王登旭，趙文法，王洪梅

（1.聊城市藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心，山東 聊城 252000；2.聊城市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 聊城252000）

參苓白術(shù)丸收載于《中國藥典》2015年版一部[1]，是由人參、茯苓、白術(shù)（麩炒）、山藥、白扁豆（炒）、蓮子、薏苡仁（炒）、砂仁、桔梗、甘草10味中藥制成的水丸，具有補(bǔ)脾胃，益肺氣之功效。臨床主要用于脾胃虛弱，食多便溏，氣短咳嗽，肢倦乏力，該品種經(jīng)多年的臨床驗(yàn)證，證明療效顯著。本品現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅收載人參的薄層色譜鑒別，不能完全反應(yīng)其產(chǎn)品質(zhì)量。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)參苓白術(shù)丸主要成分人參中的人參皂苷Rg1、Re和Rb1進(jìn)行定量控制。本研究參考國內(nèi)外有關(guān)資料[2-7]，經(jīng)多次試驗(yàn),建立了HPLC測(cè)定參苓白術(shù)丸中人參皂苷含量的新方法,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、快捷、重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240型電子分析天平（瑞士Mettler）；Agilent1200高效液相色譜儀（配DAD檢測(cè)器，美國安捷倫）；HU6150B超聲波清洗器（天津恒奧）。

1.2 試藥

人參皂苷Rg1對(duì)照品（批號(hào)：110703-201832，中國食品藥品檢定研究院）；人參皂苷Re對(duì)照品（批號(hào)：110754-201827，中國食品藥品檢定研究院）；人參皂苷Rb1對(duì)照品（批號(hào)：110704-201827，中國食品藥品檢定研究院）；乙腈（色譜純，天津大茂）；水為超純水，其他試劑均為分析純；樣品為市售，陰性樣品為自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Thermo ODS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按表1進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm；流速為1.0 ml/min；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為10 μl。

表1 梯度洗脫表

2.1.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取供試品溶液10 μl，照2.1.1項(xiàng)下色譜條件注入液相色譜儀，理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算應(yīng)不低于4000，人參皂苷Rg1與相鄰峰的分離度均大于1.5。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品及人參皂苷Rb1對(duì)照品，加甲醇溶解并定量稀釋制成每l ml各含0.2 mg的混合溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品10袋，粉碎，混勻，取約10 g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷50 ml，加熱回流3 h，藥渣揮去溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2 %氫氧化鉀甲醇溶液50 ml，加熱回流1 h，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌藥渣及容器3次，合并洗液和濾液，蒸干，殘?jiān)铀?0 ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取4次（20 ml，20 ml，10 ml，10 ml），合并正丁醇提取液，分別用氨試液、1 % 磷酸二氫鉀溶液、正丁醇飽和的水各40 ml洗滌，棄去洗滌液，正丁醇液置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備 按處方工藝制備不含人參的陰性樣品，照2.2.2項(xiàng)下方法操作，即得。

2.3 專屬性考察

取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀中，照2.1.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果供試品溶液在與混合對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處有色譜峰，陰性對(duì)照溶液無干擾峰，說明方法專屬性好，見圖1。

圖1 混合對(duì)照品溶液（A）、陰性對(duì)照溶液（B）、供試品溶液（C）HPLC圖譜

2.4 線性范圍考察

精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品0.02010 g、人參皂苷Re對(duì)照品0.02019 g及人參皂苷Rb1對(duì)照品0.02036 g，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5，1.0，2.0，5.0 ml，分別置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。照2.1.1項(xiàng)下色譜條件，取對(duì)照品儲(chǔ)備液及系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，用峰面積（A）對(duì)濃度（C）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果表明，人參皂苷Rg1在0.0402～0.804 mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性回歸方程為A=5082.3C-6.6572，r=0.9995；人參皂苷Re在0.04038～0.8076 mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性回歸方程為A=4849.5C+16.458，r=0.9997；人參皂苷Rb1在0.04072～0.8144 mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性回歸方程為A=5541.7C-5.0939，r=0.9999。

2.5 精密度試驗(yàn)

取供試品溶液（批號(hào)：20181001），照2.1.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)測(cè)定5次，人參皂苷Rg1、Re、Rb1峰面積的RSD均小于2.0 %，結(jié)果表明精密度良好，符合分析要求。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取供試品（批號(hào)：20181001）6份，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，分別計(jì)算6份樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的含量，結(jié)果顯示人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1含量的RSD均小于2.0 %。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

吸取2.6項(xiàng)下供試品溶液，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件，分別在0，1，2，4，8，12，24 h測(cè)定1次。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，能滿足測(cè)定需要。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量的供試品（批號(hào)：20181001）適量，加入適量混合對(duì)照品溶液，制成低、中、高3個(gè)不同濃度的供試品溶液各3份，分別測(cè)定其含量，結(jié)果見表2～4。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確度符合規(guī)定。

表2 人參皂苷Rg1加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表3 人參皂苷Re加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表4 人參皂苷Rb1加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.9 樣品測(cè)定

3批市售樣品分別按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為20181001，20181002，20181101的樣品含量測(cè)定結(jié)果見表5。

表5 樣品測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

本文參考國內(nèi)外大量有關(guān)人參皂苷含量測(cè)定方法的文獻(xiàn)資料并經(jīng)多次試驗(yàn)，建立了HPLC測(cè)定參苓白術(shù)丸中人參皂苷含量的方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本方法專屬性良好，簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確，可用于參苓白術(shù)丸中人參皂苷含量的質(zhì)量評(píng)價(jià)。