蔣文英 談珂嵐 吳丹 方琦

(常州市第一人民醫(yī)院乳腺外科，江蘇 常州 213000)

乳腺癌是臨床常見惡性腫瘤，約占女性惡性腫瘤的16.51%，已成為老年女性惡性腫瘤發(fā)病的首位〔1〕。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，乳腺癌治愈率逐年增高，但手術(shù)及其他輔助治療后,乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)率為10%～30%,合并高危因素者可達(dá)34%～40%〔2〕，乳腺癌局部術(shù)后局部復(fù)發(fā)仍為臨床面臨的難題。生存素(Survivin)為近年來發(fā)現(xiàn)的腫瘤凋亡抑制蛋白，可通過調(diào)控細(xì)胞周期及細(xì)胞增殖誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡〔3〕；基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9為細(xì)胞外基質(zhì)重要的蛋白水解酶，在促進(jìn)腫瘤血管新生的同時,還能通過降解細(xì)胞外基質(zhì),誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移〔4〕。研究表明，Survivin、MMP-9與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系〔5，6〕。目前，國內(nèi)關(guān)于Survivin和MMP-9的表達(dá)研究多針對原發(fā)性乳腺癌，而乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)癌的表達(dá)研究鮮有報道，本研究擬分析乳腺癌局部復(fù)發(fā)組織中Survivin和MMP-9的表達(dá)及其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2013年3～12月常州市第一人民醫(yī)院乳腺外科收治的96例乳腺癌局部復(fù)發(fā)患者，年齡60～73歲，中位年齡65.5歲；復(fù)發(fā)距首次手術(shù)時間10～42個月，平均24個月；初診時淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例；復(fù)發(fā)位置：乳腺54例，胸壁25例，手術(shù)瘢痕部17例；TNM分期：Ⅰ期34例，Ⅱ期39例，Ⅲ期17例、Ⅳ期6例；經(jīng)病理檢查腫瘤組織分類〔7〕：浸潤性小葉癌64例，浸潤性導(dǎo)管癌17例，小管癌8例，浸潤性乳頭狀癌7例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理學(xué)檢查確診為乳腺癌局部復(fù)發(fā)者；(2)初診時均行根治術(shù)或改良根治術(shù)治療，且術(shù)后行放化療者；(3)于本院接受初次治療者。排除合并其他惡性腫瘤、隨訪資料及臨床資料不全者。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)，患者及家屬對研究內(nèi)容均知情。本研究所有患者在本院接受首次手術(shù)治療時已采集乳腺癌組織進(jìn)行Survivin、MMP-9免疫組化檢測，復(fù)發(fā)再次治療后，采用門診或電話隨訪記錄患者從初次手術(shù)治療開始的生存時間，以患者死亡或2018年12月31日為截止時間。

1.2檢驗(yàn)方法 收集患者原發(fā)乳腺癌組織及復(fù)發(fā)乳腺癌組織，10%中性甲醛固定，石蠟包埋后，切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，Survivin、MMP-9檢測采用免疫組化S-P二步法，具體實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按試劑說明執(zhí)行，0.01 mol/L pH6.0檸檬酸緩沖液高壓修復(fù)，二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木精復(fù)染。用已知Survivin、MMP-9的P-gp陽性片(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供)為陽性對照，磷酸鹽緩沖液替代一抗為陰性對照，Survivin和MMP-9一抗均為兔單克隆抗體(美國abcam公司)。

1.3判讀標(biāo)準(zhǔn) Survivin陽性染色為棕黃色及棕褐色顆粒，主要表達(dá)于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中；MMP-9 陽性染色為棕黃色及棕褐色顆粒，主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中；由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師采用雙盲法判讀結(jié)果。每張切片隨機(jī)選取5個視野，每個視野計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞占比，陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)<10%為-，10%～50%為+，>50%為。+及均為陽性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1復(fù)發(fā)前后癌組織Survivin、MMP-9表達(dá)比較 原發(fā)癌組織中Survivin及MMP-9表達(dá)陽性率〔73.96%(71例)、68.75%(66例)〕與復(fù)發(fā)癌組織〔64.58%(62例)、58.33%(56例)〕比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.332、2.544，P=0.127、0.110)；其中，29.58%(21/71)原發(fā)癌組織中Survivin表達(dá)陽性轉(zhuǎn)為陰性，32.00%(8/25)Survivin表達(dá)陰性轉(zhuǎn)為陽性；33.33%(22/66)原發(fā)癌組織中MMP-9表達(dá)陽性轉(zhuǎn)為陰性，23.33%(7/30)MMP-9表達(dá)陰性轉(zhuǎn)為陽性。

2.2復(fù)發(fā)癌組織Survivin、MMP-9表達(dá)與病理參數(shù)的相關(guān)性 局部復(fù)發(fā)患者TNM分期Ⅰ～Ⅱ期癌組織中Survivin及 MMP-9陽性表達(dá)率明顯低于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)；而Survivin、MMP-9陽性表達(dá)與年齡、復(fù)發(fā)部位、復(fù)發(fā)時間、腫瘤直徑及腫瘤組織類型均無關(guān)(P>0.05)，見表1。

