王智超，吳雨瀟，王振興，劉麗耘，張 秀，李 光，王 飛＊＊

（1. 成都中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院 成都 610075；2. 成都中醫(yī)藥大學(xué)國際教育學(xué)院 成都 610075；3. 曲靖市中醫(yī)醫(yī)院 曲靖 655000）

中醫(yī)證候動(dòng)物模型是以中醫(yī)理論體系為指導(dǎo)，對(duì)疾病的病因和病理等重要特征進(jìn)行模擬復(fù)制，同時(shí)具備西醫(yī)疾病和中醫(yī)證候雙重特征的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物[1]，其關(guān)鍵在動(dòng)物證候與人體證候的相似性[2]。證候是疾病過程中某一階段可被觀察到外在表現(xiàn)的概括，是不斷處于動(dòng)態(tài)變化中的表征集合。但是，從中醫(yī)病證結(jié)合動(dòng)物模型發(fā)展歷史來看[3]，研究大多忽視了“疾病過程中證候演變規(guī)律”這一關(guān)鍵環(huán)節(jié)，嚴(yán)重阻礙了對(duì)疾病證候本質(zhì)的研究及臨床應(yīng)用推廣。

慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）是以持續(xù)氣流受限為特征的肺系疾病，與氣道和肺組織對(duì)煙草煙霧等有害氣體或有害顆粒的異常慢性炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，屬于“肺脹”的范疇[4]。目前，以辨證論治為基礎(chǔ)的COPD 病證結(jié)合模型存在諸多問題，嚴(yán)重制約著中醫(yī)藥防治COPD 的基礎(chǔ)研究。例如，藥物模擬的“證”與人體證候是否一致，如地塞米松磷酸鈉造陰虛痰飲證[5]、腺嘌呤加SO2誘發(fā)腎不納氣證[6]；復(fù)合因素相兼不利于模型制備的穩(wěn)定性、重復(fù)性，亦忽視了動(dòng)物本身體質(zhì)因素等問題，如多個(gè)低溫因素疊加造COPD 寒飲蘊(yùn)肺證[7]；證候判定中缺乏客觀定量、定性化的證候宏觀表征分析用以證明大鼠COPD 模型的證候歸屬。目前，國內(nèi)外廣泛使用脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）聯(lián)合煙熏制備COPD 疾病動(dòng)物模型[8-9]，但此種動(dòng)物模型缺乏明確的宏觀表征分析，中醫(yī)證候歸屬不明。

因此，本實(shí)驗(yàn)采用COPD 經(jīng)典造模方法，以“因、脈、證、治”研究思路為出發(fā)點(diǎn)，同時(shí)引入宏觀表征和時(shí)間概念，對(duì)大鼠宏觀表征定量分析并分析COPD 動(dòng)物模型的中醫(yī)證候演變規(guī)律，從而完整地挖掘疾病發(fā)展過程“證”的動(dòng)態(tài)變化，找到證候變化的時(shí)間窗[10]，為慢性阻塞性肺疾病的中醫(yī)證候演變規(guī)律研究提供一定的參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象

SPF 級(jí)雄性SD 大鼠30 只，體重（150±10）g，購自于成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號(hào)：SCXK(川)2015-030。飼養(yǎng)于成都中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)臟腑病證實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房，室內(nèi)12 h/12 h 光照/避光循環(huán)飼養(yǎng)，溫度為（22±1）℃，房內(nèi)相對(duì)濕度約40%，同時(shí)給予標(biāo)準(zhǔn)飼料和飲用水，動(dòng)物福利按照國際相關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物法規(guī)實(shí)施。

1.2 試劑

脂多糖購自于美國Sigma 公司，香煙購自于四川中煙公司（每支香煙焦油含量14mg、Nicotine 含量1.1 mg、CO含量14 mg）。

1.3 儀器

自制煙熏箱（40*60*20 cm3），改良曠場(chǎng)籠具（70*70*20 cm3，底部黑色方格7*7 cm2），單反相機(jī)購自于日本Canon 公司，臺(tái)式機(jī)購自于美國HP 公司，抓力測(cè)量儀器、WMT-100 Morris 水迷宮視頻分析系統(tǒng)購自于成都泰盟公司，全自動(dòng)血?dú)夥治鰞x購自于美國Medica公司，Eclipse Ci顯微鏡購自于日本Nikon公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組及造模

