何龍芳，龍?jiān)粕瑥埡I(yè)

（廣東省信宜市人民醫(yī)院 傳染科，廣東 信宜525300）

乙型肝炎 （簡(jiǎn)稱乙肝）是乙肝病毒 （HBV）感染引起的傳染性疾病。WHO統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全球HBV感染者約20億，其中慢性HBV攜帶者逾3.5億，每年死于HBV感染相關(guān)疾病患者達(dá)75萬(wàn) ～100萬(wàn)［1］。我國(guó)是HBV感染高流行地區(qū)，人群HBsAg陽(yáng)性檢出率接近10%［2］，雖然近年乙肝疫苗的預(yù)防使用有效降低了乙肝人群感染率，但乙肝仍是目前臨床研究的重點(diǎn)課題之一。血清學(xué)檢測(cè)是臨床診斷乙肝的重要方法，特別是HBV DNA檢測(cè)，不僅可用于明確患者有無(wú)HBV感染，亦能通過(guò)定量檢測(cè)明確病毒DNA復(fù)制水平，評(píng)估傳染性，為乙肝臨床治療及傳染防治提供依據(jù)［3］。本研究探討HBV DNA與乙肝血清標(biāo)志物HBeAg、HBsAg的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2015年1月至2016年12月我院門診和住院部收治的150例乙肝患者為研究對(duì)象，均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)《慢性乙型肝炎防治指南》［4］相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除合并其他傳染性疾病、免疫性疾病、血液性疾病及惡性腫瘤患者。其中，男93例，女57例；年齡26～84歲，平均 （41.5±13.6）歲。

1.2 方法清晨空腹抽取患者靜脈血液4 mL送檢實(shí)驗(yàn)室，取上清液，采用雅培ARCHTECT i2000SR全自動(dòng)免疫分析儀及配套試劑，通過(guò)化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法測(cè)定乙肝病毒e抗原（HBeAg）與乙肝病毒表面抗原 （HBsAg）。以實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定乙肝病毒DNA水平，采用儀器DA7600PCR擴(kuò)增儀、伯樂(lè)BIO-RAD 680酶標(biāo)儀等，試劑為乙肝病毒核酸擴(kuò)增（PCR）熒光定量檢測(cè)試劑盒 （S20040036），購(gòu)自河南華美生物工程，檢測(cè)下限40 IU／mL。檢測(cè)方法：取100 μL血清，加等量DNA濃縮液，充分振蕩混勻后上機(jī)離心10 min，離心速率為3 000 r／min，取沉淀物加入20 μL DNA提取液，振蕩混勻后離心數(shù)秒，80℃溫育10 min，同法上機(jī)離心5 min，備用；取PCR反應(yīng)管，加入預(yù)處理樣品上清液及質(zhì)控品、參考品，放入儀器樣品槽，經(jīng)循環(huán)變溫處理后，電腦自動(dòng)讀取熒光值，得出定量結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)與評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)患者的HBeAg、HBsAg陽(yáng)性率。指標(biāo)陽(yáng)性 （＋） 標(biāo)準(zhǔn)： HBeAg＞1.0 S／CO； HBsAg＞0.05 U／mL，反之為陰性 （-）。比較 HBeAg、HBsAg陰性與陽(yáng)性患者的HBV DNA陽(yáng)性率與平均拷貝數(shù)。HBV DNA≥1.0×103copies／mL為陽(yáng)性，指標(biāo)值越大，HBV復(fù)制越活躍，傳染性越強(qiáng)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 21.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率 （%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，多組比較行Krualal-Walis秩和檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV DNA水平與HBeAg的關(guān)系HBeAg陽(yáng)性患者HBV DNA陽(yáng)性率與平均拷貝數(shù)均高于HBeAg陰性患者 （P＜0.05）；HBeAg 陽(yáng)性與 HBV DNA 水平呈正相關(guān) （r＝ 1.024，P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 HBV DNA水平與HBeAg關(guān)系 ［n （%），±s］

表1 HBV DNA水平與HBeAg關(guān)系 ［n （%），±s］

組別 n H B V D N A （＋） 拷貝數(shù) （c o p i e s／m L）H B e A g （＋） 9 9 8 5 （8 5.8 6） （3.0 5±0.7 2） ×1 0 7 H B e A g （-） 5 1 3 2 （6 2.7 5） （5.1 4±0.6 3） ×1 0 3 χ 2／t 1 1.5 5 8 1 8.1 9 2 P＜0.0 5 ＜0.0 5

2.2 HBV DNA水平與HBsAg的關(guān)系HBsAg陽(yáng)性患者的HBV DNA陽(yáng)性率與HBsAg陰性患者相當(dāng) （P＞0.05），但平均拷貝數(shù)高于HBsAg陰性患者 （P＜0.05）； HBsAg陽(yáng)性與 HBV DNA水平呈正相關(guān) （r＝ 1.331，P＜0.05）。 見(jiàn)表 2。

