夏爐明，盧軍，黃忠，吳秀娟，王建，孫泉云，朱九超，季海豐，鄢志剛，趙洪進(jìn)*

(1. 上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103；2. 上海市崇明區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 202150)

結(jié)核病(tuberculosis)是由分支桿菌引起的人和動(dòng)物共患的一種慢性傳染病，其特點(diǎn)是在多個(gè)組織器官形成結(jié)核結(jié)節(jié)和干酪樣壞死或鈣化結(jié)節(jié)病理變化[1]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為二類動(dòng)物疫病。分支桿菌屬包括3個(gè)種，分別是結(jié)核分支桿菌、牛分支桿菌和禽分支桿菌。本病可侵害人和多種動(dòng)物，家畜中奶牛最易感，豬和家禽易感性也較強(qiáng)[2]。結(jié)核病患病動(dòng)物尤其是開(kāi)放性患者是本病的主要傳染源，其痰液、糞尿、乳汁和生殖道分泌物中都可帶菌，通過(guò)污染的飼料、食物、飲水、空氣和環(huán)境而散播傳染[1]。2016年10月14日，上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心接到某奶牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社檢出14頭結(jié)核病陽(yáng)性牛的結(jié)果報(bào)告。為了解疫病發(fā)生情況和可能原因，評(píng)估相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素，立即針對(duì)該奶牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社開(kāi)展了暴發(fā)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 病例定義

結(jié)核病疑似牛：根據(jù)動(dòng)物結(jié)核病診斷技術(shù)[3](GB/T 18645-2002)，采用牛型結(jié)核分支桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)對(duì)奶牛群進(jìn)行結(jié)核病檢疫，皮厚差≥2.0 mm，<4.0 mm的牛，判為結(jié)核病疑似牛，并于60 d后進(jìn)行復(fù)檢。

結(jié)核病陽(yáng)性牛：根據(jù)動(dòng)物結(jié)核病診斷技術(shù)(GB/T18645-2002)，采用牛型結(jié)核分支桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)對(duì)牛群進(jìn)行結(jié)核病檢疫，皮厚差≥4.0 m，局部有明顯的炎性反應(yīng)，判為結(jié)核病陽(yáng)性牛；或者結(jié)核病疑似牛于第一次檢疫60 d后進(jìn)行復(fù)檢，其結(jié)果仍為疑似或陽(yáng)性反應(yīng)，判為結(jié)核病陽(yáng)性牛。

1.2 病例搜索

按照病例定義進(jìn)行回顧性搜索。

1.3 數(shù)據(jù)采集

與奶牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社負(fù)責(zé)人進(jìn)行座談，了解奶牛存欄、防疫狀況、奶牛引進(jìn)歷史和牛只/牛奶出售情況、人員流動(dòng)和車輛進(jìn)出信息，本場(chǎng)和周邊養(yǎng)殖情況等；通過(guò)調(diào)閱資料查看結(jié)核病歷史檢測(cè)數(shù)據(jù)；通過(guò)實(shí)地勘查的方式了解牛場(chǎng)周邊環(huán)境、內(nèi)部布局、養(yǎng)殖情況以及陽(yáng)性病例分布等情況，并填寫(xiě)《反芻動(dòng)物(牛、羊、駱駝、鹿)結(jié)核病緊急流行病學(xué)調(diào)查表》。

1.4 數(shù)據(jù)分析

通過(guò)座談了解基本防疫情況；采用描述性流行病學(xué)方法對(duì)奶牛結(jié)核病暴發(fā)情況進(jìn)行三間分布描述；綜合現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查情況和信息，對(duì)暴發(fā)結(jié)核病陽(yáng)性的風(fēng)險(xiǎn)因素開(kāi)展定性分析，并提出相應(yīng)的防控建議。

2 結(jié)果

2.1 調(diào)查概況

2.1.1 基本情況

該合作社類似于養(yǎng)殖小區(qū)，實(shí)際由兩家奶牛場(chǎng)組成，從人員、牛群、物料、牛奶出售等均完全獨(dú)立，但生活區(qū)相通，生產(chǎn)區(qū)由一條6 m寬的水泥道路一分為二，道路兩邊用鏤空的鋼管將牛群進(jìn)行物理隔離。兩家奶牛場(chǎng)均為三棟牛棚，布局基本對(duì)稱。奶牛場(chǎng)人員基本固定，多為外地的夫妻對(duì)，平時(shí)均駐場(chǎng)。該合作社共計(jì)存欄奶牛545頭，其中成乳牛268頭，育成牛199頭，小牛78頭，鮮奶由某集團(tuán)公司統(tǒng)一收購(gòu)。合作社于2013年5月正式投產(chǎn)，設(shè)施良好，雙排式機(jī)器擠奶，自動(dòng)刮糞，糞污干濕分離，有獨(dú)立隔離的有機(jī)肥生產(chǎn)車間。但布局上存在兩個(gè)嚴(yán)重缺陷，一是沒(méi)有病牛隔離舍，二是奶罐位于生產(chǎn)區(qū)，每天有收奶車進(jìn)入。

