劉美德 佟 穎 張 勇 李 靜 李秋紅 劉 婷 閻 婷 周小潔 曾曉芃

(北京市預防醫(yī)學研究中心，北京市疾病預防控制中心，北京 100013)

近年來，隨著全球氣候變暖，登革熱、基孔肯雅熱、寨卡病毒病在全球不斷蔓延，這些重要蚊媒傳染病在中國大陸絕大多數地區(qū)的傳播媒介都是白紋伊蚊，對白紋伊蚊進行有效監(jiān)測是做好蚊媒傳染病防控的重要基礎。目前，國內針對白紋伊蚊密度的監(jiān)測方法包括：人誘停落法、路徑指數法、雙層疊帳法；基于幼蟲調查的布雷圖指數調查方法、誘蚊誘卵器法等(中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局等,2009)，較少使用誘卵杯法作為主要監(jiān)測方法。誘卵杯法一直被美國CDC作為針對埃及伊蚊與白紋伊蚊監(jiān)測的主要方法之一(Jakobetal.,1967)，其計算所得誘卵指數和誘卵密度是針對兩種伊蚊密度預警的重要參數。根據經典誘卵杯法原理研發(fā)的誘蚊誘卵器(林立豐等,2006)在國內應用很廣泛，在白紋伊蚊低密度下，其所得指數與白紋伊蚊成蟲密度有較好的相關性(王力等,2019)；但是在環(huán)境復雜，蚊蟲密度較高的區(qū)域監(jiān)測結果仍不理想(蔡松武等,2009)。在北京的實際監(jiān)測過程中，也發(fā)現有現場存在人誘停落法白紋伊蚊成蟲密度(以后簡稱人誘法密度)很高區(qū)域，使用誘蚊誘卵器無法得出相應高密度誘蚊或誘卵指數。

誘卵杯方法具有簡便、易行、經濟、操作簡單，數據結果受人為因素干擾較少，監(jiān)測數據的地理分辯高等優(yōu)點。本研究針對誘卵杯法監(jiān)測白紋伊蚊密度應用效果進行現場研究，重點針對誘卵杯法監(jiān)測的卵密度與監(jiān)測點上白紋伊蚊成蟲密度的關系進行探討，以期明確其應用于白紋伊蚊的監(jiān)測實踐。

1 材料與方法

1.1 樣點的設置

本研究監(jiān)測區(qū)域位于北京某單位院落，位于城市核心區(qū)域，主要以建筑與綠地組成，環(huán)境類型主要包括：地面綠化草皮、低矮灌木、密植竹林和水泥硬化地面。經前期勘察，研究區(qū)域分布有密度特別高的點位，也有密度中等和密度較低的點位，符合白紋伊蚊成蟲密度與誘卵監(jiān)測關系研究的需要。

1.2 誘卵監(jiān)測

誘卵杯選擇黑色的塑料圓筒狀杯，開口與底部的直徑為10 cm，杯身高10 cm；產卵板為長15 cm×寬1.5 cm的木板；一般加水至體積的2/3 (圖1)。誘卵監(jiān)測時，每隔5 m放置一個誘卵杯，在以往監(jiān)測中顯示為高密度、中等密度和低密度區(qū)域內都有放置，總共放置30個以上的誘卵杯。在每個選擇的監(jiān)測點位上，選擇那些植被覆蓋遮蔽較好、陽光無法直射的植株底部放置誘卵杯。于北京7、8月兩個白紋伊蚊高峰月中選擇天氣晴好無降雨等不利天氣的時間段，一批誘卵杯連續(xù)放置共7 d，每天鑒定并計數每根產卵板上卵的數量，計算每個位置上每天誘卵量。

為比較誘卵杯加蓋對其誘卵監(jiān)測效果的影響，研究中還對一部分誘卵杯進行加蓋處理，即加蓋時稍微留出0.5～1 cm的縫隙，既便于插入產卵板，也方便蚊蟲進入產卵(圖1)。在同一區(qū)域，另行選擇時間進行誘卵杯加蓋與未加蓋在誘卵效果差異上的平行比較。

