王璐璐，李雪鋒，周瑩，劉杰，孫哲

（1.國家獸用藥品工程研究中心河南洛陽 471000；2.洛陽中科基因檢測診斷中心有限公司河南洛陽 471000）

鴨關節(jié)炎又稱鴨關節(jié)炎綜合征，一般有多種病原菌，多數(shù)為飼養(yǎng)方式不當而引起多種病原菌感染，致病主要病原為鴨疫里默氏桿菌等[1]，其次還有大腸桿菌和鏈球菌等[2]。病鴨以關節(jié)腫大為主，其中以跗關節(jié)發(fā)病率最高，其次是膝關節(jié)。剖檢后在腫脹的關節(jié)囊內，積有大量炎性滲出物，滲出液混濁，混有纖維素性物質,有時混有血液，呈紅褐色，病程較長，呈滲出性壞死性病變，積蓄物呈灰黃色干酪樣。

鴨是自然好發(fā)淀粉樣變的動物[3]。目前，淀粉樣病變依然是鴨的一種常見疾病，該病受環(huán)境、飼養(yǎng)管理等影響較大，如大腸桿菌的內毒素引發(fā)慢性中毒、年齡、遺傳、鴨的適應性和行為、飼養(yǎng)管理、營養(yǎng)失調等[4]。臨床中常見的淀粉樣變性屬于繼發(fā)性淀粉樣病變，即淀粉樣變性是繼發(fā)于一些長期伴有組織破壞的慢性炎癥性疾病，如關節(jié)炎、骨髓炎等其他炎癥疾病。目前未見關于鴨疫里默氏桿菌繼發(fā)引起鴨淀粉樣病變的報道，但可共同引起鴨關節(jié)炎的大腸桿菌被普遍認為可引發(fā)鴨系統(tǒng)性淀粉樣病變[5-6]。

本試驗旨在通過對2019 年8 月河南省某鴨場病鴨經(jīng)過剖檢、細菌學和病理學的方法，對病鴨進行病理學診斷，并確定引起鴨發(fā)病的原因，為臨床治療提供幫助。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

河南省某鴨場送檢的4 只27～43 周齡病鴨，臨床表現(xiàn)為單側關節(jié)腫大、瘸腿癥狀，鴨場死亡鴨群中，瘸腿癥狀占60%。

1.2 主要試劑

LEAGENE（改良Highman 剛果紅法）試劑盒（貨號：DG0023）；胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA），由青島海博試劑有限公司提供；革蘭氏染色試劑，購自北京索萊寶科技有限公司。

1.3 病理學檢測

對病鴨進行頸靜脈放血處死解剖，病變部位組織（肝、脾、腎、關節(jié)、心、肺和輸卵管）用10%中性福爾馬林固定3～5d 后，按1cm×1cm×3mm 的大小對肝、脾、腎、關節(jié)、心、肺和輸卵管取材，在全自動脫水機中脫水浸蠟；然后使用包埋機進行包埋，待蠟塊凝固脫模后對其冷凍至合適硬度開始切片，切片厚度為3mm。對組織切片分別進行H.E.染色和剛果紅染色（改良Highman 剛果紅法）。

1.4 剛果紅染色

組織切片染色前恢復至室溫，置于染色架中，常規(guī)脫蠟至蒸餾水；將組織切片置于濕盒，滴加適量改良Highman 染色液，室溫染色20min；在組織切片上滴加或浸入分化液染色缸中，分化2s；自來水沖洗5min，洗去染色液及分化液；Mayer 蘇木素染色液襯染2min；自來水洗去未結合的蘇木素，置自來水中返藍2min；逐級常規(guī)無水乙醇脫水，二甲苯透明；中性樹膠封片劑封片。

1.5 細菌分離

無菌抽取關節(jié)腫大處滲出物，對其進行細菌接種培養(yǎng)（TSA+血清），37℃溫箱中培養(yǎng)24h；肝臟研磨后液體接種于SC 培養(yǎng)基，37℃，恒溫搖床200rpm 中培養(yǎng)24h，接著將SC 液體接種到HE培養(yǎng)基上于37℃溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h；觀察菌落形態(tài)，挑取單個菌落進行純化培養(yǎng)，純化培養(yǎng)后菌株進行革蘭氏染色鏡檢和常規(guī)細菌生化試驗。

2 結果

2.1 解剖學觀察

解剖學檢測：肝臟腫大，表面光滑，質地堅硬，存在明顯可見黃綠色病變區(qū)（圖1a）；脾臟表面有明顯不規(guī)則灰白區(qū)（圖1b）；腿部關節(jié)腫大，有干酪樣滲出物（圖1c）；腹腔積液；皮下膠凍樣附著物；胸氣囊和腹氣囊有干酪樣滲出物。

