王方雨

（宜春學院體育學院，江西 宜春 336000）

云芝（Coriolus versicolor）是多孔菌科（Polyporaceae）一種具有藥用價值的真菌，多生長在枯木、倒木和腐木之上，由于其子實體無柄，菌蓋呈半圓扇形，有灰、白、褐、藍、紫等多種色彩并呈云紋狀，酷似云朵而得名[1]。

市面上已有云芝肝泰沖劑、云芝菌膠囊等臨床藥物，用于慢性遷延性肝炎和調(diào)節(jié)免疫等綜合性治療中，具有清熱解毒、消炎、預(yù)防機體氧化損傷等作用[2]。云芝的藥理作用主要是云芝多糖，云芝多糖具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫力等功效，云芝多糖一般為含蛋白質(zhì)的葡聚糖，是一種以單糖組成的同型多糖，其中的β-葡聚糖具有很強的生理活性，是增強免疫力的主要功效物質(zhì)，具有抗細菌、抗病毒感染的能力，從而減輕運動訓練時體能大量消耗對免疫細胞的傷害[3]。

云芝多糖具有抗氧化能力，可以清除大運動量訓練后機體產(chǎn)生的過多自由基，過量自由基是人體細胞受損的主要原因之一，由于競技比賽的需要，運動員一般都要通過高強度的訓練來提升成績，身體組織時常要處于無氧工作狀態(tài)，產(chǎn)生大量的乳酸和過量自由基，出現(xiàn)過氧化現(xiàn)象，而云芝多糖則可以清除各種過量的自由基，從而減輕大運動量訓練帶給運動員身體上傷害、延長無氧運動時間，改善高強度運動訓練帶來的不良影響[4]。

通過對云芝多糖的性質(zhì)特征進行研究，探討云芝多糖對運動耐力的影響。

1 材料和儀器

1.1 材料和試劑

試驗采用昆明種小鼠，購自廣東省醫(yī)學實驗動物中心。購買時體重13 g～16 g，集中適應(yīng)性飼養(yǎng)2周，控制小鼠體重在18 g～28 g。飼養(yǎng)方法為平均日飼料消耗量按5 g·100-1g-1、平均日飲水消耗量6 mL·100-1g-1～7 mL·100-1g-1；環(huán)境條件為溫度（21±2）℃、相對濕度30%～70%、光照周期12 h/12 h。試驗用主要試劑藥品如表1所示。

表1 試驗主要試劑Tab.1 Main test reagents

1.2 試驗儀器

HH-80數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州市億能試驗儀器廠；BSA224S-CW電子分析天平，深圳市林濤儀器有限公司；X5型紫外可見分光光度計，上海元析儀器有限公司；自制帶水泵水箱。

2 試驗方法

云芝多糖是一種大分子化合物，含有蛋白質(zhì)等其它物質(zhì)。在發(fā)酵提取的工藝上，需要進行純化分離去除雜質(zhì)，濕度、pH和分離技術(shù)都會影響其得率[4]。

為了檢驗云芝多糖的提純效果，也為了確定云芝多糖對運動健康的影響，對云芝多糖的化學穩(wěn)定性、抑菌性等特征開展試驗研究。

2.1 多糖室溫穩(wěn)定性試驗

多糖室溫穩(wěn)定性試驗取云芝多糖樣品溶液，每30 min測定一次吸光度，連續(xù)測定4 h，觀察云芝多糖樣品溶液的室溫化學穩(wěn)定性，繪制穩(wěn)定性曲線。

2.2 多糖對常見微生物的抑菌試驗

配制15%、30%、45%、60%、75%、90%、100%濃度的云芝多糖精制樣品溶液7份，將預(yù)先滅菌處理過的圓形濾紙片分別放入7種濃度的樣品溶液中浸漬，另加1份蒸餾水的對照組共8份樣品。

按不同濃度將浸漬過的濾紙依次擺放到帶菌種的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿所帶菌種為大腸桿菌（Escherichia coli）、圓褐固氮菌（Azotobacter chroococcum）、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa） 等3種革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草桿菌（Bacillus subtilis）、四聯(lián)球菌（Micrococcus tetragenus） 等3種革蘭氏陽性菌共6個試驗菌種。放入恒溫箱在（35±2）℃條件下培養(yǎng)24 h，觀察抑菌圈的大小變化，測量最低抑菌濃度（morphology immunology cytogenetic，MIC）。

