盧雪蘭 劉 娟 嚴景全 王春玲 藍云翠 林占洲

廣東省惠州市中心人民醫(yī)院肝病內(nèi)科 516001

肝癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，其具有高發(fā)、易復發(fā)、危害大等特點[1]，死亡率占所有惡性腫瘤死亡率的第二位[2]。目前肝癌主要采用手術聯(lián)合放化療進行治療，術后死亡主要因肝癌復發(fā)。因此，研究肝癌術后復發(fā)的機制成為降低肝癌死亡率的重要突破口。凝集素受體是一類高特異性的糖蛋白，已有研究證實凝集素受體表達量可作為肝癌診斷的輔助標準之一[3]。此外，研究表明凝集素受體陽性可作為急性淋巴細胞性白血病的易復發(fā)標志之一。然而，凝集素受體是否能預測肝癌復發(fā)尚不確定。C型凝集素受體12B(CLEC12B)作為凝集素受體超家族的一員，與肝癌易感性相關[4]。因此，本研究利用TCGA公共數(shù)據(jù)庫，分析CLEC12B在肝癌中的表達情況，探討CLEC12B在肝癌發(fā)生發(fā)展及預后中的作用。

1 資料和方法

1.1 資料數(shù)據(jù)來源 從TCGA官方網(wǎng)站下載數(shù)據(jù)，包括肝癌數(shù)據(jù)集的mRNA表達數(shù)據(jù)以及對應的臨床資料數(shù)據(jù)。臨床資料包括生存時間、生存狀態(tài)、年齡；病理資料包括組織學分型、TNM分期等。TCGA肝癌數(shù)據(jù)集樣本數(shù)為424例，其中癌組織樣本374例，癌旁組織樣本50例。

1.2 數(shù)據(jù)庫篩選和分組 利用R軟件對數(shù)據(jù)進行預處理，篩選生存資料完整的370例進行相關性分析和生存分析。利用肝癌與癌旁配對樣本(50例)比較CLEC12B在癌及癌旁組織的表達。利用Survminer包計算CLEC12B表達量最佳截斷值，并依據(jù)最佳截斷值將樣本分為高表達組和低表達組。

1.3 基因富集分析 利用clusterProfiler包進行基因富集分析，分析CLEC12B的表達水平對其他功能集的影響，參照基因集為h.all.v6.2.entrez.gmt數(shù)據(jù)集，設置隨機組合次數(shù)1 000次。

1.4 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析利用R 3.4.0完成。癌組織和癌旁組織表達量比較用單因素方差分析。生存分析采用Kaplan-Meier曲線，顯著性分析采用Log-rank檢驗。利用Cox回歸模型分析臨床特征與肝癌預后的關系，將單因素分析中P<0.1的參數(shù)納入多因素分析。

2 結果

2.1 癌組織與癌旁組織中CLEC12B的表達 在同一個患者中，與癌旁組織相比，癌組織中CLEC12B表達量明顯較低(P<0.001)。提示肝癌的發(fā)生過程中CLEC12B表達被抑制，見圖1。

圖1 CLEC12B在配對的癌組織和癌旁組織的表達水平

2.2 CLEC12B表達量對肝癌預后的影響 將CLEC12B表達≥5.75定義為高表達組，<5.75定義為低表達組。CLEC12B表達與總體生存顯著相關，高表達患者總體生存期優(yōu)于低表達患者，見圖2。在單因素COX回歸模型中，TNM分期、年齡、CLEC12B表達狀態(tài)能夠影響患者的預后(P<0.05),性別、病理分期對預后沒有明顯影響(見表1)。將以上P<0.1的因素納入多因素分析，TNM分期、年齡、CLEC12B表達狀態(tài)是影響肝癌患者預后的獨立因素，見表1。

圖2 CLEC12B表達狀態(tài)與肝癌患者預后的關系

2.3 CLEC12B表達與臨床病理學參數(shù)相關性 相關性分析顯示CLEC12B表達與年齡、性別、TNM分期以及病理分期均無關，見表2。

2.4 基因富集化分析 基因富集分析示，CLEC12B高表達樣本富集到DNA修復相關的基因集(P<0.05,FDR=0.012)，低表達樣本富集到炎癥反應相關的基因集(P<0.05,FDR=0.002)，見圖3。

表1 影響肝癌預后的因素

表2 CLEC12B表達與臨床病理學參數(shù)相關性

圖3 GSEA分析CLEC12B表達相關富集分析

A：DNA修復 B：炎癥反應

3 討論

CLEC12B是C型凝集素受體超家族的一員[5]。本研究顯示，相比癌旁組織，CLEC12B在癌組織中呈現(xiàn)低表達，CLEC12B高表達組總體生存期明顯優(yōu)于低表達組。這些結果提示CLEC12B與肝癌的發(fā)生發(fā)展呈負相關，可以作為肝癌預后的預測指標?；蚋患治鎏崾綜LEC12B高表達與炎癥反應、DNA修復相關，提示CLEC12B可能通過影響肝臟炎癥反應以及DNA修復調(diào)節(jié)了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

研究發(fā)現(xiàn)CLEC12B主要表達在骨髓細胞表面，能夠抑制單核細胞來源的免疫細胞的活性，從而參與機體的炎癥調(diào)控[6-7]。肝癌的發(fā)生發(fā)展與肝臟炎癥密切相關[8]，基因富集分析提示CLEC12B高表達與炎癥反應有關。因此，我們推測CLEC12B可能通過影響肝臟的炎癥，進而影響肝癌的發(fā)生。此外，DNA損傷是肝癌發(fā)生的重要機制之一[9]，基因富集分析提示CLEC12B高表達與DNA修復有關，因此推測CLEC12B可能通過上調(diào)DNA修復相關的基因，從而抑制肝癌的發(fā)生發(fā)展[10]。

本研究有一定不足之處。首先，TCGA數(shù)據(jù)庫提供的是CLEC12B的mRNA表達水平，無法完全代表CLEC12B的蛋白質(zhì)表達水平。其次，本研究的結論來源于在線數(shù)據(jù)庫分析，分析結果具有一定的提示作用，但還需要臨床以及基礎研究進一步證實。

綜上所述，CLEC12B可能通過炎癥及DNA修復等影響肝癌發(fā)生發(fā)展及預后。該結果將為深入研究CLEC12B在肝癌中的作用提供線索和依據(jù)。