圖1 誘卵杯現場監(jiān)測圖

1.3 白紋伊蚊成蟲密度監(jiān)測

根據現場監(jiān)測點位多、時間要求緊湊的特點，在各個放置產卵杯點位上的白紋伊蚊成蟲密度監(jiān)測采用人誘停落法(中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局等,2009)進行監(jiān)測；并根據現場點位多，卵計數需要時間長的特點，進行稍微修改便于現場工作。具體監(jiān)測時，把整個區(qū)域中的所有監(jiān)測點位分為3組，每組10個點位，依產卵杯的位置依次間隔設置每個級別的監(jiān)測點；每次檢查產卵板上卵的數量時，也計數5 min內停落的白紋伊蚊數量；每天只監(jiān)測1組點位上的成蚊密度，后面2 d依次檢查后面兩組點位的成蚊密度，保證7 d內在所有點位上至少監(jiān)測2次；最后，把這兩次監(jiān)測的成蚊密度結果取平均值作為每個點位上人誘法密度。

1.4 統(tǒng)計分析

應用SPSS19.0，在研究中應用Spearman相關和線性回歸統(tǒng)計分析誘卵杯誘集卵的數量與人誘法誘集成蚊密度之間的關系；應用單因素的ANOVA(Analysis of Variance)分析(包括兩兩的LSD(Least Significant Difference)檢測，SNK(Student Newman Keuls)檢測)研究每天誘卵量之間的關系；應用T檢驗研究誘卵杯加蓋與未加蓋誘卵效果的差異，為讓人誘法密度與誘卵量之間的關系更清晰，研究還把7天各個點位上的誘卵量進行平均，并把人誘法密度乘以10， 以使誘卵量與人誘法密度的數據尺度一致方便比較。本研究P值以0.05作為統(tǒng)計顯著性的判斷標準。

2 結果

2.1 現場監(jiān)測中白紋伊蚊誘卵量的變化趨勢分析

整個現場誘卵實驗過程中，所有誘卵杯中的產卵板上都是白紋伊蚊的卵，沒有混入其他蚊種的卵塊。另外，單純從第1～7 d白紋伊蚊卵的誘卵量來看(圖2)，其增長是一種持續(xù)的增長趨勢，沒有表現出明顯的停滯或增長平臺。 但是從第1～7 d中每天新增長卵的數量趨勢線(圖2)，第1～3 d持續(xù)增長，第4～6 d基本保持平衡，其中第5 d增長的卵數量還低于第4、6 d的增長量，第4、6 d增長量基本一致；而第7 d也是一個新的顯著增長的過程。

圖2 白紋伊蚊誘卵量的變化趨勢圖

2.2 誘卵杯7天平均誘卵量與人誘法密度的關系

所有30個有效監(jiān)測點中，從圖3中可以看到，除少數幾個監(jiān)測點(例如第3、6、26、27號等點)上白紋伊蚊的產卵數量表現出現不穩(wěn)定的現象，即有時高，有時低的現象；其他點位上，基本上都是保持一種穩(wěn)定的表現，即誘卵量高的點位在7 d中都表現出高誘卵量的特性，而低誘卵量的點位，在所有7 d都是低誘卵量。

圖3 各監(jiān)測點位誘卵量趨勢圖

從圖4中可以看出除了個別點位(如：5、6、7、12、15)以外，基本上平均誘卵量高點位其人誘法密度也高，反之平均誘卵量低的點位，人誘法密度也低。 進一步，把7 d平均誘卵量與人誘法密度進行Spearman相關分析發(fā)現誘卵平均數與人誘法密度相關系數為正值(P=0.001<0.01)，各個點位上平均誘卵量與人誘法密度正相關。最后，兩者進行線性回歸分析發(fā)現誘卵量與人誘法密度顯著線性相關(Sig.=0.001<0.01，R2=0.590)。

