程學(xué)遠(yuǎn) 覃慶洪 黃 忠

(1 廣西北海市人民醫(yī)院普通外科，北海市 536000，電子郵箱：118062593@qq.com；2 廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺外科，南寧市 530021)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，具有高侵襲性、易轉(zhuǎn)移、易復(fù)發(fā)、預(yù)后差等特點(diǎn)。近年來(lái)乳腺癌患者呈年輕化趨勢(shì)，死亡率也逐漸升高[1]，因此，探尋早期診斷標(biāo)記物對(duì)乳腺癌患者的診治具有重要的臨床價(jià)值。晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(receptor for advanced glycation end-products，RAGE)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種多配體的跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)受體[2]，其可以通過激活細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)通路，參與多種疾病的病理過程[3]。RAGE配體的多樣性決定了其作用機(jī)制的復(fù)雜性，其中可溶性RAGE(soluble RAGE，sRAGE)是RAGE的抑制性配體[4]。研究表明，外周血sRAGE水平下降，可增加腫瘤發(fā)生的概率[5]。然而，目前國(guó)內(nèi)關(guān)于血清sRAGE表達(dá)水平與乳腺癌相關(guān)性的研究報(bào)道較少。因此，本研究分析乳腺癌患者血清sRAGE水平及其與臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年3月至2018年4月北海市人民醫(yī)院收治的80例乳腺癌患者為研究對(duì)象(乳腺癌組)，均為女性，年齡30～68(47.5±8.1)歲，絕經(jīng)42例(52.50%)，病理類型為浸潤(rùn)型導(dǎo)管癌43例，浸潤(rùn)型小葉癌37例。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診，均為初發(fā)病例，且采集樣本前未接受臨床治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并急性感染性疾病者，糖尿病者，神經(jīng)系統(tǒng)疾病者及其他惡性腫瘤者。另選取同期于該院進(jìn)行健康體檢的80例健康者為對(duì)照組，均為女性，年齡29～67(46.6±7.4)歲，絕經(jīng)44例(55.00%)。納入標(biāo)準(zhǔn)：均為體檢健康女性，且年齡不超過70歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：乳腺增生者及合并其他疾病者。兩組的年齡及絕經(jīng)情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)審批通過，所有研究對(duì)象均對(duì)本研究知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器和試劑：人sRAGE檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司(批號(hào)：JL19606-96T)，Multiskan FC酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)賽默飛公司(批號(hào)：5119050)，兔抗人雌激素受體和增殖細(xì)胞核抗原腫瘤蛋白單克隆抗體及鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物連結(jié)法檢測(cè)試劑盒購(gòu)自福州邁新生物公司(批號(hào)：Kit-0012，MAB-0145，Kit-0105M)。

1.2.2 血清sRAGE檢測(cè)：采集兩組研究對(duì)象晨起空腹肘靜脈血3 mL，24 h內(nèi)在4℃下3 000 r/min離心10 min，取上層血清，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照人sRAGE檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作：(1)制備標(biāo)準(zhǔn)品(購(gòu)自北京邦定生物醫(yī)學(xué)公司)和待測(cè)血清樣品：將450 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)品分別制備成450 μg/L、300 μg/L、200 μg/L、100 μg/L、50 μg/L、25 μg/L和12.5 μg/L系列標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)樣品，并將待測(cè)血清樣品用蒸餾水稀釋5倍。(2)設(shè)置空白孔1孔、各濃度標(biāo)準(zhǔn)品孔各1孔和待測(cè)血清樣品孔1孔，進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)。采用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔450 nm波長(zhǎng)處的吸光度(A)值，然后應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制軟件Curve Expert 1.4版本(艾美捷科技有限公司)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、A值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，導(dǎo)出sRAGE濃度與A值的擬合方程，根據(jù)擬合方程計(jì)算出待測(cè)血清樣品的濃度，再乘以樣品的稀釋倍數(shù)即為待測(cè)樣品的實(shí)際sRAGE濃度。

1.2.3 其他指標(biāo)的檢測(cè)：雌激素及孕激素受體、增殖細(xì)胞核抗原的檢測(cè)均按照試劑盒說(shuō)明書操作。

1.2.4 臨床資料的收集：收集研究對(duì)象的臨床資料，包括年齡、絕經(jīng)情況，以及乳腺癌患者的腫瘤直徑、病理類型、原發(fā)腫瘤-區(qū)域淋巴結(jié)-遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(tumor-node-metastasis, TNM)分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及相關(guān)檢驗(yàn)結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以(x±s)表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分比表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；采用受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線評(píng)價(jià)血清sRAGE對(duì)乳腺癌的診斷效能。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血清sRAGE水平的比較 乳腺癌組患者血清sRAGE水平為(621.34±183.15)μg/L，低于對(duì)照組的(864.92±225.37)μg/L(t=7.502，P<0.001)。

