王 威, 李 莉, 黎 奧, 王 沖, 孫同秋, 張國(guó)范

近江牡蠣(Crassostrea ariakensis)規(guī)?；斯び缂梆B(yǎng)成

王 威1, 2, 4, 李 莉1, 2, 4, 黎 奧1, 2, 4, 王 沖5, 孫同秋5, 張國(guó)范1, 3, 4

(1. 中國(guó)科學(xué)院海洋研究所中國(guó)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)海洋生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 山東 青島 266071; 2. 青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點(diǎn)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室海洋漁業(yè)可續(xù)與食物產(chǎn)出過(guò)程功能實(shí)驗(yàn)室, 山東 青島 266237; 3. 青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點(diǎn)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室海洋海洋生物學(xué)與生物技術(shù)功能實(shí)驗(yàn)室, 山東 青島 266237; 4. 海洋生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室, 山東 青島 266071; 5. 濱州市海洋與漁業(yè)研究所, 山東 濱州 256600)

近江牡蠣()為廣溫、廣鹽分布的河口區(qū)大型種, 曾在中國(guó)南北方河口區(qū)都有分布。由于近岸河口環(huán)境的變化, 在中國(guó)北方河口區(qū)一度難以尋覓, 甚至被認(rèn)為瀕臨滅絕。利用黃河三角洲區(qū)域?yàn)I州、東營(yíng)主要河口近江牡蠣資源, 借助南方豐富的淡水資源, 在福建寧德迅速開展了近江牡蠣的規(guī)?；斯び绻ぷ? 總計(jì)獲得了1 092萬(wàn)粒種苗。在近江牡蠣原產(chǎn)地濱州進(jìn)行中間培養(yǎng)及海上養(yǎng)成, 在長(zhǎng)牡蠣主養(yǎng)海區(qū)山東乳山進(jìn)行轉(zhuǎn)場(chǎng)育肥試養(yǎng)并獲得初步成功。與同期養(yǎng)殖的長(zhǎng)牡蠣相比, 近江牡蠣的氨基酸種類及含量無(wú)明顯差異, 且生長(zhǎng)速度快, 這些特點(diǎn)將有助于推動(dòng)其成為我國(guó)北方沿海的牡蠣養(yǎng)殖新品種。規(guī)?；缂梆B(yǎng)殖還有助于降低對(duì)野生近江牡蠣資源的采捕需求, 對(duì)其資源的保護(hù)、牡蠣礁的恢復(fù)重構(gòu)能夠起到促進(jìn)作用。

近江牡蠣(); 人工育苗; 規(guī)模化; 養(yǎng)成; 牡蠣礁

近江牡蠣()隸屬于雙殼綱(Bivalvia), 珍珠貝目(Pterioida), 牡蠣科(Ostreidae), 巨蠣屬(Crassostrea), 是廣鹽適應(yīng)種, 最適鹽度范圍10~25, 對(duì)低鹽耐受更強(qiáng), 棲息在河口區(qū)淡咸水交匯處, 是我國(guó)南、北方主要河口區(qū)特有牡蠣種。近江牡蠣分布曾非常廣泛, 北至中朝邊境, 南至中越邊境的北海都有分布[1]。巨蠣屬牡蠣因形態(tài)特征與生態(tài)習(xí)性比較接近, 曾分類較混亂, 當(dāng)?shù)貪O民常根據(jù)肉色差異區(qū)分為“赤蠔”與“白蠔”, “赤蠔”因受殼型、肉色、肉質(zhì)等因素影響, 多被認(rèn)為營(yíng)養(yǎng)及口感不及其他牡蠣品種。根據(jù)線粒體基因(16S rRNA, COI)和核基因(28S rRNA)的序列比對(duì), 澄清了“赤蠔”近江牡蠣()與“白蠔”香港巨牡蠣()分類問(wèn)題[2]。近江牡蠣具有強(qiáng)大的污染物濾除功能, 在歷史上是我國(guó)河口區(qū)牡蠣礁形成的核心種[3]。牡蠣礁在凈化水體、提供棲息生境、保護(hù)生物多樣性、以及固碳固氮等方面具有重要的生態(tài)功能[4-6]。近年來(lái), 受地表徑流下降、港口建設(shè)等影響, 我國(guó)北方近江牡蠣呈功能性滅絕狀態(tài), 僅能見(jiàn)零星樣品報(bào)道[7]。2017年3月, 在黃河三角洲流域?yàn)I州、東營(yíng)河口區(qū)發(fā)現(xiàn)近江牡蠣成片的自然種群, 面臨著港口建設(shè)、濫采亂捕的局面, 亟待需要盡快開展相關(guān)資源補(bǔ)充和保護(hù)修復(fù)工作。