圖4 誘卵杯平均誘卵量與人誘法密度比較

2.3 誘卵杯每天誘卵量變化情況分析研究

2.3.1每天誘卵量數據分布檢測: 研究發(fā)現第1～3 d誘卵杯中誘卵量正態(tài)性檢測的差異顯著，說明前3 d中誘卵量都是一種非正態(tài)分布，可能并沒有反映出自然真實的誘卵分布情況。自第4 d開始，所有樣點誘卵杯中誘卵量才出現正態(tài)分布卵數量。這說明從第4 d開始，誘卵杯監(jiān)測所得誘卵量才與自然白紋伊蚊真實產卵的分布接近。

2.3.2每天誘卵杯中誘卵量的多重均值比較：經過對7 d中誘卵杯中誘卵量均值的多重LSD檢測，發(fā)現第1 d誘卵量與第2、3 d誘卵量均值沒有顯著差異；第2 d的誘卵量與第1、3、4 d的誘卵量均值沒有顯著差異；第3 d的誘卵量與第1、2、4 d的誘卵量均值沒有顯著差異；第4 d誘卵量與第2、3、5 d的誘卵量均值沒有顯著差異；第5 d誘卵量與第4 d的誘卵量均值沒有顯著差異；第6 d誘卵量與第5 d誘卵量均值沒有顯著差異。第7 d誘卵量與之前所有監(jiān)測日的誘卵量都有顯著性差異(表1)。進而通過SNK檢測也把第1、2、3、4 d的誘卵量分至第1個均值沒有顯著性差異的同類子集(Sig.=0.116)；把第3、4、5 d的誘卵量均值分至第2個沒有顯著差異的同類子集(Sig.=0.117)；而第4、5、6 d的誘卵量均值分至第3個沒有顯著差異的同類子集(Sig.=0.085)；因為第7 d與其前面所有天數誘卵量都有顯著差異，所以其獨立組成一個同類子集(Sig.=1.000)。

2.3.3誘卵杯每天誘卵量與人誘法密度關系的分析研究: 對7 d中對人誘法密度與誘卵杯法監(jiān)測的誘卵量的相關分析結果來看，從第2 d開始，誘卵杯的誘卵量就與人誘法密度成統(tǒng)計顯著性相關性，而且相關系數都是正值，說明從第2～7 d，兩者都是一種顯著正相關關系。進一步，把人誘法密度作為因變量，把誘卵量作為自變量，使用全部導入自變量的方法進行線性回歸分析。研究中發(fā)現基本與相關分析的結果一致，自第2 d開始(R2=0.2，Sig.=0.013)使用誘卵杯的誘卵量就能比較好的擬合人誘法密度。而且在所有線性回歸模型中，誘卵杯誘卵量與人誘法密度回歸標準化系數都是正值，也說明了誘卵杯誘卵量與白紋伊蚊成蟲密度是一種正相關關系(表2)。

表1 每天誘卵量的多重LSD比較顯著值表

表2 每天誘卵量與人誘法密度的相關性檢測與線性回歸分析

2.4 現場監(jiān)測中誘卵杯加蓋與未加蓋誘卵效果的比較

通過對加蓋與未加蓋誘卵杯的誘卵量的均值T檢測，發(fā)現兩種方法獲得的誘卵量總體方差差異不顯著(不顯著方差方程的 Levene 檢驗F=1.206，Sig.=0.281)。進而在對其進行的均值方程的T檢驗中，方差相等的前提下，其Sig.=0.215，說明在現場誘卵杯監(jiān)測時，兩種方法獲得的誘卵量并無顯著性統(tǒng)計學差異，即誘卵杯是否加蓋并不顯著影響最終誘卵監(jiān)測結果。

