丁睿

【中圖分類號(hào)】R363.2+1?????? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B

【文章編號(hào)】2095-6851（2020）03-030-01

流行性感冒病毒（簡(jiǎn)稱流感病毒）有甲、乙、丙三型，可引起人和動(dòng)物流行性感冒（簡(jiǎn)稱流感）。發(fā)生在1918-1919年的流感世界大流行，無(wú)疑是最著名的，在這次事件中，全球被感染的人數(shù)達(dá)到50%，死亡人數(shù)甚至超過了第一次世界大戰(zhàn)死亡總?cè)藬?shù)。我國(guó)也深受其害，如2009年的H1N1甲型流感，以及2013年的H7N9禽流感，都嚴(yán)重威脅人和動(dòng)物的健康乃至生命，對(duì)社會(huì)的穩(wěn)定發(fā)展造成惡劣影響。因此，建立精確、高效的流感病毒檢測(cè)方法，對(duì)于臨床診斷與治療患者以及遏制疾病的進(jìn)一步擴(kuò)散，都有重要意義。

一、流感病毒的概述

流感病毒屬正粘病毒科，結(jié)構(gòu)如下：

（一）核心。病毒核酸為分節(jié)段的單負(fù)鏈RNA。和3個(gè)與核算復(fù)制轉(zhuǎn)錄有關(guān)RNA的RNA多聚酶蛋白PA、PB1、PB2和結(jié)合每個(gè)RNA片段的NP（有核蛋白）。NP與RNA合稱RNP（核糖核蛋白），RNP抗原性穩(wěn)定，有著型特異性。

（二）包膜。流感病毒包膜有兩層結(jié)構(gòu)。內(nèi)層為病毒基因編碼的基質(zhì)蛋白M1，能增加包膜的硬度和厚度，M蛋白也有著型特異性。外層則是宿主細(xì)胞的脂質(zhì)雙層膜，甲型與乙型流感病毒包膜上鑲嵌有，由病毒基因編碼的糖白刺突，即NA（神經(jīng)氨酸酶）與HA（血凝素），它們?cè)诹鞲胁《緛喰蛣澐种衅鸬街匾罁?jù)。

根據(jù)RNP和M蛋白抗原性的不同流感病毒分為甲、乙、丙三型，甲型又根據(jù)HA和NA抗原性的不同劃分為若干亞型，乙型、丙型流感病毒尚未發(fā)現(xiàn)亞型。HA和NA易發(fā)生變異，尤其是HA。一旦導(dǎo)致新亞型的出現(xiàn)，極易引起世界性的流感暴發(fā)流行。近一個(gè)世紀(jì)，甲型流感病毒已經(jīng)歷過數(shù)次重大變異。

流感病毒不耐熱，100℃ 1分鐘或56℃ 30分鐘可滅活。對(duì)常用消毒劑敏感，如過氧乙酸、含氯消毒劑、1%甲醛等。對(duì)紫外線敏感。耐低溫和干燥。

甲型流感病毒傳播迅速、威力兇猛，容易出現(xiàn)抗原變異，多次世界性大流行都是它所引起;乙型流感病毒抗原變異很慢，呈暴發(fā)或小流行;而丙型流感病毒只會(huì)讓人類上呼吸道出現(xiàn)輕度感染，造成流行的幾率很小，危害較弱。因此以下提及的檢測(cè)方法主要是針對(duì)甲型、乙型流感病毒。

二、流感病毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

（一）免疫學(xué)和血清學(xué)試驗(yàn)。

膠體金法是一種體外免疫層析試驗(yàn)，用于定性檢測(cè)鼻咽拭子樣本中的甲、乙型流感病毒核蛋白抗原，能對(duì)甲、乙型流感病毒感染進(jìn)行快速地輔助鑒別診斷。最大優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，出結(jié)果快。而且鼻咽拭子的采集過程簡(jiǎn)單無(wú)痛苦，病人依從性好。特異性良好，但是靈敏性不佳，假陰性率將近50%，這與膠體金方法本身的敏感性較低和鼻咽拭子樣本病毒含量不穩(wěn)定有關(guān)。觀察結(jié)果時(shí)須注意，若對(duì)照線不變色或根本不出現(xiàn)，無(wú)論標(biāo)本線是否出現(xiàn)，該次試驗(yàn)都無(wú)效，須重新檢測(cè)。對(duì)甲或乙型流感病毒陽(yáng)性標(biāo)本，當(dāng)對(duì)照線正常，只要標(biāo)本線出現(xiàn)，即使顏色很淺，結(jié)果也判為陽(yáng)性。結(jié)果為甲型流感病毒蛋白抗原陽(yáng)性時(shí)，并不能對(duì)甲型流感病毒亞型做出特異性鑒別診斷，也不能排除存在其他共感染致病原的可能。

