難準(zhǔn)確診斷，另一方面也無法收到因控制疾病傳播而采取撲殺措施后的補(bǔ)償。所以，也就可以理解他們?yōu)榱藴p少撲殺造成的損失，而選擇不報(bào)告豬場發(fā)病情況。發(fā)病后如果農(nóng)戶想要復(fù)養(yǎng)，則應(yīng)告訴他們應(yīng)該到官方注冊(cè)，注冊(cè)時(shí)強(qiáng)制要求其對(duì)豬場采取基本的生物安全措施。ASF 在當(dāng)?shù)匾柏i群體流行的不確定性要求我們要重視疾病的監(jiān)測。及時(shí)對(duì)發(fā)病野豬取樣檢測是早期疾病監(jiān)測和有效控制疾病的重要措施。散養(yǎng)戶使用的飼料原料多來自周邊農(nóng)田且未經(jīng)任何處理，這些農(nóng)作物可能被患病野豬污染。如果他們了解本地野豬群的疾病流行狀態(tài)，就會(huì)對(duì)這些農(nóng)作物采取進(jìn)一步處理措施，如加熱等，就可以有效預(yù)防該病傳入豬場。

5 結(jié)論

通過這個(gè)案例可以了解ASF 在散養(yǎng)戶豬群中的傳播動(dòng)態(tài)及控制措施。疾病從豬到豬的緩慢傳播可以證實(shí)該病具有顯著的接觸傳播特性，但這種發(fā)病初期的低發(fā)病率也是容易讓人忽視，而這是警醒人們提早采取檢測措施的原因。人為因素在該病的傳播中具有重要作用。通過這一案例可以發(fā)現(xiàn)，在散養(yǎng)戶中成功控制ASF 是可行的。

原文：Zani L, Dietze K, Dimova Z,et al. African Swine Fever in a Bulgarian Backyard Farmü A Case Report[J].Veterinary sciences, 2019,6(4): 94.