于立剛, 陳素琴, 毛國(guó)良

背景

結(jié)直腸癌(colorectal carcinoma, CRC)是臨床上常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤. 但其確切發(fā)病機(jī)制和預(yù)后獨(dú)立因素仍未闡明. 本研究通過(guò)生物信息學(xué)方法分析了zeste基因增強(qiáng)子同源物2(enhancer of zeste homolog 2, EZH2)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因在CRC中的表達(dá)情況及其和患者預(yù)后的感謝. 并采用免疫組化檢測(cè)了EZHE2和VEGF蛋白的表達(dá)情況及其與患者臨床特征的關(guān)系.

目的

探討EZH2和VEGF在CRC中的表達(dá)、突變情況及其與患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系.

方法

首先在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中比較EZH2 和VEGF 基因mRNA在腸癌患者癌和癌旁組織中的表達(dá), 同時(shí)分析EZH2和VEGF基因的突變情況; 采用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)建立EZH2和VEGF基因表達(dá)網(wǎng)絡(luò)并篩選網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵基因. 根據(jù)EZH2和VEGF在腫瘤組織中的表達(dá)分為高低表達(dá)組, Cox回歸模型Log-rank檢驗(yàn)比較高低表達(dá)組患者總生存和無(wú)疾病進(jìn)展生存是否存在差異. 同時(shí)選取80例腸癌手術(shù)患者, 留取患者癌組織和癌旁組織, 采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)上述組織中EZH2和VEGF蛋白表達(dá)水平.

結(jié)果

TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)顯示EZH2 和VEGF 基因在CRC組織中的表達(dá)水平顯著高于對(duì)應(yīng)的正常腸上皮組織(P＜0.05), 而與腸癌患者的臨床分期并無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05); EZH2和VEGF基因在人腸癌中的突變率分別為1.5%和1.9%, 且EZH2和VEGF不同突變組織中mRNA表達(dá)水平存在明顯差異. 網(wǎng)絡(luò)中共有22個(gè)蛋白, 各蛋白平均相互作用指數(shù)為10.5, 區(qū)域聚集指數(shù)為0.8, 各蛋白富集明顯(P＜0.01). Cytohubb軟件篩選出EZH2, DNMT1, HDAC2, YY1和SUZ12為網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵基因; EZH2和VEGF高低表達(dá)與患者總生存期均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05), 而VEGF高表達(dá)組患者無(wú)疾病進(jìn)展生存期顯著低于低表達(dá)組(HR = 1.8, P＜0.05). 免疫組化顯示, EZH2和VEGF在腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于癌旁組織 (P＜0.01). EZH2陽(yáng)性表達(dá)與腸癌腫瘤直徑、分化程度和Duke分期有關(guān)(P＜0.05). 而VEGF陽(yáng)性表達(dá)與腸癌患者分化程度和Duke分期存在相關(guān)性(P＜0.05).

結(jié)論

EZH2和VEGF在腸癌組織中呈現(xiàn)明顯上調(diào)表達(dá)和突變, 其高表達(dá)與腫瘤大小、分會(huì)程度和Duke分期有關(guān), 并可作為腸癌預(yù)后的潛在分子標(biāo)志物.