2.1.2 飼養(yǎng)管理

合作社日常飼養(yǎng)管理良好，場(chǎng)區(qū)較為整潔。泌乳牛飼喂進(jìn)口苜蓿草，奶產(chǎn)量較高，每天平均28 kg/頭，其他牛飼喂自配的全價(jià)料。奶牛乳房炎發(fā)病率低，牛群常見(jiàn)疾病為關(guān)節(jié)炎，年發(fā)病率約13%，治療后淘汰率7%。配種方式為人工授精，精液由某集團(tuán)公司的奶牛育種中心提供(該育種中心通過(guò)奶?！皟刹　眱艋痉秷?chǎng)的評(píng)估驗(yàn)收)。

2.1.3 防疫狀況

雖然該合作社硬件設(shè)施較好，但兩家奶牛場(chǎng)主的防疫意識(shí)淡薄，自牛群檢出結(jié)核病陽(yáng)性以來(lái)，迄今未對(duì)陽(yáng)性和疑似牛進(jìn)行隔離；生產(chǎn)區(qū)入口的兩個(gè)消毒池均干枯，無(wú)任何消毒作用；飼料和收奶車通道的消毒池水過(guò)淺，無(wú)車輛噴霧消毒設(shè)施；場(chǎng)區(qū)消毒頻率為每周一次，采取人工噴霧消毒方式，出現(xiàn)異常情況以來(lái)，亦未提升場(chǎng)區(qū)消毒頻率。

2.1.4 引種情況

奶牛場(chǎng)曾于2012年下半年從外地引進(jìn)過(guò)7-8月齡育成牛70頭，引進(jìn)牛雖有奶?！皟刹　睓z測(cè)報(bào)告，但未經(jīng)隔離直接混群飼養(yǎng)，2013年奶牛場(chǎng)整體搬入新址后，則未引進(jìn)牛。

2.2 三間分布描述

2.2.1 時(shí)間分布

根據(jù)病例定義對(duì)該合作社結(jié)核病檢疫結(jié)果的既往史進(jìn)行回顧性搜索，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2012年以前該合作社的牛群均為結(jié)核病清凈群，疑似牛也很少出現(xiàn)。自2012年下半年開(kāi)始，該合作社就開(kāi)始不斷有結(jié)核病疑似牛和陽(yáng)性牛的出現(xiàn)，分別于2012年下半年、2015年上半年各檢出1頭結(jié)核病陽(yáng)性牛，2015年出現(xiàn)大量的可疑病例，但60 d后復(fù)檢又全部為陰性，2016年共檢出14頭結(jié)核病陽(yáng)性牛。2012-2016年結(jié)核病檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，流行病學(xué)曲線見(jiàn)圖1。

表1 2012-2016年某奶牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社結(jié)核病檢測(cè)結(jié)果

項(xiàng)目2012年2013年2014年2015年2016年檢測(cè)數(shù)/頭9631 0439729841 086結(jié)核病疑似牛/頭95412317結(jié)核病陽(yáng)性牛/頭1?00114

注：*引進(jìn)牛

圖1 奶牛結(jié)核病暴發(fā)流行病學(xué)曲線

2.2.2 空間分布

該奶牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社結(jié)核病檢疫陽(yáng)性牛位于1號(hào)棚和3號(hào)棚，1號(hào)棚為泌乳牛舍，牛呈散放狀態(tài)，共檢出3頭陽(yáng)性牛；2號(hào)棚為后備青年牛舍(牛月齡：3-23個(gè)月)，呈散放狀態(tài)，此次未檢出結(jié)核病陽(yáng)性牛，2號(hào)棚的牛相對(duì)固定，只有臨近分娩的牛才遷入3號(hào)棚；3號(hào)棚承擔(dān)的功能較多，主要包括異常牛、犢牛、分娩牛、新生小牛和干奶牛，牛采用栓系飼養(yǎng)，1號(hào)棚和3號(hào)棚日常牛流通比較頻繁。3號(hào)棚檢出結(jié)核病陽(yáng)性牛最多，共11頭，其中6頭牛在空間位置上緊緊相臨。場(chǎng)區(qū)布局平面圖詳見(jiàn)圖2。