2.2 不同臨床病理特征乳腺癌患者血清sRAGE水平比較 TNMⅠ～Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清sRAGE水平分別高于TNM Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(均P<0.05)，而不同年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、病理類型、腫瘤直徑及腫瘤組織雌激素受體表達(dá)情況、孕激素受體表達(dá)情況、增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)情況的患者之間血清sRAGE表達(dá)水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，見表1。

表1 不同臨床病理特征乳腺癌患者血清sRAGE水平比較(x±s， μg/L)

2.3 ROC曲線分析 血清sRAGE水平診斷乳腺癌的ROC曲線下面積為0.849(P=0.021，95%CI：0.611～0.974)，敏感性為91.85%，特異性為77.41%，見圖1。

圖1 血清sRAGE水平診斷乳腺癌的ROC曲線

3 討 論

乳腺癌為女性最常見的惡性腫瘤之一，約占各種惡性腫瘤的10%，其發(fā)病率呈逐年升高，且發(fā)病年齡呈年輕化發(fā)展趨勢(shì)[6]。研究顯示，全世界每年約有50萬(wàn)患者死于乳腺癌[7]。雖然早期乳腺癌患者經(jīng)手術(shù)治療聯(lián)合放化療的治愈率較高[8]，但臨床上對(duì)于晚期乳腺癌尚缺乏有效手段。因此，探尋早期診斷標(biāo)記物對(duì)乳腺癌的治療的診治具有重要的臨床價(jià)值。

RAGE是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種多配體膜表面信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，其可激活細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)通路[9]。已有研究表明，RAGE與炎癥反應(yīng)、腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移、神經(jīng)血管再生及糖尿病并發(fā)癥等多種病理過程有關(guān)[10]。sRAGE是一種RAGE的抑制性配體，主要是由RAGE mRNA選擇性剪切或由細(xì)胞膜上的RAGE經(jīng)膜表面蛋白酶裂解所產(chǎn)生，其可競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合RAGE表位，阻斷RAGE的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而影響RAGE的相關(guān)功能[11-12]。早期的研究顯示，外周血sRAGE水平下降，可增加肺癌、胰腺癌等腫瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[13]，這可能是由于sRAGE水平下降引起sRAGE-RAGE信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的負(fù)反饋機(jī)制失調(diào)，從而促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生發(fā)展[14]。最近國(guó)外有研究顯示，乳腺癌患者血清sRAGE濃度低于健康人群[15]。然而，目前國(guó)內(nèi)有關(guān)血清sRAGE表達(dá)水平與乳腺癌相關(guān)性的研究報(bào)道較少。

本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者血清sRAGE表達(dá)水平低于健康體檢者(P<0.05)，這表明乳腺癌患者血清中sRAGE 呈低表達(dá)，其或可成為診斷乳腺癌的一種新型生物標(biāo)志物。進(jìn)一步采用ROC曲線評(píng)價(jià)血清sRAGE在乳腺癌中的診斷效能，曲線下面積為0.849(P<0.05)，診斷敏感性為91.85%，特異性為77.41%，提示血清sRAGE對(duì)乳腺癌具有較好的診斷價(jià)值。此外，乳腺癌患者血清sRAGE表達(dá)水平與TNM分期和淋巴轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)(P<0.05)，即分期越高、出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移者，血清sRAGE表達(dá)水平越低，這提示血清sRAGE可能參與乳腺癌的發(fā)生、侵襲及轉(zhuǎn)移，臨床監(jiān)測(cè)乳腺癌患者血清sRAGE水平可能對(duì)評(píng)估患者病情發(fā)展及預(yù)后有一定意義。此外，不同年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、病理類型、腫瘤直徑、雌激素受體表達(dá)情況、孕激素受體表達(dá)情況及增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)情況的患者血清sRAGE表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，這提示血清sRAGE的表達(dá)不易受個(gè)體因素影響[16]。

綜上所述，sRAGE在乳腺癌患者血清中呈低表達(dá)，其或與乳腺癌的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)，并有可能成為乳腺癌臨床診斷的生物學(xué)標(biāo)志物之一。