2.3復(fù)發(fā)癌組織Survivin與MMP-9的表達(dá)與患者生存時間的相關(guān)性 隨訪5年，乳腺癌局部復(fù)發(fā)患者5年生存79例，死亡17例。5年生存組復(fù)發(fā)癌組織中Survivin陽性表達(dá)率(48例，60.76%)低于死亡組(15例，88.24%)，MMP-9陽性表達(dá)率(41例，51.90%)低于死亡組(14例，82.35%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.682、5.303，P=0.031、0.021)。

2.4復(fù)發(fā)癌組織Survivin與MMP-9的相關(guān)性 Survivin在MMP-9陽性表達(dá)復(fù)發(fā)癌組織中表達(dá)率為91.07%(51例)，在MMP-9陰性表達(dá)復(fù)發(fā)癌組織中表達(dá)率為27.50%(11例)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=41.226，P<0.01)；乳腺癌局部復(fù)發(fā)癌組織中Survivin與MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.725，P<0.01)。

表1 復(fù)發(fā)癌組織Survivin、MMP-9表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

乳腺癌為女性常見惡性腫瘤，患病后對機(jī)體正常代謝、免疫功能及生活質(zhì)量等各方面造成極大影響。手術(shù)治療是乳腺癌臨床治療的最主要方式。 由于乳腺癌為全身性疾病，手術(shù)治療無法完全清除可能存在的陰性病灶，易導(dǎo)致術(shù)后復(fù)發(fā)。一般認(rèn)為，乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Survivin、MMP-9等生物分子指標(biāo)密切相關(guān)〔5，6〕。但對乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)的研究多局限于病程、原發(fā)灶大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)的分析，對Survivin、MMP-9的研究鮮有報道。乳腺癌的發(fā)病與復(fù)發(fā)均與腫瘤細(xì)胞的異常增殖有關(guān)，而Survivin、MMP-9均對腫瘤細(xì)胞有不同機(jī)制的抑制作用，推測復(fù)發(fā)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展受Survivin、MMP-9的調(diào)控。

Survivin具有調(diào)節(jié)細(xì)胞周期及抑制細(xì)胞凋亡的雙重功能。食管癌、肝癌、宮頸癌等腫瘤組織、胚胎及發(fā)育的胎兒組織均能檢測到Survivin的表達(dá)，腫瘤細(xì)胞中Survivin主要表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞核內(nèi)Survivin特異性作用細(xì)胞有絲分裂G2/M期，調(diào)控細(xì)胞分裂過程中紡錘體形成〔8〕；細(xì)胞質(zhì)中Survivin通過外源性和內(nèi)源性途徑抑制含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)活性進(jìn)而抗凋亡〔9〕。Tanaka等〔10〕通過免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)，Survivin在乳腺癌組織中高表達(dá)，陽性率為70%，而在正常組織中不表達(dá)；且發(fā)現(xiàn)Survivin陽性表達(dá)患者較陰性表達(dá)患者5年生存率明顯降低。研究表明〔11，12〕，乳腺癌組織中Survivin高表達(dá)，且為預(yù)后判斷的重要因素。MMP-9為蛋白水解酶，可水解細(xì)胞外基質(zhì)和基膜，破壞腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的細(xì)胞-細(xì)胞、細(xì)胞-基質(zhì)間屏障，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用；同時，MMP-9可刺激表皮生長因子的合成與釋放，促進(jìn)新生血管的生成〔13〕。研究表明〔14，15〕，乳腺癌組織中MMP-9表達(dá)增高，且MMP-9高表達(dá)者侵襲、轉(zhuǎn)移發(fā)生率高，病情惡性程度高，且預(yù)后較差。本研究結(jié)果與Tanaka等〔10〕、歐小波等〔14〕原發(fā)乳腺癌研究結(jié)果相近；且復(fù)發(fā)乳腺癌組織Survivin、MMP-9陽性率，與原發(fā)乳腺癌組織比較無明顯差異，與艾秀清等〔16〕研究結(jié)果一致。另外，本研究結(jié)果提示，局部復(fù)發(fā)乳腺癌與原發(fā)乳腺癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制類似，且Survivin、MMP-9在癌組織中表達(dá)可能受藥物或其他影響而發(fā)生改變，Survivin、MMP-9對術(shù)后乳腺癌局部復(fù)發(fā)患者的預(yù)后具有一定的預(yù)測作用，與相關(guān)研究結(jié)果基本一致〔10,17〕。

有研究顯示，Survivin的表達(dá)與腫瘤血管生成密切相關(guān)，腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移過程中，Survivin在腫瘤組織中的表達(dá)率有增高趨勢〔18〕；而MMP-9在促進(jìn)新生血管的生成中發(fā)揮重要作用；同時，在甲狀腺癌〔19〕、卵巢癌〔20〕等腫瘤研究中亦發(fā)現(xiàn)Survivin與MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)，但均未對其機(jī)制作出解釋。本研究結(jié)果顯示，腫瘤細(xì)胞可能通過調(diào)高Survivin、MMP-9表達(dá)水平而逃避凋亡過程及增強(qiáng)組織侵襲能力，二者在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著協(xié)同和促進(jìn)的作用，其分子作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)癌組織中Survivin、MMP-9與原發(fā)乳腺癌相近，二者表達(dá)呈正相關(guān)，在乳腺癌局部復(fù)發(fā)的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用，對患者預(yù)后具有一定預(yù)測價值，同時，以Survivin、MMP-9為靶點(diǎn)的新型特異性抑制劑將為乳腺癌的治療提供新思路。