孫秀媛 徐克芳 戴婧

(1青海省心腦血管病專(zhuān)科醫(yī)院檢驗(yàn)科,青海 西寧 810012;2上海新起點(diǎn)康復(fù)醫(yī)院內(nèi)科)

高血壓腦出血是指在基礎(chǔ)疾病高血壓的基礎(chǔ)上發(fā)生腦實(shí)質(zhì)內(nèi)出血，具有較高的致殘率和致死率，嚴(yán)重威脅人們生命健康〔1〕。高血壓腦出血由于血腫的占位性效應(yīng)，同時(shí)伴有血液循環(huán)紊亂，導(dǎo)致腦組織缺血缺氧，引起繼發(fā)性腦損傷，可遺留各種后遺癥，嚴(yán)重者也可因重要神經(jīng)中樞功能障礙而死亡〔2〕。膜聯(lián)蛋白(ANX)是一個(gè)鈣離子依賴(lài)的磷脂結(jié)合蛋白超家族，其生物學(xué)功能包括生物膜的形成、信號(hào)傳導(dǎo)、離子通道建立、抗炎、調(diào)節(jié)細(xì)胞的遷移和凋亡等，ANXA7是ANX家族成員之一，目前研究主要表明其與腫瘤具有密切關(guān)系，而與心血管疾病的相關(guān)性研究甚少〔3〕?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9是MMPs家族成員之一，其被激活后，可破壞血腦屏障的完整性而參與多種神經(jīng)疾病病理過(guò)程〔4〕。組織基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMP)-1是MMP-9內(nèi)源性特異性抑制劑，可抑制MMP-9表達(dá)〔5〕。本研究旨在探討高血壓腦出血患者ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值與早期腦損傷的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1一般資料 選取2015年8月至2018年1月青海省心腦血管病專(zhuān)科醫(yī)院收治的高血壓腦出血患者226例，設(shè)為高血壓腦出血組。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)頭顱CT確診腦出血；無(wú)既往腦出血史；發(fā)病至入院時(shí)間不超過(guò)6 h；本研究方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：腦腫瘤、腦外傷、腦血管畸形等引起的繼發(fā)性腦出血；急慢性感染；血液系統(tǒng)疾??；惡性腫瘤；老年癡呆或阿爾茨海默癥等認(rèn)知功能障礙。在高血壓腦出血組中，男119例，女107例，年齡65～88歲，平均(67.42±8.36)歲，出血部位：基底節(jié)102例，枕葉61例，顳葉38例，額葉25例；根據(jù)改良愛(ài)丁堡+斯堪的納維亞腦卒中量表(MESS)對(duì)患者的神經(jīng)功能缺損程度進(jìn)行評(píng)分，分為：輕度(0～15分)49例，中度(16～30分)105例，重度(17～45分)72例；根據(jù)腦出血量分為：小量出血量組(30～45 ml)99例，中量出血量組(46～60 ml)84例，大量出血量組(>60 ml)43例；根據(jù)格拉斯哥預(yù)后評(píng)分(GOS)將出院患者分為：預(yù)后良好組(GOS 4～5分)149例，預(yù)后不良組(GOS 1～3分)77例。選取同期到青海省心腦血管病專(zhuān)科醫(yī)院體檢的健康人群100例作為對(duì)照組，男54例，女46例，年齡65～87歲，平均(68.02±8.13)歲。

