傅俊建，施艷，趙龍，薛勇，李玉書>

（1.南通大學(xué)附屬建湖縣人民醫(yī)院 兒科，江蘇 建湖；2.建湖縣人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，江蘇 建湖）

0 引言

熱性驚厥（Febrile Seizures）多見于6個(gè)月至5歲小兒，發(fā)病率約3%～5%，是兒科常見的危急重癥之一[1]。熱性驚厥常分為單純性熱性驚厥（SFS）和復(fù)雜性熱性驚厥（CFS），熱性驚厥能否導(dǎo)致腦損傷，如何判斷驚厥性腦損傷程度，仍然是臨床關(guān)注的熱點(diǎn)問題。目前的研究證實(shí)，神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）作為神經(jīng)元損傷的敏感而特異性的血清生化指標(biāo)，其表達(dá)水平與早期腦損傷病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)[2]。低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）是一種重要的缺氧感受因子，其分布和作用非常廣泛，國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道HIF-1α在腦出血、缺氧缺血性腦病、腫瘤發(fā)生、心血管等疾病中發(fā)揮重要作用[3]。有資料顯示，HIF-1α較為廣泛地參與了細(xì)胞對缺氧產(chǎn)生的特異性應(yīng)答反應(yīng)，在各種氧含量降低的狀態(tài)下（包括全身缺氧、全腦缺氧及局灶性腦缺氧），腦組織都會有HIF-1α的激活表達(dá)，并具有一定的時(shí)相性[4]，提示HIF-1α水平變化可能與腦損傷程度相關(guān)。為此，本研究通過對FS患兒驚厥后不同時(shí)間點(diǎn)血清NSE、HIF-1α的水平測定，探討血清NSE、HIF-1α表達(dá)水平與熱性驚厥性腦損傷發(fā)病的關(guān)系，以期為熱性驚厥性腦損傷的防治提供新的理論依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選擇2016年3月至2019年2月在我院診斷為熱性驚厥的住院患兒62例，其中SFS 34例，CFS 28例，診斷均符合熱性驚厥的判斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。排除先天性心臟病、近期有過手術(shù)、嚴(yán)重感染、有神經(jīng)系統(tǒng)疾病或損傷的患兒。另選取同期在我院治療的上呼吸道感染患兒30例作為對照組；入選對象在性別、年齡、病程等資料上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究通過我院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患兒家長簽署知情同意書。

1.2 標(biāo)本采集

熱性驚厥患兒分別于驚厥后24 h、48 h、72 h、96 h采取外周靜脈血2 mL，靜置后經(jīng)高速離心機(jī)3000 rmp/min離心10 min，取上清液置于EP管，標(biāo)記后保存于-80 ℃冰箱待測（溶血標(biāo)本除外）；對照組兒童在入院后24 h、48 h、72 h、96 h分別采取外周靜脈血2 mL，標(biāo)本處理方法與驚厥患兒相同。

1.3 檢測方法

血清NSE、HIF-1α的測定采用ELISA法，試劑盒購自上海穎心實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司，操作均由同一檢驗(yàn)師完成，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作步驟進(jìn)行檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 NSE測定水平

（1）在 驚 厥 后24 h、48 h、72 h、96 h，SFS組 血 清NSE表達(dá)水平略高于對照組，但各點(diǎn)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；（2）CFS患兒血清NSE表達(dá)水平明顯高于對照組，各點(diǎn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；并且CFS患兒血清NSE表達(dá)水平在不同時(shí)間點(diǎn)分別明顯高于SFS組（P＜0.05），見表1。

表1 各組別不同時(shí)間點(diǎn)NSE表達(dá)水平

表1 各組別不同時(shí)間點(diǎn)NSE表達(dá)水平

注：與對照組比較，*P＜0.05，☆P＞0.05；與SFS組比較，#P＜0.05；CFS組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)NSE水平與48 h比較，★P＜0.05。

組別 n不同時(shí)間點(diǎn)NSE測定水平f P 24 h 48 h 72 h 96 h CFS組 28 21.15±2.85*#★ 39.49±4.63*# 32.65±4.66*#★ 27.03±3.87*#★ 154.1300.000 SFS組 34 13.78±3.35☆ 15.41±4.07☆ 14.17±3.45☆ 14.13±4.07☆ 2.326 0.056對照組 30 12.56±3.42 13.66±4.11 13.89±3.91 12.97±3.24 1.548 0.192 f 90.449 534.028 303.281 176.281 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2 HIF-1α測定水平