2.2 細菌分離結果

關節(jié)液接種的TSA+血清培養(yǎng)基中(圖2a)，生長出白色奶油狀大菌落，對該平板上細菌進行革蘭氏染色，可見細菌為革蘭氏陰性、短桿狀、兩極著染（圖2c），對分離到的細菌進行基因測序后，鑒定為單一的鴨疫里默氏桿菌。在肝臟研磨液接種的HE 培養(yǎng)基中，生長出黃色菌落（圖2b），觸酶試驗呈陽性，氧化酶試驗呈陰性，對該平板上菌落進行革蘭氏染色試驗（圖2d），可見細菌為粗短、兩端鈍圓的小桿菌，多單個散在，個別成雙排列，無芽孢，革蘭氏陰性。

2.3 組織學觀察

觀察發(fā)現(xiàn)，淀粉樣物質在病鴨肝臟內沉積最多，其次為脾臟和腎臟，其他組織未見淀粉樣變。肝臟：肝竇變窄，甚至消失；不可見明顯的肝細胞索，且均質紅染物質沉著于肝細胞索。剛果紅染色后發(fā)現(xiàn)，磚紅色物質呈條索狀取代了大部分肝細胞索（圖1d）。脾臟：脾紅髓內有大量呈團塊狀或條索狀磚紅色物質沉著于脾髓細胞和淋巴細胞之間，部分淋巴細胞發(fā)生萎縮（圖1e）。脾紅髓髓竇內出血、大量異嗜性粒細胞浸潤（圖1h）。關節(jié)：關節(jié)內部血管周圍有部分顆粒狀磚紅色物質沉著（圖1f），關節(jié)皮膚內大量壞死崩解的物質并大量異嗜性粒細胞浸潤（圖1i），另外，部分病鴨腎小管中發(fā)現(xiàn)磚紅色物質，說明淀粉樣變性病變在腎臟中未呈現(xiàn)較嚴重的病理變化，對腎臟的損傷較小。

3 討論

引起鴨關節(jié)炎的病原菌有許多，其中包括鴨疫里默氏桿菌、葡萄球菌和大腸桿菌等。該病原引起的鴨里氏桿菌病根據(jù)病程長短可分為最急性型、急性型、亞急性型或慢性型，亞急性型或慢性型一般感染4～7 周齡雛鴨，能長期存活，但發(fā)育不良，消瘦；病鴨除表現(xiàn)上述癥狀外出現(xiàn)頭頸歪斜，轉圈或倒退，病鴨跛行。因此，送檢鴨雖為27 周齡，可能是鴨疫里默氏桿菌在病鴨中呈慢性經(jīng)過。

淀粉樣變性一般認為其是蛋白質代謝障礙的一種產物，與全身免疫反應有關，是有網(wǎng)狀內皮細胞所產生，大致分為3 種：AA 淀粉樣變性、AL 淀粉樣變性和Aβ 2M 淀粉樣變性。國內有大量關于鴨全身性淀粉樣變性的報道主要為AA 淀粉樣變性，在慢性炎癥反應過程中，血清中會出現(xiàn)一種大分子量的α 球蛋白，稱為血清淀粉樣蛋白（serumamyloid A，SAA），它是AA 的前體。循環(huán)血液中大分子的SAA 可能經(jīng)巨噬細胞的溶酶體酶的水解而生成AA沉著于組織中，形成淀粉樣物質沉著于組織中。其中，以凌育燊[8]團隊關于鴨系統(tǒng)性淀粉樣變研究的時間最早，病鴨全身病理變化較全面，他們認為鴨系統(tǒng)性淀粉樣變病屬于繼發(fā)性疾病，細菌及其內毒素能成功誘發(fā)該病。另外，曹洪志等[9]認為鴨系統(tǒng)性淀粉樣變的發(fā)生與大腸桿菌的毒素引發(fā)慢性中毒、年齡、遺傳、鴨的適應性和行為、飼養(yǎng)管理、營養(yǎng)失調有關。

圖2 細菌培養(yǎng)

從病鴨的外觀，最明顯的觀察到病鴨呈跛行狀態(tài)，關節(jié)腫大；肛門周圍糞便污染；進行病理剖檢后，觀察到肝臟腫大，表面光滑，質地堅硬，可見較明顯的黃綠色病變區(qū)。關節(jié)滲出物接種培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)為較單一的鴨疫里默氏桿菌病原感染，另外在病理切片中觀察到多器官的淀粉樣變性，對肝臟病變區(qū)進行細菌分離，得到引起鴨全身性淀粉樣病變大腸桿菌的菌落[7]。經(jīng)過對鴨淀粉樣病變的對比，本批病鴨多以鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌混合感染引起的關節(jié)炎為主要發(fā)病原因，繼發(fā)的大腸桿菌感染引起的鴨系統(tǒng)性淀粉樣變性為并發(fā)癥狀。

4 防治措施

鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌引起鴨場的感染，首先需要加強鴨場飼養(yǎng)管理，經(jīng)常消毒通風，勤換墊料，防潮防濕，潮濕的環(huán)境極易滋生細菌；另外，采用“全進全出”的方法，預防傳染病的發(fā)生。其次進行藥物預防，可在輕微感染和癥狀較輕的鴨群中使用廣譜抗菌藥物如卡那霉素、土霉素等與飼料或飲用水混勻一起飼喂。總之，要樹立正確的飼養(yǎng)理念，不斷加強鴨舍的日常管理工作。