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0 引言

腫瘤流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示, 美國(guó)每年結(jié)直腸癌(colorectal carcinoma, CRC)發(fā)病人數(shù)為15萬(wàn)例左右, 死亡人數(shù)約為5萬(wàn)[1]. 我國(guó)尚無(wú)結(jié)直腸腫瘤確切的流行病學(xué)數(shù)據(jù), 但各個(gè)地方的結(jié)直腸流行病學(xué)研究提示近年來(lái)其發(fā)病率呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)[2]. 早期行CRC根治術(shù)的患者預(yù)后較好, 而晚期患者預(yù)后較差[3,4]. 目前, 關(guān)于CRC預(yù)后的相關(guān)因素研究認(rèn)為, 患者TNM分期是預(yù)后的獨(dú)立因素. 同時(shí), 近年來(lái)隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步, 結(jié)直腸的惡性生物學(xué)行為調(diào)控機(jī)制逐漸明晰, 它是一個(gè)涉及多基因多步驟的分子生物調(diào)控過(guò)程[5], 在此過(guò)程中, 多種蛋白因子參與其中包括zeste基因增強(qiáng)子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等[6].EZH2基因是果蠅zeste基因增強(qiáng)子的人類(lèi)同源物, 是PcG(Polycomb Group)基因家族的重要成員之一. EZH2能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖、腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散, 在多種腫瘤組織中高表達(dá), 與腫瘤惡性程度和患者預(yù)后密切相關(guān). 而腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移與血管生成密切相關(guān). VEGF是腫瘤血管生成的重要因子, 其表達(dá)水平與腫瘤微血管生成有關(guān). 在本研究中, 我們首先采用生物信息學(xué)方法, 分析EZH2和VEGF基因在腸癌中的表達(dá)和突變情況及其與患者預(yù)后的關(guān)系, 并采用免疫組化對(duì)上述生物信息結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證.

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 EZH2 和VEGF 基因生物信息學(xué)分析：首先在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中比較EZH2和VEGF基因mRNA在腸癌患者癌組和癌旁組織中的表達(dá), 同時(shí)分析EZH2和VEGF基因的突變情況. STRING數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//string-db.org/cgi/input.pl)[7]對(duì)EZH2和VEGF及相互作用基因進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析, 物種選擇人, 作用蛋白不少于20個(gè), 相互作用關(guān)系置信度大于0.7. 根據(jù)EZH2和VEGF基因mRNA表達(dá)中位數(shù)將腸癌分為高低表達(dá)組, Cox回歸模型Log-rank檢驗(yàn)比較高低表達(dá)組腸癌患者總生存和無(wú)疾病進(jìn)展生存是否存在差異, 并計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)比(hazard ratio, HR).

1.1.2 EZH2和VEGF功能富集和蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建：采用基因本體論(gene ontology, GO)對(duì)VEGF和EZH2基因和相關(guān)蛋白進(jìn)行功能富集, 包括細(xì)胞組分, 分子功能和生物學(xué)過(guò)程3個(gè)層面[8]. 同時(shí)利用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建相互作用蛋白網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建條件為置信度大于0.5[9].

1.1.3 EZH2和VEGF共表達(dá)分析：在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中, 依據(jù)與EZH2和VEGF基因共表達(dá)關(guān)系, 對(duì)與EZH2和VEGF基因存在相關(guān)性的基因進(jìn)行聚類(lèi). 同時(shí)選取正相關(guān)和負(fù)相關(guān)表達(dá)最為明顯的2個(gè)基因進(jìn)行分析, 計(jì)算spearman相關(guān)系數(shù).

1.1.4 組織標(biāo)本留取及儀器試劑：回顧性研究我院2015-01/2019-06收治的80例CRC患者的蠟塊癌和癌旁組織標(biāo)本. 患者納入標(biāo)準(zhǔn)： 患者病理明確診斷為CRC; 術(shù)前未接受新輔助治療; 無(wú)合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤; 患者組織標(biāo)本獲取經(jīng)患者或家屬同意并簽訂知情同意書(shū). 排除標(biāo)準(zhǔn)： 患者CRC診斷不明確; 術(shù)前接受新輔助化療或生物治療; 合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤; 臨床病理自理不完整者. 本項(xiàng)目研究經(jīng)天津市武清區(qū)人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn). 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)EZH2和VEGF在癌組和癌旁組織中的表達(dá)水平及其與患者臨床病理特征的關(guān)系. EZH2和VEGF單克隆抗體(鼠抗人, 一抗), 擬購(gòu)自美國(guó)cell signaling公司; 鼠抗兔HRP(二抗)抗體, 購(gòu)自美國(guó)sigma公司; PBS緩沖液, 購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司.