★表示結(jié)核病陽(yáng)性牛的位置

圖2 某奶牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社場(chǎng)區(qū)平面布局及結(jié)核病陽(yáng)性牛位置

2.2.3 群間分布

2016年檢出的14頭結(jié)核病陽(yáng)性牛中，既有犢牛，也有成乳牛，年齡分布8月齡-6歲之間，其中3-4歲牛較多，共4頭，其次為4-5歲牛，共3頭。具體年齡段分布見(jiàn)圖3。

圖3 結(jié)核病陽(yáng)性牛的年齡分布情況

2.3 風(fēng)險(xiǎn)因素定性分析

根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果分析，該奶牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社暴發(fā)結(jié)核病的原因與2012年從外地引進(jìn)奶牛有關(guān)，特別是陽(yáng)性牛未采取有效隔離措施以及疑似牛的隔離、消毒和淘汰處理措施不堅(jiān)決，且牛群混養(yǎng)和棚舍之間流動(dòng)頻繁，導(dǎo)致了結(jié)核病的場(chǎng)內(nèi)循環(huán)。該奶牛養(yǎng)殖合作社結(jié)核病陽(yáng)性風(fēng)險(xiǎn)因素定性分析結(jié)果見(jiàn)表2。

3 防控建議

立即撲殺結(jié)核病陽(yáng)性牛并進(jìn)行無(wú)害化處理，隔離結(jié)核病疑似牛，視復(fù)檢結(jié)果再行處理，加強(qiáng)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)的環(huán)境消毒，禁止奶牛群以及牛場(chǎng)飼養(yǎng)人員的流動(dòng)和串舍。

增加后續(xù)牛群結(jié)核病的檢疫頻次。

對(duì)合作社所有從業(yè)人員開(kāi)展針對(duì)結(jié)核病的健康檢查。

4 討論

暴發(fā)調(diào)查是對(duì)某養(yǎng)殖場(chǎng)或某一地區(qū)在較短時(shí)間內(nèi)集中發(fā)生較多同類病例(病例數(shù)超過(guò)預(yù)期)所作的調(diào)查，主要目的：一是核實(shí)可疑疫情，掌握疫病發(fā)生狀況；二是查找疫病發(fā)生原因和可能擴(kuò)散的范圍，開(kāi)展追溯和追蹤調(diào)查；三是提出針對(duì)性防控建議，阻止類似事件的再次發(fā)生[4]。上海通過(guò)連續(xù)多年一年兩次全群“監(jiān)測(cè)-淘汰-凈化”策略的實(shí)施，奶牛結(jié)核病防控取得顯著成效，總體陽(yáng)性率低于0.1%，達(dá)到穩(wěn)定控制標(biāo)準(zhǔn)[5]。為了保障上海市奶牛結(jié)核病來(lái)之不易的防控成果，在奶牛檢疫過(guò)程中發(fā)現(xiàn)1例結(jié)核病陽(yáng)性就必須啟動(dòng)暴發(fā)調(diào)查，以弄清疫病發(fā)生原因，查找風(fēng)險(xiǎn)因子，及時(shí)采取干預(yù)措施。本研究嚴(yán)格按照暴發(fā)調(diào)查的步驟開(kāi)展[6]，具有較好的借鑒意義。

表2 某奶牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社結(jié)核病陽(yáng)性風(fēng)險(xiǎn)因素定性分析結(jié)果