1.2研究方法 (1)ANXA7、MMP-9/TIMP-1比較：采集所有對(duì)象清晨空腹靜脈血3 ml，經(jīng)3 000 r/min離心10 min，獲得血清后置于-80℃冰箱保存待檢；(2)MESS〔6〕得分0～45分，分?jǐn)?shù)越高，神經(jīng)功能損越嚴(yán)重。輕度為0～15分，中度為16～30分，重度為17～45分；(3)采用GOS評(píng)價(jià)患者的預(yù)后〔7〕：恢復(fù)良好為5分：有輕度缺陷，但可以正常生活；輕度殘疾為4分：有殘疾，但可以獨(dú)立生活，可在保護(hù)下工作；重度殘疾為3分：有殘疾，日常生活都需照料；植物狀態(tài)為2分：只有最小反應(yīng)；死亡為1分。預(yù)后良好：GOS評(píng)分≥4分，預(yù)后不良：GOS評(píng)分<4分。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、方差分析、q檢驗(yàn)、Pearson相關(guān)分析及Logistic多元回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組ANXA7、MMP-9/TIMP-1的比較 高血壓腦出血組ANXA7、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組ANXA7、MMP-9/TIMP-1的比較

與對(duì)照組比較：1)P<0.05

2.2高血壓腦出血患者不同神經(jīng)功能缺損ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比較 隨著高血壓腦出血患者不同神經(jīng)功能缺損程度的加重，ANXA7、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1不斷升高(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 高血壓腦出血患者不同神經(jīng)功能缺損ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比較

與輕度組比較：1)P<0.05；與中度組比較：2)P<0.05

2.3高血壓腦出血患者不同出血量ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比較 隨著高血壓腦出血患者出血量的增加，ANXA7、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1不斷升高(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 高血壓腦出血患者不同出血量ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比較

與小量出血組比較：1)P<0.05；與中量出血組比較：2)P<0.05

2.4高血壓腦出血患者不同預(yù)后情況ANXA7、MMP-9/TIMP-1的比較 預(yù)后良好組ANXA7、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1顯著低于預(yù)后不良組(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 高血壓腦出血患者不同預(yù)后情況ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比較

與預(yù)后不良組比較:1)P<0.05

2.5高血壓腦出血患者入院時(shí)ANXA7、MMP-9/TIMP-1與各相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性分析 經(jīng)過(guò)Pearson相關(guān)性分析，ANXA7、MMP-9/TIMP-1與高血壓腦出血患者M(jìn)ESS、出血量、GOS均呈正相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 高血壓腦出血患者入院時(shí)ANXA7、MMP-9/TIMP-1與各相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性分析

2.6高血壓腦出血患者腦損傷的Logistic回歸分析 以MESS評(píng)分為因變量，以ANXA7(<30 μg/L=1,≥30 μg/L=1)、MMP-9/TIMP-1(<0.8=0,≥0.8=1)為自變量，經(jīng)Logistic多元逐步回歸分析，ANXA7、MMP-9/TIMP-1是高血壓腦出血患者發(fā)生腦損傷的預(yù)警因素。見(jiàn)表6。

表6 高血壓腦出血患者腦損傷的logistic回歸分析

3 討 論

高血壓腦出血是臨床常見(jiàn)病，腦出血引起的血腫可導(dǎo)致病灶中心神經(jīng)細(xì)胞損傷，也會(huì)造成血腫周?chē)纳窠?jīng)組織損傷；同時(shí)高血壓腦出血還可破壞血腦屏障，血腫周?chē)奂罅垦装Y細(xì)胞，釋放出的炎癥因子擴(kuò)大免疫炎癥反應(yīng)，引起繼發(fā)性腦損傷〔8～10〕。

ANX也叫作鈣磷脂結(jié)合蛋白，其成員主要以四具體的形式存在，有極高的同源性。ANXA7在腦組織中廣泛表達(dá)，通過(guò)促進(jìn)質(zhì)膜融合，參與機(jī)體的分泌過(guò)程〔11，12〕。Gerelsaikhan等〔13〕研究表明，ANXA7與突出小體相關(guān)蛋白(SNAP)-23存在相互作用。SNAP-23主要表達(dá)于腦組織中，且分布于突出后膜，參與突觸的融合及神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，可以促進(jìn)神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的胞吐〔14〕。因此推測(cè)ANXA7可能是通過(guò)與SNAP-23作用，影響進(jìn)神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的胞吐過(guò)程。有研究表明〔15〕，發(fā)生腦出血繼發(fā)性腦損傷后，ANXA7表達(dá)上升，且與SNAP-23/ SNAP-25的作用增多；通過(guò)hr ANXA7的干預(yù)，可以促進(jìn)ANXA7與SNAP-23/SNAP-25的作用，提高谷氨酸水平，加劇腦損傷進(jìn)程，而ANXA7抗體則具有相反的作用。