也可以用酶免疫測(cè)定法或是免疫熒光法，從病人呼吸道脫落細(xì)胞、分泌物中直接檢測(cè)抗原。

血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，包含株特異與亞型的血凝中和試驗(yàn)與抑制試驗(yàn)，抗原特異確定的酶免疫試驗(yàn)和型特異的補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。在流感病毒血清學(xué)診斷中，最常用到的是血凝抑制試驗(yàn)。

（二）核酸檢測(cè)。

近些年，分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用越來(lái)越廣，其顯著優(yōu)勢(shì)是快速、敏感，在呼吸道疾病暴發(fā)流行的病因調(diào)查、病毒基因進(jìn)化研究、疫苗株基因序列和新變異株基因序列的差異比較等方面都發(fā)揮了良好作用。

1.RT-PCR檢測(cè)病毒核酸。

RT-PCR是當(dāng)前鑒定流感病毒分型的常用方法之一，此方法敏感度高、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)便快捷，能夠在幾小時(shí)內(nèi)將標(biāo)本中微量RNA檢出，打破了傳統(tǒng)流感病毒檢測(cè)方法的一些局限性。

2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)病毒核酸。

這一項(xiàng)技術(shù)，就是將熒光基團(tuán)加入到PCR反應(yīng)體系中，借助熒光信號(hào)積累對(duì)整個(gè)PCR進(jìn)程做實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，再利用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析未知模板的方法。這一方法，使傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限得以良好解決，每一輪循環(huán)都檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并在電腦軟件中記錄，通過計(jì)算所有樣本Ct值得，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線得到定量結(jié)果。

3.NASBA檢測(cè)病毒核酸。

NASBA全稱nucleic acid sequence-based amplification，即依賴核酸序列的擴(kuò)增技術(shù)，是一種擴(kuò)增RNA的新技術(shù)。該技術(shù)，具有操作簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、靈敏度高、不易被污染等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于病毒、細(xì)菌、霉菌、寄生蟲和細(xì)胞因子等的檢測(cè)，并已成為診斷禽流感病毒的國(guó)家診斷標(biāo)準(zhǔn)方法之一。

（三）病毒分離。

病毒分離是確定流感感染的金標(biāo)準(zhǔn)，有雞胚和細(xì)胞培養(yǎng)兩種方法。雞胚一般采用9-11齡雞胚，可進(jìn)行尿囊腔或羊膜腔接種，也可同時(shí)接種雙腔。細(xì)胞培養(yǎng)一般采用MDCK細(xì)胞（狗腎傳代細(xì)胞）。局限性在于病毒分離對(duì)儀器設(shè)備和技術(shù)的要求較嚴(yán)格，且耗費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)。

三、如何預(yù)防流感

（一）疫苗接種。

流感疫苗接種是世界公認(rèn)的預(yù)防流感的有效方法，不過疫苗必須與當(dāng)前流行株的型別基本相同。

（二）加強(qiáng)自身的防護(hù)意識(shí)。

自我保護(hù)在預(yù)防流感中是不可忽視的環(huán)節(jié)。首先患者是主要的傳染源，與流感病人或疑似病人盡量不要接觸，無(wú)法避免時(shí)注意戴口罩，并及時(shí)進(jìn)行皮膚消毒。不接觸病禽和病畜。健康飲食，娛樂不要過度放縱，房間要經(jīng)常通風(fēng)換氣，保持清潔。平時(shí)不要忽視鍛煉身體，強(qiáng)健的體魄對(duì)各種疾病的抵抗力都會(huì)更強(qiáng)。流感流行季節(jié)要根據(jù)天氣變化增減衣物。盡量避免在人群聚集處久留，更不要帶兒童、老年人、身體衰弱者去擁擠不衛(wèi)生的公共場(chǎng)所和有疑似流感患者存在的封閉環(huán)境中。通過醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的健康教育宣傳、查閱專業(yè)書籍、上網(wǎng)搜索等方式多了解一些流感病毒相關(guān)知識(shí)，以便在日常生活中更好地應(yīng)對(duì)它。

（三）養(yǎng)成健康衛(wèi)生的習(xí)慣。

在日常生活中應(yīng)注意如下方面：一，避免室內(nèi)過分擁擠閉塞，做好通風(fēng)換氣。經(jīng)常進(jìn)行室內(nèi)清潔，及時(shí)處理生活垃圾，盡可能讓生活環(huán)境空氣流通、清潔干凈。二，講究個(gè)人衛(wèi)生。勤洗手，盡量使用科學(xué)的“七步洗手法”?？人浴⒋驀娞绲臅r(shí)候，及時(shí)用手帕或紙巾將口鼻處掩住。毛巾等洗浴用品用完及時(shí)清洗，經(jīng)常晾曬，注意更換。三，在流感流行季節(jié)盡量少去或不去擁擠的公共場(chǎng)所，必要時(shí)可戴口罩出門，口罩也應(yīng)勤換。

綜上所述，流感可怕也不太可怕，積極防控比治療更重要，與時(shí)俱進(jìn)不斷發(fā)展的檢測(cè)技術(shù)和醫(yī)療水平也為我們應(yīng)對(duì)流感提供堅(jiān)實(shí)后盾。