3 討論

3.1 誘卵杯法監(jiān)測白紋伊蚊密度合適監(jiān)測時間

誘卵時間長短是顯著影響到誘卵杯中卵數量的一個重要因素，本研究中發(fā)現現場監(jiān)測從第2 d開始出現產卵，第4、5、6 d中進入一個增長相對穩(wěn)定平臺期，進入第7 d誘卵量又有一個明顯的增長。已有的研究都表明誘卵只有第2 d才出現陽性結果(霍新北等,2011; 徐仁權等,2006)，而且在誘卵第5～6天達到一個峰值(徐仁權等,2006)，本研究的現場監(jiān)測結果基本與以上研究的結果是一致的。但是，本研究還發(fā)現第7 d開始，誘卵量又出現一個明顯的增長，而且這這天監(jiān)測所得卵的數量與以前任何一天的誘卵量都有顯著的差異。誘卵器多是引誘的經產蚊，而且誘集效果與雌蚊的營養(yǎng)周期密切相關(霍新北等,2011)，李蓓思等(1991)的研究則表明，現場白紋伊蚊的營養(yǎng)周期大概63 h，如果假定一定區(qū)域產卵雌蚊是穩(wěn)定的，那么誘卵開始1～3 d快速增長天作為第1批經產蚊完成產卵高峰，而監(jiān)測4～6 d屬于產卵高峰值后的營養(yǎng)周環(huán)期(72 h>62 h)，那么第7 d有可能會有進入第2個營養(yǎng)周環(huán)期的雌蚊加入產卵序列，這有可能是第7 d的誘卵量與其他監(jiān)測天中卵數量都有顯著差異的生理與生態(tài)學原因。目前，美國(Jakobetal.,1967)和國家標準中誘卵杯法(中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局等,2009)，以及誘蚊誘卵器法(林立豐等,2006)都建議的是監(jiān)測4～7 d后回收誘卵器。而本研究的結果也提示對白紋伊蚊卵監(jiān)測中回收誘卵杯以第4～6 d為宜，如果延長至第7 d，有可能會引入明顯的差異。當然，如果有氣候等環(huán)境條件存在干擾或抑制白紋伊蚊產卵的可能性，也可以適當延長監(jiān)測時間，例如有研究表明誘卵效果在高溫條件下需要增加誘卵天數到7 d(任志華等,2018)。

3.2 誘卵杯中誘卵杯加蓋與否對監(jiān)測結果的影響

本研究中應用的是一種簡易的開口的黑色塑料杯，配套有相應的黑色蓋子，現場監(jiān)測結果表明，加上蓋子(留下空間插入產卵板，并方便蚊蟲飛入產卵)與未加蓋在誘卵效果上并無顯著的統(tǒng)計學差異。誘卵杯放置的環(huán)境對于其誘卵效果影響比較明顯(蔡松武等,2009)，而且誘蚊誘卵器和誘卵杯也都推薦放置在帶遮萌低矮植物下面(Jakobetal.,1967; 林立豐等,2006; 張杰等,2020)，主要是白紋伊蚊更喜棲息于這種遮蔭的微小生態(tài)環(huán)境中，從而達到增加其誘集效果的作用。但在這些微小生態(tài)環(huán)境中放置誘卵杯也會引出兩個問題。第一，開放的誘卵杯，會受到遮萌植株落葉的影響，要么堆積在杯中影響產卵，要么遮蓋產卵板減少誘卵量。第二，完全開口的誘卵杯，也會因為遮蔽植株澆水或自然降水的影響，造成杯中水量過大，直接影響實驗進程，造成無效杯。這此原因可能也是國內誘蚊誘卵杯與美國誘卵杯在設計上都加蓋的原因。按本研究的方法，適當使用杯蓋遮擋杯口，另外留出白紋伊蚊成蟲進出通道，既可以防止降雨或落入樹葉的影響，也可以讓產卵板少受影響，減少非有效產卵板，特別是也可以防止降雨對誘卵杯的影響，加蓋可以有效減少與防止這些環(huán)境因素的影響。本研究的結果說明遮蓋并不顯著改變誘卵杯的誘卵效果，而且?guī)w的誘卵杯可以有效減少樹葉、落葉、塵土、甚至是景觀灌溉的影響，使得卵計數更清晰，不受影響；最后，加蓋還可人為形成一個蔭蔽環(huán)境，利于白紋伊蚊產卵。