鑒于近江牡蠣在北方資源量銳減甚至在多個(gè)地區(qū)河口瀕危的局面, 種苗規(guī)模繁育和原位增殖是其資源保護(hù)及礁體恢復(fù)的關(guān)鍵。結(jié)合前期近江牡蠣不同鹽度繁育實(shí)驗(yàn)結(jié)果[8]及成貝的耐高鹽特性(尚未發(fā)表數(shù)據(jù)), 研究開展的北方近江牡蠣種群的規(guī)?；斯び? 采用南方低鹽海區(qū)育苗, 北方原位養(yǎng)殖以及牡蠣主養(yǎng)區(qū)越冬育肥的策略,并取得一定成效。人工養(yǎng)殖近江牡蠣生長(zhǎng)快, 肉味鮮美, 有望成為我國(guó)北方高端牡蠣品種, 減小對(duì)近江牡蠣野生資源的采捕需求。規(guī)模繁育的近江牡蠣種苗, 也有助于牡蠣礁修復(fù)與重建工作的開展, 從而實(shí)現(xiàn)河口區(qū)生態(tài)修復(fù)與綠色治理。

1 材料和方法

1.1 材料來(lái)源

近江牡蠣采集自黃河三角洲流域?yàn)I州、東營(yíng)主要河口區(qū), 采集到的近江牡蠣樣品具有較大的形態(tài)差異。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 種質(zhì)鑒定

線粒體細(xì)胞色素C氧化酶Ⅰ(COI)是一個(gè)通用性強(qiáng), 進(jìn)化快的基因。COI基因在長(zhǎng)牡蠣和近江牡蠣中會(huì)有堿基的差異(圖2), 不同堿基的Tm值不同, 利用HRM的方法通過(guò)SNP分型對(duì)采集牡蠣親本進(jìn)行物種鑒定[9]。

1.2.2 親貝管理

將采自山東濱州的近江牡蠣, 2017年4月29日送往福建省寧德市三都澳育苗企業(yè)開展親貝促熟管理。室內(nèi)促熟條件為: 鹽度16~18; 溫度24~25℃; 餌料為混合藻類(蝦塘水以及人工培養(yǎng)的角毛藻、扁藻和硅藻), 每天2次, 投喂量以投喂前水清為準(zhǔn); 培育密度35只/m3, 每2天換水一次。

圖1 不同河口區(qū)近江牡蠣形態(tài)表現(xiàn)出較大差異

注: A: 馬頰河河口近江牡蠣樣品; B: 套爾河河口近江牡蠣樣品

1.2.3 人工授精

解剖選擇性腺發(fā)育較好、鏡檢無(wú)精子污染的的母貝, 將30只個(gè)體的卵子混合并重新分成30份, 分別與30只雄性個(gè)體的精子一對(duì)一授精, 鏡檢確定每份中大部分卵子出現(xiàn)第一極體后, 混勻30份受精卵并轉(zhuǎn)入大池進(jìn)行培育。