1.2 方法EZH2和VEGF免疫組化檢測(cè)： 組織標(biāo)本處理及免疫組化操作： (1)脫蠟水化, 將組織切片置于二甲苯中浸泡10 min, 無(wú)水乙醇浸泡5 min, 95%, 80%和79%乙醇各浸泡5 min; (2)抗原修復(fù), 水浴鍋加入0.01 mol/L枸櫞酸鈉至95 ℃, 放入切片15 min; (3)免疫組織化學(xué)染色, 按操作指南逐步脫蠟水化、抗原修復(fù)、滴加一抗和二抗, 然后顯色, 最終封片鏡檢.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理, 計(jì)數(shù)資料采用率表示, 組間比較采用χ2檢驗(yàn); 生存分析采用風(fēng)險(xiǎn)比例模型Log-rank檢驗(yàn), 多因素生存分析采用Cox回歸模型,P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié)果

2.1 EZH2和VEGF在CRC中的表達(dá)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)顯示,EZH2和VEGF基因在CRC組織中的表達(dá)水平顯著高于對(duì)應(yīng)的正常腸上皮組織(P＜0.05), 而EZH2和VEGF基因表達(dá)水平與腸癌患者的臨床分期并無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)(圖1).

圖 1 EZH2和VEGF在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其與患者臨床分期的關(guān)系. A： EZH2基因mRNA在腸癌患者癌和癌旁組織中的比較; B： EZH2基因mRNA在不同臨床分期腸癌患者中的比較; C： VEGF基因mRNA在腸癌患者癌組織和癌旁組織中的比較; D： VEGF基因mRNA在不同臨床分期腸癌患者中的比較. EZH2： zeste基因增強(qiáng)子同源物2; VEGF： 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子.

2.2 EZH2和VEGF功能富集EZH2和VEGF基因生物學(xué)過(guò)程、細(xì)胞成分和分子功能主要分別富集于細(xì)胞增殖調(diào)控、ESC/E(Z)復(fù)合體和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子激活受體活性(表1).

2.3 EZH2和VEGF基因突變分析EZH2和VEGF基因在人腸癌中的突變率分別為1.5%和1.9%, 且EZH2和VEGF不同突變組織中期mRNA表達(dá)水平存在明顯差異(圖2).

2.4 EZH2和VEGF相互作用網(wǎng)絡(luò)分析EZH2和VEGF構(gòu)建相互作用蛋白網(wǎng)絡(luò), 網(wǎng)絡(luò)中共有22個(gè)蛋白, 各蛋白平均相互作用指數(shù)為10.5, 區(qū)域聚集指數(shù)為0.8, 各蛋白富集明顯(P＜0.01). Cytohubb軟件篩選出EZH2,DNMT1,HDAC2,YY1和SUZ12為網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵基因(圖3).

2.5 EZH2和VEGF共表達(dá)分析EZH2和VEGF基因正負(fù)相關(guān)表達(dá)的基因進(jìn)行了聚類(lèi)分析(圖4), NCAPG2(r= 0.69,P＜0.05)和PBXIP1基因(r= -0.22,P＜0.05)分別于EZH2基因正負(fù)相關(guān)表達(dá)(圖5A、B). 而GTPBP2(r= 0.598,P＜0.05和PECH與VEGF(r= -0.38,P＜0.05)分別于VEGF基因正負(fù)相關(guān)表達(dá)(圖5C、D).

2.6 EZH2和VEGF表達(dá)與患者預(yù)后根據(jù)基因在腸癌組織中的表達(dá)水平分為高低表達(dá)組, 采用Cox回歸模型繪制生存曲線, Log-rank檢驗(yàn)顯示EZH2和VEGF高低表達(dá)組與患者總生存期均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05), 而VEGF高表達(dá)組患者無(wú)疾病進(jìn)展生存期顯著低于低表達(dá)組(HR = 1.8,P＜0.05)(圖6).