MMPs家族是一類(lèi)肽鍵內(nèi)切酶，可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，而細(xì)胞外基質(zhì)可維持血腦屏障〔16〕。MMP-9可降解細(xì)胞外基質(zhì)成分中的層黏連蛋白、纖維連接蛋白等，導(dǎo)致毛細(xì)血管通透性增加，使得血腦屏障破壞，導(dǎo)致血管源性水腫形成，由此參與腦出血后引起的繼發(fā)性腦損傷〔17〕。Egashira等〔18〕研究表明，在蛛網(wǎng)膜下腔出血后引起的血腦屏障和腦白質(zhì)損傷中，MMP-9起了很大作用。TIMP-1是MMP-9的抑制劑，可與其特異性結(jié)合，形成復(fù)合物，從而抑制MMP-9活性，對(duì)腦組織起到保護(hù)作用〔19〕。由上可知，TIMP-1/MMP-9動(dòng)態(tài)平衡可以作為評(píng)估高血壓腦出血后降低血腫進(jìn)展和減輕血管源性水腫的治療靶點(diǎn)。李丹東等〔20〕研究表明，實(shí)驗(yàn)性大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH) MMP-9/TIMP-1比值與基底動(dòng)脈痙攣和腦組織含水量具有顯著的相關(guān)性，可以作為判斷SAH后早期腦損傷的指標(biāo)。

本研究結(jié)果提示ANXA7、MMP-9/TIMP-1與高血壓腦出血患者的腦損傷及腦出血量有密切關(guān)系。因?yàn)楦哐獕耗X出血后主要存在炎癥反應(yīng)，而MMP-9、TIMP-1是與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的細(xì)胞因子，劇烈的炎癥反應(yīng)會(huì)引起腦損傷，因此對(duì)腦神經(jīng)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子有影響，由此推斷這是ANXA7水平升高的原因。本研究也進(jìn)一步說(shuō)明，當(dāng)高血壓腦出血逐漸恢復(fù)后，ANXA7、MMP-9/TIMP-1水平也隨之恢復(fù)平衡狀態(tài)。

本研究結(jié)果提示ANXA7、MMP-9/TIMP-1可能參與高血壓腦出血的腦損傷病理過(guò)程，分析其可能原因是正常人MMP-9/TIMP-1處于一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡，當(dāng)受到刺激后，就會(huì)失去平衡。高血壓腦出血發(fā)生后，形成的血腫會(huì)刺激大量炎性因子的釋放，其中就包括MMP-9和TIMP-1，且MMP-9升高水平明顯高于TIMP-1，導(dǎo)致MMP-9/TIMP-1比值升高，過(guò)量的MMP-9通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)破壞的血腦屏障的完整性，引起腦水腫，導(dǎo)致大量炎癥因子進(jìn)入腦組織，進(jìn)一步加劇腦損傷；腦神經(jīng)細(xì)胞在炎性因子的刺激下分泌更多的ANXA7，因此與SNAP-23/SNAP-25的作用增加，導(dǎo)致谷氨酸水平提高，加劇腦損傷。因此，MMP-9/TIMP-1與ANXA7參與高血壓腦出血腦損傷可能是一個(gè)上下游的關(guān)系，但其具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的分子生物學(xué)研究。

綜上，ANXA7、MMP-9/TIMP-1與高血壓腦出血患者的腦損傷程度有關(guān)，可作為預(yù)后的評(píng)估指標(biāo)。