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 天后，通過水迷宮游泳剔除體力不達(dá)標(biāo)大鼠后，按隨機(jī)數(shù)表法[11]將大鼠分為空白組和模型組。采用LPS 聯(lián)合煙熏法經(jīng)典造模方法復(fù)制COPD 模型，造模第1 天、第15 天，氣道滴注LPS 100 ul（1 μg/μl），滴注日不吸煙；空白組給予等體積生理鹽水氣道滴注。將大鼠放入自制煙熏箱內(nèi)進(jìn)行煙熏，每次持續(xù)1 小時(shí)、每天兩次，共計(jì)30 天；空白組不吸煙。造模結(jié)束，采集各時(shí)段宏觀表征后麻醉大鼠，行腹主動(dòng)脈取血進(jìn)行血?dú)夥治?，隨后右股動(dòng)脈放血處死大鼠。

2.2 一般情況

試驗(yàn)期間，重點(diǎn)觀察大鼠活動(dòng)情況、對(duì)外界反應(yīng)性、呼吸狀況、精神狀態(tài)、毛色毛質(zhì)、大小便、爪色舌色、進(jìn)食量、飲水量、體重等指標(biāo)，記錄大鼠死亡情況。

2.3 HE染色

取大鼠左側(cè)肺臟中葉，經(jīng)多聚甲醛固定48 h 后，石蠟包埋，制片（4μm 厚）；經(jīng)HE 染色后，置于顯微鏡下觀察病理改變。

2.4 呼吸頻率

安靜狀態(tài)下，將大鼠輕柔抓起，使用相機(jī)對(duì)大鼠胸腹面進(jìn)行拍攝（1 min）。導(dǎo)入電腦后，慢速回放計(jì)數(shù)呼吸頻率。每2 周拍攝一次，共計(jì)3 次?；顒?dòng)后呼吸頻率在游泳后進(jìn)行，余步驟同上。

2.5 抓力測(cè)定

大鼠置于抓力板上，待大鼠穩(wěn)定抓住抓力板時(shí)及時(shí)加力后拉，測(cè)取抓力，測(cè)量3次取平均值。

2.6 曠場(chǎng)試驗(yàn)

將大鼠置于安靜、暗光的測(cè)試房內(nèi)10 min 后，將大鼠放置于曠場(chǎng)固定一處，遙控打開相機(jī)記錄數(shù)據(jù)，導(dǎo)入電腦后計(jì)數(shù)大鼠水平移動(dòng)及直立次數(shù)。

2.7 負(fù)重力竭游泳實(shí)驗(yàn)

室內(nèi)暗光，運(yùn)用Morris 水迷宮系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。按大鼠體重10%將鉛塊系于大鼠腹部后，從固定位置放入水池，直至全身力竭（鼻頭沉入水下持續(xù)10 s）后取出。每2周實(shí)驗(yàn)一次，共計(jì)3次。

2.8 舌象、爪色、腹部毛色

采用標(biāo)準(zhǔn)白色背景布裁剪后制作攝影棚，光源采用佳能閃光燈（600EX II-RT）全功率輸出引閃；使用灰卡設(shè)置白平衡后，數(shù)碼相機(jī)調(diào)至M 檔，自動(dòng)對(duì)焦，以F2.8、1/100s、ISO 100 條件采集圖像，導(dǎo)入電腦后做色彩校正[12]處理。

2.8.1 舌象

用彎鑷將其舌頭輕微夾出，露出舌根拍照。導(dǎo)入電腦后，使用Photoshop CS6 打開圖片，按照實(shí)際像素放大圖片后，選取舌面全部圖像，記錄直方圖中紅色值（R）、綠色值（G）、藍(lán)色值（B），計(jì)算出r 值（r =R/(R + G + B)，代表其紅色程度。

2.8.2 爪色

用彎鑷將其右側(cè)足底輕微夾緊拍照，余步驟同2.8.1。

2.8.3 腹部毛色

充分暴露大鼠腹面后拍照，余步驟同2.8.1。選取腹部自肋弓下緣至雙足部圖像，記錄直方圖中亮度值（L），代表其毛色亮度。

2.9 舌質(zhì)和舌下絡(luò)脈評(píng)分

參考尹軍祥等血瘀證舌象評(píng)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[13]，舌質(zhì)：紅潤記0 分、紅潤略暗記1 分、紫暗記2 分、紫黑記3 分；舌下絡(luò)脈：色紅記0 分、約1/3 舌體長記1 分、<1/2 長記2分、> 1/2 記3 分、> 2/3 記4 分。將圖片按實(shí)際像素裁剪后分別交由2位實(shí)驗(yàn)員盲法打分，取平均值。