2.7 EZH2和VEGF表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系EZH2主要表達(dá)于腸癌細(xì)胞的細(xì)胞核, 呈現(xiàn)棕黃色顆粒狀(圖7). EZH2在腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為63.8%(51/80), 在癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為6.3%(5/80), 癌組織中EZH2陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常腸組織(χ2= 58.13,P＜0.01). VEGF表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)表達(dá), VEGF在腸癌患者腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為60.0%(48/80), 高于癌旁組織26.5%(21/80), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 18.58,P＜0.01). EZH2陽(yáng)性表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤發(fā)生部和腫瘤直徑無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05), 而EZH2陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤分化程度和Duke分期有關(guān)(P＜0.05). VEGF陽(yáng)性表達(dá)與腸癌患者分化程度和Duke分期存在相關(guān)性(P＜0.05), 而與其他病理特征無(wú)關(guān)(表2).

表 1 EZH2和VEGF基因相關(guān)生物學(xué)功能富集

3 討論

EZH2為果蠅zeste基因增強(qiáng)子同源物2, 在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用. 該基因的異常表達(dá)可能與多種實(shí)體腫瘤的惡性表型有關(guān)[8]. EZH2是1996年初Hobert等采用酵母雙雜交系統(tǒng)方法發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新基因, 當(dāng)時(shí)命名為ENX-1. 它在體內(nèi)和體外都能和Vav相互作用, 是果蠅zeste基因增強(qiáng)子[E(z)]的人類(lèi)同源物. 在人類(lèi)EZH2基因定位于人7染色體3帶5區(qū), 為多梳蛋白復(fù)合體PcG(Polycomb group)家族重要成員之一. 既往研究發(fā)現(xiàn), EzH2表達(dá)產(chǎn)物可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖及擴(kuò)散, 在多種惡性腫瘤如前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等腫瘤中呈現(xiàn)異常表達(dá)[9-12]. 但關(guān)于EZH2與結(jié)腸癌的關(guān)系研究較少, 其與結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為之間的關(guān)系并不是十分清楚.

VEGF是1989年Ferrarra首先發(fā)現(xiàn)并報(bào)道的, VEGF分子量在34-45 KD之間, 研究顯示它屬于血小板衍生生長(zhǎng)因子家族的一員,在人體和動(dòng)物體內(nèi)的各種組織均有廣泛的分布, 不僅是生理組織, 在腫瘤等病理組織中, 也有大量的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子分布[13,14]. VEGF是一種能產(chǎn)生多種生物學(xué)效應(yīng)、功能強(qiáng)大的細(xì)胞因子, 對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展影響最大的功能就是促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂, 故將其命名成血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子[15,16]. 目前發(fā)現(xiàn)的VEGF亞型有VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(placenta growth factor, PIGF). VEGF家族中, VEGF-A 是主要的血管生長(zhǎng)因子, 對(duì)于血管內(nèi)皮的生長(zhǎng)起著主要作用, 所以對(duì)它的研究也最為成熟, 雖然如此, 對(duì)于VEGF-A的作用原理當(dāng)前仍未研究透徹, 如今, 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子已經(jīng)成為研究腫瘤的重要分支, 關(guān)于VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E等因子的作用原理也成為當(dāng)下研究的熱點(diǎn). 腫瘤新生血管的生長(zhǎng)并不僅受VEGF的影響, 除此之外, 還有腫瘤轉(zhuǎn)化因子、壞死因子等因素參與其中, 這些因子通過(guò)什么原理對(duì)腫瘤組織產(chǎn)生影響, 以及他們之間有沒(méi)有聯(lián)系, 這些都是醫(yī)學(xué)界尚未解決和清楚的問(wèn)題, 未來(lái)一段時(shí)間內(nèi), 影響腫瘤組織的細(xì)胞因子, 尤其是血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子將會(huì)是研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)問(wèn)題[17,18]. VEGF蛋白表達(dá)與CRC患者的關(guān)系研究報(bào)道較少.