1.2.4 幼蟲管理

受精卵發(fā)育24h后, 大部分達(dá)到D型幼蟲階段, 孵化的種苗選取健康無(wú)畸形的上浮幼蟲至培育池。每天取幼蟲, 奧林巴斯數(shù)顯顯微鏡下用數(shù)顯軟件測(cè)量幼蟲的生長(zhǎng)參數(shù)(殼高)。在實(shí)驗(yàn)期間, 每天換水1/2量, 期間投喂金藻和小球藻, 每天4次, 投喂量以投喂前水變清做調(diào)整。當(dāng)幼蟲平均殼高超過(guò)320μm以上, 培育水層表層取樣獲得幼蟲超過(guò)2/3眼點(diǎn)幼蟲時(shí), 投放附著基使用4.3×15 cm規(guī)格塑料片、牡蠣殼串進(jìn)行采苗。

1.2.5 稚貝中間培育

福建寧德近江牡蠣種苗經(jīng)冷藏(4℃)轉(zhuǎn)運(yùn)至濱州無(wú)棣縣海旺育苗場(chǎng), 在車間鹽度20的海水中暫養(yǎng)2天后, 轉(zhuǎn)移至鹽度26~28的蝦池中開展中間培育。待種苗適應(yīng)濱州海區(qū)鹽度后, 分苗至每串10片附著基, 每片附著基間隔15cm, 轉(zhuǎn)移至養(yǎng)殖區(qū)筏架養(yǎng)殖。

1.2.6 養(yǎng)成以及育肥

在濱州無(wú)棣縣埕口鎮(zhèn)大口河口鹽場(chǎng)取水河道(38°14′01″N, 117°51′19″E)中開展近江牡蠣浮筏養(yǎng)殖, 養(yǎng)殖密度為每串間隔25cm。受鹽場(chǎng)上水影響, 運(yùn)河水體鹽度范圍17~30。將養(yǎng)殖1年的近江牡蠣運(yùn)到山東乳山傳統(tǒng)長(zhǎng)牡蠣養(yǎng)殖區(qū)(鹽度27~30), 開展常規(guī)海區(qū)的近江牡蠣籠養(yǎng)育肥試驗(yàn)。育肥期間密度為每層10只, 每籠100只。

1.2.7 氨基酸含量測(cè)定

將近江牡蠣取樣后, 軟體部冷凍干燥后研磨成粉末, 每個(gè)樣品取固體粉末100mg, 利用高效液相色譜法檢測(cè)近江牡蠣中水解氨基酸的含量。

2 結(jié)果

2.1 種類鑒定

圖2中可以看出待測(cè)牡蠣樣品的COI基因片段溶解曲線(矯正溫度后的熒光值: d(熒光值)/d(溫度))和近江牡蠣標(biāo)準(zhǔn)品溶解曲線聚集在一起, 與長(zhǎng)牡蠣標(biāo)準(zhǔn)品溶解曲線分離, 可以判斷待測(cè)牡蠣樣品為近江牡蠣。

圖2 牡蠣樣品的HRM鑒定結(jié)果

2.2 采苗

2017年6月, 在福建省寧德市三都澳育苗企業(yè)投放聚丙烯塑料片附著基1 400片, 每片附苗量1 458粒, 共計(jì)培育種苗204萬(wàn)粒; 投放牡蠣殼附著基8萬(wàn)片, 平均每殼附苗量111粒, 共計(jì)培育種苗888萬(wàn)粒, 累計(jì)獲得平均殼高>500μm的牡蠣稚貝苗1 092萬(wàn)粒, 實(shí)現(xiàn)了近江牡蠣規(guī)模化人工育苗。

2.3 中間培育

出池后在寧德墾區(qū)及濱州無(wú)棣蝦池進(jìn)行中間培育標(biāo)粗, 至2017年8月, 平均殼高達(dá)2.63cm, 分苗后每串有10個(gè)牡蠣殼, 共計(jì)7 820串, 平均每殼附著近江牡蠣10.6個(gè)。