表2 HBV DNA水平與HBsAg的關(guān)系 ［n （%），±s］

表2 HBV DNA水平與HBsAg的關(guān)系 ［n （%），±s］

組別 n H B V D N A （＋） 拷貝數(shù) （c o p i e s／m L）H B s A g （＋） 1 4 1 1 1 0 （7 8.0 1） （7.5 2±0.6 0） ×1 0 4 H B s A g （-） 9 7 （7 7.7 8） （4.8 9±0.6 7） ×1 0 3 χ 2 ／t 0.0 0 0 2 2.5 3 1 P＞0.0 5 ＜0.0 5

2.3 不同 HBeAg、HBsAg模式與 HBV DNA的關(guān)系HBeAg和HBsAg均陽(yáng)性患者HBV DNA陽(yáng)性率與平均拷貝數(shù)均高于HBeAg、 HBsAg 單一陽(yáng)性患者 （P＜0.05）。 HBeAg 陽(yáng)性患者HBV DNA陽(yáng)性率與平均拷貝數(shù)高于HBsAg陽(yáng)性患者 （P＜0.05）。 見(jiàn)表 3。

表3 不同HBeAg、HBsAg模式與HBV DNA的關(guān)系 ［n （%），±s］

表3 不同HBeAg、HBsAg模式與HBV DNA的關(guān)系 ［n （%），±s］

組別 n H B V D N A （＋） 拷貝數(shù) （c o p i e s／m L）H B e A g （＋）、 H B s A g （＋） 9 0 8 6 （9 5.5 6） （3.6 2±0.5 4） ×1 0 7 H B e A g （＋）、 H B s A g （-） 9 9 （6 6.6 7） （6.9 3±0.7 1） ×1 0 4 H B e A g （-）、 H B s A g （＋） 5 1 2 5 （4 9.0 2） （5.8 1±0.6 3） ×1 0 3 χ 2 ／t 7.1 7 5 1 2.3 1 6 P＜0.0 5 ＜0.0 5

3 討論

乙肝血清標(biāo)志物能夠反映HBV免疫反應(yīng)與病程轉(zhuǎn)化，是臨床診斷乙肝及療效評(píng)估最常用指標(biāo)，臨床檢測(cè)操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性理想，基本可以滿足臨床診斷需要［5］。但乙肝血清標(biāo)志物不能反映乙肝發(fā)生與進(jìn)展的過(guò)程，亦不能提示HBV復(fù)制情況，特別是對(duì)于需要準(zhǔn)確評(píng)估有無(wú)HBV感染及傳染程度的患者，常規(guī)乙肝血清標(biāo)志物檢測(cè)臨床應(yīng)用價(jià)值不大［6］，對(duì)此，深入分析HBV DNA與血清標(biāo)志物之間的關(guān)系十分必要。

HBV DNA與HBeAg陽(yáng)性均為HBV傳染性及復(fù)制程度較高的指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，HBeAg陽(yáng)性患者HBV DNA陽(yáng)性率與平均拷貝數(shù)高于HBeAg陰性患者，特別是合并HBsAg陽(yáng)性的患者，HBV DNA陽(yáng)性率與平均拷貝數(shù)更高，HBeAg陽(yáng)性與HBV DNA水平呈正相關(guān) （P＜0.05），HBeAg陽(yáng)性患者病毒傳染性更強(qiáng)，應(yīng)引起重視。但亦有關(guān)于HBeAg陽(yáng)性而HBV DNA呈陰性的報(bào)道［7］，可能為之前表達(dá)的HBeAg尚未完全降解，導(dǎo)致病毒DNA復(fù)制低水平時(shí)，HBeAg測(cè)定值仍較高［8］。HBsAg是已感染HBV的標(biāo)志，急性期診斷敏感度高，但在抗病毒治療期間無(wú)法以此單獨(dú)評(píng)估HBV DNA情況。本研究結(jié)果顯示，HBsAg陽(yáng)性患者HBV DNA陽(yáng)性率與HBsAg陰性患者相當(dāng)，但平均DNA拷貝數(shù)高于HBsAg陰性患者，HBsAg陽(yáng)性與HBV DNA水平呈正相關(guān) （P＜0.05）。本研究中，亦有 6例HBsAg陰性患者HBV DNA呈陽(yáng)性，可能為S基因變異造成抗原位點(diǎn)改變而引起HBsAg陰性的隱匿性乙肝［9］，尚有待進(jìn)一步證實(shí)，不過(guò)對(duì)于此類患者，聯(lián)合檢測(cè)HBV DNA的意義重大。

綜上所述，HBeAg與HBsAg能在一定程度上反映HBV DNA復(fù)制水平，特別是高水平HBeAg，與HBV DNA密切相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)對(duì)疾病診斷、傳染預(yù)防及預(yù)后評(píng)估有重要價(jià)值。