圖1 大鼠肺組織HE染色（×200）

2.10 統(tǒng)計(jì)方法

3 結(jié)果

3.1 一般情況

空白組：大鼠動(dòng)作敏捷、對(duì)外界刺激做出敏感反應(yīng)、無明顯扎堆現(xiàn)象；呼吸平穩(wěn)、無氣促；精神狀態(tài)良好、皮毛光澤白亮、無脫毛；便質(zhì)柔軟成型、小便清亮且量適中；進(jìn)食量適中。

模型組：第一次滴注聯(lián)合煙熏后，大鼠反應(yīng)性降低、抵抗抓力下降、出現(xiàn)扎推現(xiàn)象；呼吸氣促、精神變差，皮毛無光、出現(xiàn)少量脫毛；大便偏干、小便色黃；食量減少。第二次滴注聯(lián)合煙熏結(jié)束后，大鼠出現(xiàn)明顯遲鈍、對(duì)外界刺激無明顯回應(yīng)，扎堆現(xiàn)象明顯，對(duì)灌胃抓取等無抵抗或抵抗較弱；呼吸氣促、鼻翼煽動(dòng)、口腔內(nèi)分泌物明顯增多；皮毛色暗并出現(xiàn)大量脫落；便干量少、小便量少色黃；進(jìn)食量下降，飲水量下降。并隨著造模完成后觀察時(shí)間的延長，上述體征逐漸加重。

3.2 HE染色

空白組：肺泡結(jié)構(gòu)正常，支氣管粘膜完整，纖毛排列整齊，炎性浸潤少，見圖1（A）。模型組：肺組織中肺泡壁廣泛可見增厚，并伴有炎性細(xì)胞浸潤，支氣管腔內(nèi)可見較多壞死脫落的支氣管上皮細(xì)胞，部分支氣管上皮細(xì)胞水腫變性，細(xì)胞腫脹，胞質(zhì)呈空泡狀，支氣管壁周圍可見大量炎性細(xì)胞浸潤，見圖1（B）。

表1 大鼠血?dú)夥治霰容^（±s，n=15）

表1 大鼠血?dú)夥治霰容^（±s，n=15）

注：與空白組相比，*P＜0.01，**P＜0.001（以下圖、表標(biāo)注均同）

組別空白組模型組pH值7.40±0.02 7.36±0.04 PaO2 97.13±3.79 87.13±6.69**PaCO2 41.36±6.72 49.50±2.24*

3.3 血?dú)夥治?/h3>

與空白組比較，模型組動(dòng)脈血pH 值、氧分壓（PaO2）均顯著降低（P<0.001），二氧化碳分壓（PaCO2）升高（P<0.01）。

3.4 大鼠體表宏觀表征

3.4.1 體質(zhì)量

脾胃虧虛則運(yùn)化無力，氣虛運(yùn)化失常則可見動(dòng)物飲食減少、體重下降，出現(xiàn)消瘦的表征。本次試驗(yàn)中，空白組體重逐步穩(wěn)定增長；模型組體重增長幅度緩慢，且平均體重較空白組偏低，在第一次LPS 滴注（15天）后及造模完成（30天）后模型組體重較同時(shí)段空白組明顯降低，見圖2（A），P < 0.01，提示模型組大鼠出現(xiàn)了消瘦表征。

3.4.2 呼吸頻率

COPD 穩(wěn)定期患者常以喘息、氣短、呼吸頻率加快等癥狀為主，肺為氣之主，腎為氣之根，肺腎虧虛則大鼠可見呼吸頻率加快、活動(dòng)后喘息氣緊等表征?？瞻捉M：大鼠呼吸頻率正常且平均，活動(dòng)后呼吸均勻。模型組：呼吸頻率明顯加快，活動(dòng)后呼吸頻率較空白組活動(dòng)后呼吸變淺且加快（P<0.001），且與上一次呼吸頻率相比，呼吸頻率上升亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見圖2（B）、表2，P < 0.05，表明模型組大鼠出現(xiàn)了喘息氣促等表征，且隨著觀察時(shí)間延長與上一次呼吸頻率相比出現(xiàn)了明顯的加快（見表2，P<0.01）。