2.4 養(yǎng)成及育肥

2017年8月將附殼苗移養(yǎng)至運(yùn)河浮筏, 至2017年10月, 成活種苗72萬(wàn)粒, 平均殼高6.55cm, 成活率86.84%。至2018年10月, 15月齡近江牡蠣平均殼高達(dá)98.23mm, 平均個(gè)體重90.50g。在山東乳山傳統(tǒng)長(zhǎng)牡蠣養(yǎng)殖區(qū)開展了近江牡蠣的育肥試驗(yàn), 至2019年4月份, 育肥試驗(yàn)的近江牡蠣存活率達(dá)88%, 平均殼高達(dá)108.89mm, 平均個(gè)體重160.13g。比同期海區(qū)養(yǎng)殖商品規(guī)格長(zhǎng)牡蠣個(gè)體重高37.9%。

2.5 氨基酸組成檢測(cè)

與長(zhǎng)牡蠣相比, 近江牡蠣水解氨基酸含量占到干重的33.18%, 所檢測(cè)到的氨基酸種類組成及含量與長(zhǎng)牡蠣相比并無(wú)明顯差異。

3 討論

早期已有近江牡蠣的人工育苗工作的報(bào)告[10-11], 但由于當(dāng)時(shí)近江牡蠣的分類不明, 該類工作多為香港巨牡蠣育苗, 無(wú)法確定為近江牡蠣。鹽度是近江牡蠣幼蟲生長(zhǎng)發(fā)育和附著變態(tài)的重要影響因素[12], 充分利用中國(guó)南方豐富的淡水資源, 克服了北方育苗場(chǎng)淡水資源匱乏的難題, 通過(guò)在人工規(guī)模繁育期間鹽度、水溫的調(diào)控, 在高溫、低鹽度的條件下對(duì)近江牡蠣進(jìn)行規(guī)模化人工育苗, 并在近江牡蠣的原產(chǎn)區(qū)養(yǎng)殖以及在牡蠣主養(yǎng)區(qū)育肥, 構(gòu)建了一條近江牡蠣“育苗-養(yǎng)殖”南北接力, 原產(chǎn)地與主養(yǎng)轉(zhuǎn)場(chǎng)養(yǎng)殖鏈條。

表1 近江牡蠣、長(zhǎng)牡蠣水解氨基酸含量測(cè)定

已有的研究表明, 牡蠣等貝類不同地理群體存在顯著的遺傳分化[13-14]。鑒于近江牡蠣自然分布在河口區(qū), 不同地理群體存在基因隔離且環(huán)境差異, 近江牡蠣不同群體間也存在顯著的適應(yīng)性分化[15]。為了提高養(yǎng)殖存活率以及最大可能的保護(hù)近江牡蠣不同群體的多樣性, 我們對(duì)近江牡蠣濱州群體進(jìn)行了基于原產(chǎn)地的養(yǎng)殖與資源的原位修復(fù)。本次近江牡蠣中間培育獲得的稚貝量?jī)H占培育種苗量的6.65%,較長(zhǎng)牡蠣生產(chǎn)保苗率偏低, 可能受到夏季高溫期長(zhǎng)途轉(zhuǎn)運(yùn)幼苗的影響, 后期可以進(jìn)一步優(yōu)化運(yùn)輸與中間培育、養(yǎng)殖條件以提升各個(gè)環(huán)節(jié)的存活率。