表 2 EZH2和VEGF蛋白表達(dá)與腸癌臨床病理特征之間的相關(guān)性

圖 2 EZH2和VEGF基因突變分析. A： EZH2基因在腸癌中的突變情況; B： VEGF基因在腸癌中的突變情況; C： EZH2基因不同突變組織中表達(dá)水平比較; D： VEGF基因不同突變組織中表達(dá)水平比較. a突變明顯; EZH2： zeste基因增強(qiáng)子同源物2; VEGF： 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子; VEGFA： 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A.

圖 3 EZH2和VEGF相互作用網(wǎng)絡(luò). A： STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中EZH2和VEGF相互作用網(wǎng)絡(luò); B： 網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵基因篩選. EZH2： zeste基因增強(qiáng)子同源物2; VEGF： 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子; YY1： 陰陽(yáng)因子1; DNMT1： DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1; HDAC2： 組蛋白去乙?；?; SUZ12： 多數(shù)蛋白復(fù)合體12; IGF1： 胰島素生長(zhǎng)因子1; EGF： 表皮生長(zhǎng)因子; HIF1A： 缺氧誘導(dǎo)因子1A; RBBP4： 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白4; HDAC1： 組蛋白去乙酰化酶1; EED： 胚胎外胚層發(fā)育基因; RBBP7： 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白7.

圖 4 EZH2和VEGF及其相關(guān)基因共表達(dá)分析. A： EZH2正相關(guān)表達(dá)基因; B： EZH2負(fù)相關(guān)表達(dá)基因; C： VEGF正相關(guān)表達(dá)基因; D： VEGF負(fù)相關(guān)表達(dá)基因. EZH2： zeste基因增強(qiáng)子同源物2; VEGF： 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子.

在本研究中, 我們首先采用生物信息學(xué)方法, 分析EZH2和VEGF基因在腸癌中的表達(dá)和突變情況及其與患者預(yù)后的關(guān)系. 并采用免疫組對(duì)上述生物信息結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證. 生物信息分析結(jié)果顯示, 腸癌組織中EZH2和VEGF表達(dá)水平均高于對(duì)應(yīng)的正常腸黏膜上皮, 提示EZH2和VEGF基因在腸癌的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮了重要作用. 同時(shí), 我們?nèi)虢M的80例腸癌患者免疫組化也顯示腸癌組織中EZH2和VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常腸黏膜, 與生物信息分析結(jié)果一致. TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中,EZH2和VEGF基因均存在明顯的突變, 且不同突變組中基因拷貝數(shù)存在差異, 說(shuō)明EZH2和VEGF表達(dá)水平可能與突變類(lèi)型存在一定的關(guān)聯(lián).

根據(jù)基因在腸癌組織中的表達(dá)水平分為高低表達(dá)組, 采用Cox回歸模型繪制生存曲線, Log-rank檢驗(yàn)顯示EZH2和VEGF高低表達(dá)組與患者總生存期均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05), 而VEGF高表達(dá)組患者無(wú)疾病進(jìn)展生存期顯著低于低表達(dá)組(HR = 1.8,P＜0.05). 說(shuō)明VEGF高表達(dá)患者預(yù)后不良, 分析原因可能與VEGF高表達(dá)患者腫瘤微血管密度增高, 遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān). 但其確切分子機(jī)制有待進(jìn)一步評(píng)價(jià).

圖 5 EZH2和VEGF正負(fù)相關(guān)表達(dá)基因. A： EZH2正相關(guān)表達(dá)基因; B： EZH2負(fù)相關(guān)表達(dá)基因; C： VEGF正相關(guān)表達(dá)基因; D： VEGF負(fù)相關(guān)表達(dá)基因. EZH2： zeste基因增強(qiáng)子同源物2; VEGF： 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子; NCAPG2： 非染色體結(jié)構(gòu)維護(hù)凝縮蛋白I復(fù)合體G亞基2; GTPBP2： GTD連接蛋白2.