3.4.3 抓力測(cè)定

乏力是COPD 后期常見癥狀，也是氣虛的代表性癥狀，通過對(duì)大鼠肌力測(cè)定，可評(píng)價(jià)其乏力程度。本次試驗(yàn)中，模型組大鼠前上肢抓力較空白組下降明顯，見圖2（C）、表3，P<0.001，隨時(shí)間推移抓力持續(xù)下降，且在造模后期（30天）抓力較前一次觀測(cè)有明顯下降（P<0.01），表明乏力表征在觀察后期更為嚴(yán)重。

表2 大鼠呼吸頻率表征比較（±s，n=15）

表2 大鼠呼吸頻率表征比較（±s，n=15）

注：與模型組相比，▲P < 0.05，▲▲P < 0.01，▲▲▲P < 0.001（以下圖、表標(biāo)注均同）

呼吸頻率/(次/min)安靜狀態(tài)下30天141.47±6.42 269.73±7.15**91.07±5.38 143.6±14.26**▲▲活動(dòng)后組別空白組模型組空白組模型組1天143.13±7.69 202.73±11.01**85.13±5.11 104.47±4.64**15天142.07±6.97 228.53±25.41**85.73±9.65 112.93±7.59**▲▲

表3 大鼠抓力表征比較（±s，n=15）

表3 大鼠抓力表征比較（±s，n=15）

組別空白組模型組1天11.99±1.95 8.18±0.82**15天12.45±1.49 7.81±0.56**30天13.10±1.10 6.57±0.71**▲▲

表4 大鼠毛色亮度表征比較（±s，n=15）

表4 大鼠毛色亮度表征比較（±s，n=15）

組別空白組模型組1天183.14±6.90 170.59±3.36**15天174.00±5.54 153.54±6.32**▲▲▲30天177.51±5.97 140.86±6.60**▲▲▲

表5 大鼠活躍度表征比較（±s，n=15）

表5 大鼠活躍度表征比較（±s，n=15）

曠場(chǎng)試驗(yàn)水平移動(dòng)距離直立次數(shù)組別空白組模型組空白組模型組1天14.6±1.40 10±1.51 2.6±0.83 2.07±1.33 15天16.27±1.98 8.8±1.37▲▲▲3.07±0.88 0.93±0.70▲▲30天17.2±1.78 6.8±2.04▲▲▲3±0.92 1.53±1.06▲▲

3.4.4 腹部毛色亮度值

肺在體合皮毛，皮膚毛發(fā)干枯無光是氣虛血瘀臨床常見癥狀。本次試驗(yàn)中，空白組大鼠腹部毛色亮度較為均一、變化小。模型組大鼠腹部毛色亮度值較空白組偏低，見圖2（D）、表4，P<0.001，且亮度值逐漸下降（P<0.001）。

3.4.5 曠場(chǎng)試驗(yàn)

曠場(chǎng)試驗(yàn)是行為學(xué)實(shí)驗(yàn)的一部分，其主要觀察動(dòng)物對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力、探索能力，反應(yīng)動(dòng)物的情緒變化，從某程度上反應(yīng)大鼠活躍度及懶動(dòng)狀態(tài)。模型組大鼠直立次數(shù)較空白組逐漸降低，見圖2（E），P<0.01，這表明大鼠對(duì)外界新環(huán)境的不敏感。水平行走距離較空白組有明顯縮短，提示模型組大鼠懶動(dòng)的表征，見圖2（E）、表5，P<0.001。

3.4.6 負(fù)重力竭游泳實(shí)驗(yàn)

通過游泳時(shí)間和距離的分析，可觀察動(dòng)物活動(dòng)耐力情況，并與抓力測(cè)定共同評(píng)價(jià)大鼠乏力程度。與空白組力竭游泳相比，模型組力竭游泳時(shí)間、距離明顯縮短，見圖2（G）、表6，P<0.001。隨著時(shí)間推移模型組大鼠力竭游泳時(shí)間、距離逐漸下降（P < 0.01）且從游泳距離看30 天觀察期較前活動(dòng)距離明顯下降（P <0.001），表明隨著時(shí)間延長大鼠耐力下降更為明顯，并與抓力實(shí)驗(yàn)相互印證了疾病末期氣虛乏力表征的嚴(yán)重程度。