近江牡蠣氨基酸含量分析表明濱州生長(zhǎng)的近江牡蠣在氨基酸成分組成及呈味氨基酸含量上與濱州本地長(zhǎng)牡蠣及南方的香港巨牡蠣并無(wú)顯著差異[16-17], 該品種在南方養(yǎng)殖較少且不受市場(chǎng)認(rèn)可的主要還是因?yàn)槿馍?、出肉率等原因[18]。而在中國(guó)北方, 近年來(lái)因采捕到的野生近江牡蠣個(gè)體較長(zhǎng)牡蠣大, 受到了市場(chǎng)的追捧, 引發(fā)的漁民無(wú)序的采捕導(dǎo)致其資源的枯竭, 牡蠣礁的生態(tài)功能也遭受到嚴(yán)重破壞。近江牡蠣的規(guī)?；斯び缗c海區(qū)養(yǎng)殖的全鏈條的打通, 可增加近江牡蠣的養(yǎng)殖產(chǎn)量, 緩解市場(chǎng)對(duì)野生近江牡蠣的采捕需求, 對(duì)北方河口區(qū)近江牡蠣資源補(bǔ)充及牡蠣礁生態(tài)修復(fù)有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。此外, 基于近江牡蠣規(guī)?；斯び绻ぷ鏖_展, 近江牡蠣高鹽適應(yīng)、高肥滿度群體的遺傳改良工作以及適應(yīng)性分化等基礎(chǔ)性研究也在進(jìn)行之中。

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Large-scale artificial reproduction and cultivation of the Jinjiang Oyster ()

WANG Wei1, 2, 4, LI Li1, 2, 4, LI Ao1, 2, 4, WANG Chong5, SUN Tong-qiu5, ZHANG Guo-fan1, 3, 4

(1. CAS Key Laboratory of Experimental Marine Biology, Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Qingdao 266071, China; 2. Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Pilot National Laboratory for Marine Science and Technology (Qingdao), Qingdao 266237, China; 3. Labora-tory for Marine Biology and Biotechnology, Pilot National Laboratory for Marine Science and Technology (Qingdao), Qingdao 266237, China; 4. National and Local Joint Engineering Laboratory of Ecological Mariculture, Qingdao 266071, China; 5. Binzhou Ocean and Fisheries Research Institute, Binzhou 256600, China)

The Jinjiang oyster () is commonly found in rivers and estuaries with relatively low salinities ranging between 10 and 25 ppt. The Jinjiang oyster was also widely distributed in China, ranging from Lizijiang (Oyster River) on the border with Korea to Beihai of Guangxi Province and even in Hainan Province. However, due to overfishing combined with other anthropogenic factors such as decreased freshwater inflows and pollution from land-based sources, there has been a dramatic loss of wild Jinjiang oyster resources in China over the past few decades. The situation is even worse in northern China, and the Jinjiang oyster is endangered in several rivers and estuaries. Large-scale artificial reproduction of Jinjiang oysters was conducted by using the Jinjiang oyster resources in Binzhou and Dongying of the Yellow River delta region in the summer of 2017, which resulted in a total of 10.92 million seedlings. The spats and juveniles were cultured in Binzhou, the origin of the Jinjiang oyster till November 2018, and a fattening experiment was conducted in Rushan, the major sea area wherewas raised. The success of large-scale artificial reproduction and cultivation of the Jinjiang oyster in the northern China Sea will promote resource protection and restoration of this species, and it is also critical to the development of new varieties so that it could emerge as a major aquaculture species in the northern China Sea.

, artificial breeding, scale production, cultivation, oyster reef

Jul. 11, 2019

[CAS Strategic Priority Research Program (A), No. XDA23050402; China Agriculture Research System, No. CARS-49]

S917.4

A

1000-3096(2020)02-0108-05

10.11759/hykx20190711003

2019-07-11;

2019-10-21

中國(guó)科學(xué)院戰(zhàn)略性先導(dǎo)科技專項(xiàng)(A類)(XDA23050402), 國(guó)家貝類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-49)

王威(1983-), 男, 工程師, 從事貝類生態(tài)養(yǎng)殖與牡蠣礁修復(fù)研究, E-mail: wangwei@qdio.ac.cn; 李莉,通訊作者, 研究員, E-mail: lili@qdio.ac.cn

(本文編輯: 趙衛(wèi)紅)