E Z H2和V E G F相互作用蛋白網(wǎng)絡(luò)中,E Z H2,DNMT1,HDAC2,YY1和SUZ12基因?yàn)殛P(guān)鍵基因, 上述基因大多參與腫瘤的分裂增殖和侵襲轉(zhuǎn)移生物學(xué)過(guò)程. 進(jìn)一步的生存分析認(rèn)為,VEGF基因高表達(dá)患者無(wú)疾病進(jìn)展生存期較短, 其高表達(dá)是腸癌患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素, 并有望成為腸癌預(yù)后的分子標(biāo)志物.

文章亮點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)背景

文獻(xiàn)報(bào)道EZH2和VEGF在多種實(shí)體腫瘤中高表達(dá)并與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及惡性生物學(xué)行為有關(guān). EZH2和VEGF在結(jié)直腸癌(colorectal carcinoma, CRC)中的表達(dá)及其與患者臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系不明.

實(shí)驗(yàn)動(dòng)機(jī)

本研究通過(guò)生物信息學(xué)方法探討EZH2和VEGF在CRC中低表達(dá)、相關(guān)信號(hào)通路及與患者預(yù)后的關(guān)系. 同時(shí)采用免疫組織化學(xué)法驗(yàn)證EZH2和VEGF蛋白表達(dá)水平與CRC患者臨床病理特征的關(guān)系, 佐證生物信息分析結(jié)果.

圖 6 EZH2和VEGF表達(dá)與患者預(yù)后關(guān)系生存曲線. A： EZH2表達(dá)與腸癌患者總生存關(guān)系; B： EZH2表達(dá)與腸癌患者無(wú)疾病進(jìn)展生存關(guān)系; C： VEGF表達(dá)與腸癌患者總生存關(guān)系; D： VEGF表達(dá)與腸癌患者無(wú)疾病進(jìn)展生存關(guān)系. EZH2： zeste基因增強(qiáng)子同源物2; VEGF： 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子; HR： 風(fēng)險(xiǎn)比.

實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

探討EZH2和VEGF在CRC中表達(dá)及與患者臨床病理和預(yù)后的關(guān)系, 判斷其作為CRC預(yù)后分子標(biāo)志物的可行性.

實(shí)驗(yàn)方法

在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中比較EZH2和VEGF基因mRNA在腸癌患者癌和癌旁組織中的表達(dá).構(gòu)建EZH2和VEGF基因表達(dá)網(wǎng)絡(luò)并篩選網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵基因.比較EZH2和VEGF高低表達(dá)組患者總生存和無(wú)疾病進(jìn)展生存是否存在差異.采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)上述組織中EZH2和VEGF蛋白表達(dá)水平及其與患者臨床病理特征的關(guān)系.

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

EZH2和VEGF在CRC組織中的表達(dá)水平上調(diào)(P＜0.05). VEGF高表達(dá)組患者無(wú)疾病進(jìn)展生存期顯著低于低表達(dá)組(HR = 1.8,P＜0.05). EZH2和VEGF蛋白在腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于癌旁組織(P＜0.01). EZH2陽(yáng)性表達(dá)與腸癌腫瘤直徑、分化程度和Duke分期有關(guān)(P＜0.05). 而VEGF陽(yáng)性表達(dá)與腸癌患者分化程度和Duke分期存在相關(guān)性(P＜0.05).

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

EZH2和VEGF基因mRNA在腸癌組織中的表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織, 且上述基因編碼蛋白表達(dá)水平與患者的腫瘤直徑、分化程度和Duke分期有關(guān).

展望前景

EZH2和VEGF有望成為腸癌預(yù)后的潛在分子標(biāo)志物.