3.3 誘卵杯法應用于白紋伊蚊成蟲密度的監(jiān)測

對白紋伊蚊種群成蚊密度的監(jiān)測是對登革熱等蚊媒疾病防控的重要參數，本研究發(fā)現誘卵杯的誘卵量與成蟲密度相關性較好，基于誘卵量能夠線性回歸擬合人誘法監(jiān)測的蚊成蟲密度。一般來說，人誘停落法是監(jiān)測蚊蟲密度“金標準”(Krajacichetal.,2015)，誘卵杯得到的誘卵指數被做為一種重要的預測登革熱疫情的參數(Jakobetal.,1967)，當然也有研究認為誘卵指數不能代表BI值或標準間指數等(江毅民等,2015; 羅直智等,2015)，更不能代表人誘法密度指數。而國內廣泛使用的誘蚊誘卵器，只有在低密度條件下其相關密度指數才與蚊蟲人誘法密度正相關；而在一些白紋伊蚊密度高的區(qū)域，存在不相關的現象(蔡松武等,2009)，這一現象在北京蚊蟲監(jiān)測現場也時常發(fā)生。本研究表明誘卵杯的累計7 d平均誘卵數量能較好擬合白紋伊蚊人誘法密度(R2=0.59)，這一方面克服了高密度下誘卵量與成蟲密度脫鉤的現象；另一方面，誘卵杯法快速、經濟、簡易、易操作，可以在空間與時間尺度上高分辯率模擬出白紋伊蚊在自然環(huán)境的分布特征，提高了對白紋伊蚊防控的精準性，從而更有效地防控白紋伊蚊。當然如何把它應用對登革熱的暴發(fā)風險的指示作用，這也說明需要后期研究，包括結合布雷指數(BI)等對白紋伊傳播的登革熱等疾病的風險進行準確評估。

此外，本研究發(fā)現，每天誘卵杯與人誘法密度的回歸模型的R2(確定系數)都不大，最大的第7 d其確定系數也只有0.24；只有所有天數累積產卵量與人誘法密度的回歸確定系數才達到0.59，這說明誘卵量與人誘法密度相關與回歸較好，但確定系數仍較低。監(jiān)測現場中還能發(fā)現有個別的極高點位，由于其周邊本身孳生水體就較多，與誘卵杯形成有效競爭會造成誘卵不足的現象，這與文獻(黃建華等,2016)的研究類似。出現這些現象都與本研究使用的誘卵杯只使用了水作為產卵引誘物，其誘集產卵的效果容易遇到自然環(huán)境中其他水體的競爭。以上問題可能需要后期加入更有誘集力的引誘物增加引誘效果，這樣人誘法密度與誘卵量之間的相關與確定性會得到有效提高。

本研究中每個產卵板的卵量都是人工計數統(tǒng)計所得，相當的費力、費時、費人工。而且，從現場監(jiān)測的卵的種類來看，不會出現混雜有白紋伊蚊外別的蚊種的卵。這有可能受兩個因素的影響，一者，實驗現場地處北京城區(qū)，蚊種比較單純，基本由白紋伊蚊外和淡色庫蚊構成(張勇等,2014)；二者，兩種蚊種中白紋伊蚊喜歡在產卵板這樣水面交際處散狀產卵，淡色庫蚊主要是水面產塊狀卵(柳支英等,1990; 陸寶麟,1997)。如果是在蚊種比較復雜，或者也存在其他與白紋伊蚊類似產卵習性的蚊種的話，還需要仔細對卵的種類進行分別計數，這會帶來更大的計卵工作量。綜合以上的考慮，未來還需要加強更為智能快速的對卵自動計數技術方法的研究，才能更有利于誘卵杯法進行大范圍推廣和應用。