（1）在驚厥后24 h、48 h、72 h、96 h，SFS組血清HIF-1α表達(dá)水平略高于對照組，但各點(diǎn)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；（2）CFS患兒血清HIF-1α表達(dá)水平明顯高于對照組，各點(diǎn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），并且CFS患兒血清HIF-1α表達(dá)水平在不同時(shí)間點(diǎn)分別明顯高于SFS組（P＜0.05），見表2。

表2 各組別不同時(shí)間點(diǎn)HIF-1α表達(dá)水平

表2 各組別不同時(shí)間點(diǎn)HIF-1α表達(dá)水平

注：與對照組比較，*P＜0.05，☆P＞0.05；與SFS組比較，#P＜0.05；CFS組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)NSE水平與48 h比較，★P＜0.05。

組別 n不同時(shí)點(diǎn)HIF-1α測定水平f P 24 h 48 h 72 h 96 h CFS組 28 32.83±4.87*#★ 45.06±6.33*# 39.74±5.34*#★ 35.64±4.88*#★ 53.714 0.000 SFS組 34 25.13±4.18☆ 26.69±3.13☆ 26.89±3.81☆ 25.74±3.76☆ 2.305 0.058對照組 30 24.94±3.82 24.84±4.75 25.11±4.36 24.87±3.43 0.781 0.544 f 62.607 269.243 145.021 105.923 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

3 討論

熱性驚厥（FS）是指發(fā)熱狀態(tài)下出現(xiàn)的驚厥發(fā)作，無中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染及導(dǎo)致驚厥的其他原因，既往沒有無熱驚厥病史[6]。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為大部分SFS預(yù)后好，終生發(fā)作次數(shù)一般＜5次，不遺留神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，不影響認(rèn)知和智力，無需藥物特殊干預(yù)。而CFS及部分SFS有反復(fù)發(fā)作、發(fā)展為癲癇的風(fēng)險(xiǎn)，但對智力、認(rèn)知及行為影響的研究差異較大，是否進(jìn)行預(yù)防性用藥、用藥指征及用藥方法仍存在爭議[7]。研究顯示，CFS患兒發(fā)展成為癲癇以及導(dǎo)致驚厥性腦損傷的風(fēng)險(xiǎn)較大，部分患兒可出現(xiàn)智力降低和癲癇病[8]。由于嚴(yán)重頻發(fā)的FS可導(dǎo)致驚厥性腦損傷，遺留智力低下及行為異常，甚至可轉(zhuǎn)為癲癇，因此，F(xiàn)S的預(yù)后研究為家長及臨床醫(yī)生所關(guān)注[9]。

NSE是一種存在于神經(jīng)元和腦膠質(zhì)細(xì)胞中的糖酵解酶，腦損傷時(shí)細(xì)胞壞死溶解，NSE可通過被破壞的血腦屏障進(jìn)入腦脊液和血液中，可使血液中的NSE濃度明顯增加。大量動(dòng)物試驗(yàn)及臨床試驗(yàn)表明，檢測NSE是判斷顱內(nèi)神經(jīng)元損傷或壞死的客觀指標(biāo)，其升高程度與腦損傷程度及預(yù)后有密切關(guān)系[10]。

近年來，國內(nèi)外已經(jīng)有多篇關(guān)于熱性驚厥患兒驚厥發(fā)作后或多種原因引起腦損傷后腦脊液或血液NSE水平變化的文獻(xiàn)報(bào)道，所得出的結(jié)論有一定的差異，可能是因?yàn)椴蓸訒r(shí)間或判斷的標(biāo)準(zhǔn)不一樣。但大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，SFS至少不會引起腦脊液或血清NSE濃度的嚴(yán)重升高[11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，SFS驚厥后不同時(shí)間點(diǎn)的NSE表達(dá)水平分別為24 h（13.78±3.35）ng/mL，48 h（15.41±4.07）ng/mL，72 h（14.17±3.45）ng/mL，96 h（14.13±4.07）ng/mL，對照組各對應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)分別為（12.56±3.42）ng/mL，（13.66±4.11）ng/mL，（13.89±3.91）ng/mL，（12.97±3.24）ng/mL；表 明SFS發(fā) 作后NSE水平與對照組比較無明顯升高（P＞0.05），提示SFS患兒驚厥發(fā)作不會引起NSE明顯增高和腦損傷，這與前述文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[12]。從本研究結(jié)果來看，CFS組患兒驚厥后不同時(shí)間點(diǎn)NSE表達(dá)水平分別為24 h（21.15±2.85）ng/mL，48 h（39.49±4.63）ng/mL，72 h（32.65±4.66）ng/mL，96 h（27.03±3.87）ng/mL，各時(shí)間點(diǎn)濃度較相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)SFS組的NSE濃度明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。由NSE的測定結(jié)果可以推測，CFS組患兒可能存在一定程度的驚厥后腦損傷。

低氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）是近年發(fā)現(xiàn)的一種重要的缺氧感受因子，由α、β兩個(gè)亞基組成，HIF-1α僅在缺血細(xì)胞的細(xì)胞核中存在，HIF-1β則在正常細(xì)胞和缺氧細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)，當(dāng)細(xì)胞缺血缺氧時(shí)，HIF-1α的降解途徑被阻斷，HIF-1α表達(dá)就開始增高，作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，其介導(dǎo)多種效應(yīng)基因的表達(dá)，參與缺血缺氧反應(yīng)過程，能調(diào)節(jié)細(xì)胞適應(yīng)低氧狀態(tài)下的能量代謝和氧的運(yùn)輸，并維持體內(nèi)細(xì)胞內(nèi)氧平衡。HIF-1α的下游靶基因涉及細(xì)胞能量代謝、離子代謝、血管形成、紅細(xì)胞生成、細(xì)胞凋亡和增殖、細(xì)胞遷移等多個(gè)方面，在許多生理和病理過程，尤其是缺氧缺血性疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。

大腦神經(jīng)元對缺氧十分敏感，任何因素所導(dǎo)致的氧含量降低都可導(dǎo)致HIF-1α表達(dá)水平的增高；從已知的研究結(jié)果來看，驚厥性腦損傷主要是由于驚厥后不同程度的大腦神經(jīng)元缺氧缺血所導(dǎo)致。本資料中，SFS組血清HIF-1α濃度無明顯增高，與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而CFS組不同時(shí)間點(diǎn)血清HIF-1α濃度分別為24 h（32.83±4.87）pg/mL，48 h（45.06±6.33）pg/mL，72 h（39.74±5.34）pg/mL，96 h（35.64±4.88）pg/mL，明顯高于對照組和SFS組各點(diǎn)的表達(dá)水平（P＜0.05），此測定結(jié)果也證實(shí)了上述觀點(diǎn)；同時(shí)也提示，SFS組患兒無明顯HIF-1α的異常表達(dá)。研究表明，缺氧是最主要的HIF-1α表達(dá)的調(diào)節(jié)因子，HIF-1α表達(dá)增強(qiáng)的機(jī)制可能與低氧狀態(tài)下細(xì)胞線粒體產(chǎn)生大量的活性氧簇以及與缺血/再灌注后產(chǎn)生的OH-有關(guān)，它們能夠穩(wěn)定HIF-1α，使HIF-1α免于被迅速降解。HIF-1α蛋白有一個(gè)非血紅素結(jié)合鐵的降解中心，缺乏腫瘤抑制蛋白與其結(jié)合，介導(dǎo)HIF-1α蛋白的分解，鈷離子和鐵離子螯合物可以阻礙腫瘤抑制基因（VHL）和HIF-1α蛋白非血紅素結(jié)合鐵的結(jié)合，導(dǎo)致HIF-1α和VHL的分離，使HIF-1α在胞內(nèi)聚集[13]。本研究結(jié)果顯示，CFS患兒驚厥后HIF-1α表達(dá)水平顯著高于其他兩組，提示CFS患兒存在一定程度的驚厥性腦損傷，符合文獻(xiàn)報(bào)道[14]。

綜上所述，NSE和HIF-1α可能參與了腦缺氧缺血性損傷的早期反應(yīng)，NSE和HIF-1α表達(dá)水平的測定對FS特別是CFS患兒腦損傷的判斷具有重要臨床意義。