可能的風(fēng)險(xiǎn)因素調(diào)查分析風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)傳入風(fēng)險(xiǎn)因素引進(jìn)奶牛2012年從外地引進(jìn)奶牛70頭,并在當(dāng)年檢出1頭結(jié)核病陽(yáng)性,之后不斷有結(jié)核病疑似牛和陽(yáng)性牛檢出。高引進(jìn)精液或胚胎采用人工受精方式配種,精液均來(lái)源于本市某奶牛育種中心,該中心為國(guó)家“兩病”凈化示范場(chǎng),且每批精液有檢測(cè)報(bào)告;該合作社不引進(jìn)胚胎。低外來(lái)車輛除收奶車外,其它車輛均不能進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)。淘汰牛驅(qū)趕至售牛碼頭進(jìn)行裝運(yùn);收奶車進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)前需消毒,采用點(diǎn)對(duì)點(diǎn)方式運(yùn)輸;有機(jī)肥場(chǎng)與生產(chǎn)區(qū)完全隔離,糞污收集車輛不經(jīng)過(guò)生產(chǎn)區(qū)。低外來(lái)人員合作社飼養(yǎng)人員基本固定,每年進(jìn)行體檢;外來(lái)人員嚴(yán)禁進(jìn)入生產(chǎn)區(qū),業(yè)務(wù)洽談等均在生活區(qū)的辦公室。中氣溶膠周邊奶牛場(chǎng)較少,結(jié)核病通過(guò)氣溶膠傳入的能力有限。低飼料、飲水、獸藥等投入品或其它器具飼料倉(cāng)庫(kù)和獸醫(yī)物品庫(kù)位于生產(chǎn)區(qū)外,飲水采用自來(lái)水。低野生動(dòng)物(流浪貓等動(dòng)物/鼠類/飛鳥(niǎo)等)每月定期滅蟲(chóng)滅鼠,但生產(chǎn)區(qū)流浪貓和偷食飼料的飛鳥(niǎo)較多。中場(chǎng)內(nèi)循環(huán)風(fēng)險(xiǎn)因素牛群間接觸1號(hào)棚和2號(hào)棚的牛完全散養(yǎng),且無(wú)疑似和病牛隔離舍。高場(chǎng)內(nèi)人員串舍場(chǎng)內(nèi)工作人員多為夫妻對(duì),人手不夠時(shí)存在串舍幫忙現(xiàn)象。高針具、物品等器械交叉使用該合作社從場(chǎng)長(zhǎng)到工作人員,防疫意識(shí)較為淡薄,雖有各項(xiàng)防疫制度,但執(zhí)行不夠嚴(yán)格。中糞便和污水采用機(jī)器自動(dòng)刮糞,場(chǎng)區(qū)衛(wèi)生狀況較好,雨污分流,有獨(dú)立的糞污處理區(qū)。低

牛群變動(dòng)是導(dǎo)致結(jié)核病傳入奶牛場(chǎng)的主要風(fēng)險(xiǎn)因素之一，同時(shí)，結(jié)核病檢測(cè)方法的敏感性和特異性不高是制約奶牛結(jié)核病防治和凈化效果的重要因素[7]。結(jié)核分支桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)是OIE推薦和我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部指定的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，該方法的敏感性和特異性約為70%，除操作繁瑣外，還受到人為判斷的因素影響[8]。采用牛型和禽型PPD比較變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，排除了禽型結(jié)核分支桿菌引起的假陽(yáng)性，提高了牛型結(jié)核的特異性，但由于牛型結(jié)核PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)敏感性的局限，在奶牛結(jié)核病凈化過(guò)程中，假陰性牛作為重要的污染源常常難以被發(fā)現(xiàn)。在今后的結(jié)核病防控過(guò)程中，可采用敏感性高的γ-干擾素試驗(yàn)進(jìn)行篩查，或采用PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)和γ-干擾素試驗(yàn)聯(lián)合平行檢測(cè)的策略，提高檢測(cè)方法的敏感性，以達(dá)到減少假陰性的目的。

結(jié)核分支桿菌是胞內(nèi)寄生菌。機(jī)體抗結(jié)核病的免疫基礎(chǔ)主要是細(xì)胞免疫，依靠致敏的淋巴細(xì)胞和激活的單核細(xì)胞相互協(xié)作來(lái)完成，體液免疫只是次要的。結(jié)核免疫的另一個(gè)特點(diǎn)是傳染性免疫和傳染性變態(tài)反應(yīng)同時(shí)存在[1]。因此，結(jié)核病的潛伏期一般較長(zhǎng)，有研究報(bào)道潛伏期長(zhǎng)者數(shù)月甚至數(shù)年，且通常取慢性經(jīng)過(guò)[9]。按照上海市主要?jiǎng)游镆卟∧甓缺O(jiān)測(cè)計(jì)劃，該奶牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社嚴(yán)格執(zhí)行一年兩次的全群結(jié)核病檢疫，2012年牛群變動(dòng)前后最顯著的變化是該合作社于2012年下半年檢測(cè)出1頭引進(jìn)奶牛的結(jié)核病陽(yáng)性，之后則不斷有結(jié)核病陽(yáng)性和疑似牛的出現(xiàn)?；诮Y(jié)核病病原特征和該合作社歷史病例回顧，初步推斷導(dǎo)致此次結(jié)核病疫情的聚集性發(fā)生與2012年的牛群變動(dòng)和場(chǎng)內(nèi)循環(huán)有關(guān)。