3.4.7 舌色、爪色

舌象是證候的關(guān)鍵組成部分，是中醫(yī)診斷學(xué)的特色診法，因此在動(dòng)物表征的觀測(cè)中舌象也是重要指征。其包括了舌色和舌底靜脈長度兩部分內(nèi)容作為量化評(píng)分的標(biāo)準(zhǔn)。我們可以看到空白組舌色淡紅而潤、爪色紅而有光澤；模型組舌色暗紅、爪色暗紅而干瘦。模型組大鼠爪色、舌色R 值明顯高于空白組（P<0.001）；舌色r 比值在造模后15 天與空白組相比顯著降低（P < 0.01），爪色r 比值在造模后30 天與前一次r比值降低具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），這提示在造模過程中大鼠舌色、爪色暗紅，血行不暢的瘀血表征且造模后30天較前一次紅色更深，表明瘀血表征在后期表現(xiàn)更為嚴(yán)重。見表7。

3.4.8舌質(zhì)和舌下絡(luò)脈評(píng)分

空白組舌質(zhì)鮮紅而潤、舌下絡(luò)脈清晰；模型組舌質(zhì)暗紅而干、舌下絡(luò)脈迂曲且粗長。模型組從造模1天后舌下絡(luò)脈瘀滯評(píng)分較空白組開始出現(xiàn)增高（P <0.01），自造模后15 天評(píng)分較空白組明顯增高（P <0.001），舌質(zhì)評(píng)分在造模后15 天與空白組相比升高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。見表8、圖3。

表6 大鼠力竭游泳表征比較（±s，n=15）

表6 大鼠力竭游泳表征比較（±s，n=15）

負(fù)重力竭游泳實(shí)驗(yàn)游泳時(shí)間/秒游泳距離/cm組別空白組模型組空白組模型組1天452.79±43.48 379.46±14.83**5621.57±648.83 4018.12±471.89**15天442.81±29.24 280.04±40.82**▲▲▲5856.73±857.84 3329.65±621.92**▲▲30天454.42±47.82 217.75±35.43**▲▲▲5925.75±588.79 2446.83±308.91**▲▲▲

圖2 大鼠體表宏觀表征

表7 舌色、爪色RGB比值（±s，n=15）

表7 舌色、爪色RGB比值（±s，n=15）

組別r值空白組模型組組別造模后15天132.80±9.74 105.83±5.59**造模后30天133.77±10.10 94.50±9.29**造模后1天0.55±0.02 0.54±0.01造模后15天0.56±0.02 0.53±0.02*造模后30天0.54±0.02 0.53±0.021舌色R值造模后1天138.36±6.63 120.75±5.69**爪色R值造模后1天179.19±8.805 148.16±10.604**造模后15天171.04±8.233 138.11±7.973**r值空白組模型組造模后30天174.63±7.694 126.48±8.631**造模后1天0.44±.012 0.43±.015造模后15天0.44±.014 0.44±.011造模后30天0.44±.014 0.41±.043▲

4 討論

病證結(jié)合動(dòng)物模型為疾病的證候?qū)嵸|(zhì)研究提供了新媒介。目前，該類模型主要采用多因素造模方法模擬中醫(yī)病因?qū)W發(fā)病，但是造模因素復(fù)雜、中醫(yī)特色不鮮明、缺乏有效公認(rèn)的定量定性觀測(cè)指標(biāo)、穩(wěn)定性及可重復(fù)性差等問題阻礙了對(duì)證候本質(zhì)研究[14-15]。因此，選用可納入中醫(yī)病因?qū)W的造模方法，采用可定量、定性分析癥狀、判斷證候歸屬的四診手段，構(gòu)建與動(dòng)物模型相適應(yīng)的指標(biāo)體系、量化標(biāo)準(zhǔn)，獲取穩(wěn)定、可重復(fù)構(gòu)建證候模型具有重要意義。王永炎院士對(duì)此提出四診信息所反映的整體狀態(tài)是證候模型評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)[16]，動(dòng)物表征就是模型動(dòng)物的某些體表特征表現(xiàn)人體癥狀[17]，這符合中醫(yī)學(xué)“視其外應(yīng)，以知其內(nèi)臟”的整體診病思想，為證候模型判定提供了新思路。