2.3 小鼠負重游泳試驗

試驗小鼠隨機分成2組，每組20只。兩組小鼠均按飼養(yǎng)條件正常喂養(yǎng)試驗組每天使用濃度為50%的云芝多糖的溶液灌胃1次，灌胃劑量為2 g·kg-1體重，連續(xù)灌胃4周；對照組（CK）每天使用同等劑量的純凈水灌胃1次，連續(xù)4周。

在小鼠最后1次灌胃1 h后進行負重游泳試驗，在小鼠尾部1/3處系2 g重鉛皮，放置于水深30 cm、水溫25℃的水箱中，開水泵使水向小鼠頭部流動迫使小鼠游泳，用秒表記錄小鼠放入水中后到頭部沉入水不能上浮10 s后的時間，即為負重游泳時間。

3 試驗結(jié)果

3.1 多糖室溫穩(wěn)定性試驗

云芝多糖的室溫穩(wěn)定性試驗結(jié)果見圖1。

由圖1所示，多糖穩(wěn)定性曲線波動范圍很小，云芝多糖樣品在4 h內(nèi)的吸光度變化不大，其化學性質(zhì)相對穩(wěn)定。

3.2 多糖對常見微生物的抑菌試驗

云芝多糖對常見微生物的抑菌試驗試驗結(jié)果見表2。

表2 多糖對常見微生物的最小抑菌濃度Tab.2 MIC of polysaccharides to common microorganisms

由表2可以看出，云芝多糖對銅綠假單胞菌沒有抑制效果，對其它幾個菌種都有較好的抑菌效果。但對大腸桿菌和圓褐固氮菌等革蘭氏陰性菌，其MIC應(yīng)大于30%；而對枯草桿菌和四聯(lián)球菌2種革蘭氏陽性菌的抑制效果也需要MIC在30%以上才能顯示出較好的抑制效果；但總體上云芝多糖對革蘭氏陽性菌的抑制效果更好。

云芝多糖的抑菌作用機制分析，可能是由于多糖大分子具有較好的表面活性，能夠促進有害細菌外細胞壁的溶解，破壞有害細菌的生存繁殖；而且試驗結(jié)果顯示其對多種細菌均會產(chǎn)生抑制效果，因此，云芝多糖的抑菌作用是廣譜性的。

試驗結(jié)果表明，革蘭氏陰性菌和陽性菌與空白對照組比較，不同溫度條件下加熱后，僅有1項顯示陽性，基本沒有變化，表明云芝多糖在不同加熱溫度下也能保持良好的抑菌效果。

3.3 多糖對小鼠負重游泳時間的影響

負重游泳時間反應(yīng)了機體的運動耐受力，負重游泳時間可以用于直觀反應(yīng)機體的抗疲勞效果。對2組小鼠分別進行負重游泳實驗，試驗結(jié)果如表3所示。

表3 多糖對小鼠負重游泳時間的影響Tab.3 Effect of polysaccharide on weight-bearing swimming time in mice

由表3可知，試驗組小鼠負重游泳至力竭的時間較對照組（CK）組明顯增加，具有非常顯著性差異（P<0.05），說明云芝多糖對提高小鼠的游泳耐力有較好的效果。

4 結(jié)論

對云芝多糖的穩(wěn)定性、安全性和運動耐力方面進行了研究。

穩(wěn)定性和抑菌特性試驗表明，云芝多糖的室溫穩(wěn)定性良好，對革蘭氏陽性陰性菌的均具有抑菌效果，具有廣譜的抑菌作用，在室溫下不會發(fā)生變質(zhì)等食品安全問題，是一種安全的人體多糖來源。

小鼠負重游泳試驗表明，云芝多糖對運動耐力有提高小鼠的游泳耐力有較好的效果，具有一定的抗疲勞功效。

后期將對云芝多糖的抗氧化性開展試驗，進一步研究其對運動能力的影響。