表8 舌質(zhì)分級(jí)評(píng)分（±s，n=15）

表8 舌質(zhì)分級(jí)評(píng)分（±s，n=15）

組別空白組模型組舌質(zhì)舌下絡(luò)脈造模后1天0.46±0.63 0.66±0.72造模后15天0.46±0.63 1.46±0.63**造模后30天0.26±0.45 2.33±0.61**造模后1天0.60±0.73 1.13±0.51*造模后15天0.40±0.50 2.33±0.72**造模后30天0.80±0.67 3.13±0.83**

圖3 舌下絡(luò)脈演變圖像

本實(shí)驗(yàn)采用煙熏聯(lián)合氣道滴注LPS 的造模方式，通過HE染色、血?dú)夥治鰪默F(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度證實(shí)COPD疾病模型的成功制備。對(duì)動(dòng)物模型的宏觀表征定量分析提示COPD 模型大鼠首先出現(xiàn)了平靜及游泳后呼吸頻率加快、喘息氣促、動(dòng)則尤甚的表征；體重減輕、增幅小的消瘦表征；毛色亮度值偏低等毛發(fā)干枯、無光澤的表征；力竭游泳時(shí)間距離縮短、活動(dòng)能力不足、四肢抓力下降的神疲乏力、懶動(dòng)、肌力下降等表征。隨著觀察時(shí)間延長，大鼠上述表征并未得到明顯好轉(zhuǎn)，且舌質(zhì)、舌色及舌下絡(luò)脈評(píng)分出現(xiàn)了明顯血瘀征象。從疾病模型反應(yīng)證候特征的宏觀表征入手是四診信息的連續(xù)全面收集的關(guān)鍵，也是對(duì)證候中相關(guān)癥狀體征客觀評(píng)價(jià)的核心。

基于對(duì)大鼠生物表征的連續(xù)動(dòng)態(tài)觀測(cè)，本研究認(rèn)為LPS聯(lián)合煙熏長期作用于肺臟，肺失宣降而發(fā)本病，肺在體合毛而見毛發(fā)干枯；子盜母氣，脾失健運(yùn)而消瘦；久病臟腑功能減退，故神疲乏力、少氣懶動(dòng)；氣虛運(yùn)血無力，血行遲緩脈絡(luò)瘀滯，而見舌暗紅脈絡(luò)瘀阻。從病因?qū)W角度出發(fā)[18]作為顆粒物暴露的煙草燃燒以鼻竅、口咽為侵入途徑，初期損傷人體一身之氣，肺為華蓋當(dāng)先受其害；后期入血伏于陰分而攜瘀挾滯，痹阻肺絡(luò)。LPS近年來從中醫(yī)病因?qū)W角度被認(rèn)為是外源性污穢之血[19]，作用于動(dòng)物可致血瘀。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)通過以公認(rèn)的造模因素及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為載體、連續(xù)相關(guān)定量評(píng)價(jià)指標(biāo)體系為依據(jù)，參考“生物表征”及“因、脈、證、治”的理論為基礎(chǔ)的研究思路建立證候模型。煙熏聯(lián)合LPS 制備COPD 穩(wěn)定期疾病大鼠模型既與西醫(yī)病理改變相一致，又具備中醫(yī)病因特征，其證候演變?cè)缙谝詺馓摓橹?，晚期由虛致瘀出現(xiàn)了氣虛血瘀的證候表征。本次實(shí)驗(yàn)以西醫(yī)病因病理造模方法為出發(fā)點(diǎn)，具有良好的穩(wěn)定性及重復(fù)性，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果趨于穩(wěn)定且具有可比性，同時(shí)克服了造模方法缺乏中醫(yī)病因?qū)W支持的缺陷，并對(duì)動(dòng)物宏觀表征的定量化分析，使病證結(jié)合模型更加具有邏輯性、客觀性和科學(xué)性[20]，對(duì)COPD 穩(wěn)定期益氣活血方藥的機(jī)制研究、證候本質(zhì)的挖掘工作具有一定的科研應(yīng)用價(jià)值。