彭 茗,宋冬梅,樂(lè) 健
(上海市食品藥品檢驗(yàn)所化學(xué)室,國(guó)家藥品監(jiān)督管理局化學(xué)藥品制劑質(zhì)量分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海 201203)
膦甲酸鈉(foscarnet sodium)是一種廣譜抗病毒藥[1],化學(xué)名稱為膦甲酸三鈉鹽六水合物,分子式為CNa3O5P·6H2O。膦甲酸鈉乳膏是一種乳劑型基質(zhì)的乳膏,用于免疫功能損害病人對(duì)阿昔洛韋耐藥的單純皰疹病毒性皮膚、黏膜感染[2]。
膦甲酸鈉乳膏的現(xiàn)行質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)收載于新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第55冊(cè),標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-134)-2004Z[3]。該標(biāo)準(zhǔn)中鈉鹽鑒別采用醋酸氧鈾鋅沉淀法。醋酸氧鈾鋅沉淀法系2005年版及以往版本《中華人民共和國(guó)藥典》(簡(jiǎn)稱藥典)附錄中鈉鹽鑒別(2)的方法[4],但由于醋酸氧鈾鋅具有放射性,自2010年版藥典起,將鈉鹽鑒別(2)改為焦銻酸鈉沉淀法[5]。焦銻酸鈉沉淀法是一種高靈敏度的鈉離子檢查方法,含鈉離子的供試品溶液在堿性條件下可以與焦銻酸鉀反應(yīng),生成白色致密的焦銻酸鈉沉淀。此方法曾被應(yīng)用于血鈉檢測(cè)[6-7]、食品摻假檢測(cè)[8]等領(lǐng)域中。
本研究改進(jìn)了膦甲酸鈉乳膏鈉鹽鑒別方法。乳膏經(jīng)熾灼灰化處理后,采用焦銻酸鈉沉淀法,方法的專屬性和耐用性良好,可取代現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的鈉鹽鑒別方法。
CWF11/13型高溫馬弗爐(英國(guó)Carbolite公司);Acculab型電子天平(精度0.01 g)和CP224S型電子天平(精度0.000 1 g)由德國(guó)Sartorius公司提供。膦甲酸鈉乳膏(規(guī)格0.15 g∶5 g,批號(hào)180403、181001和181101,上?,F(xiàn)代制藥股份有限公司);膦甲酸鈉原料(物料編號(hào)01.01.506-p-1801001)、空白基質(zhì)(由聚山梨酯80、三乙醇胺、丙二醇、羥苯乙酯、純化水、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、十八醇、白凡士林和輕質(zhì)液狀石蠟組成,上?,F(xiàn)代制藥股份有限公司);碳酸鉀(純度99.0%,批號(hào)20130222,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);焦銻酸鉀(分析純,批號(hào)150701,上海四赫維化工有限公司);氫氧化鉀(分析純,批號(hào)20121218,上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)。焦銻酸鉀試液按照2015年版藥典四部通則8002配制。
2.1 供試品溶液的制備 稱取膦甲酸鈉乳膏約3.3 g(相當(dāng)于膦甲酸鈉100 mg),置石英坩堝中,于加熱板上緩緩熾灼至完全炭化,再置高溫馬弗爐中,于800 ℃熾灼使完全灰化,放冷,加水2 ml使殘?jiān)芙?,作為供試品溶液?/p>
2.2 鈉鹽鑒別方法 將2.1項(xiàng)下供試品溶液轉(zhuǎn)移至小燒杯中,加15%碳酸鉀溶液2 ml,并加玻璃珠若干粒,置加熱板上煮沸,無(wú)沉淀生成;再加焦銻酸鉀試液4 ml,加熱至沸;置冰水中冷卻,即有致密的白色沉淀生成。
2.3 方法學(xué)驗(yàn)證
2.3.1 靈敏度考察 稱取膦甲酸鈉原料500 mg,于800 ℃熾灼,殘?jiān)铀?0 ml溶解,搖勻,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1、0.5、0.2和0.1 ml,分別置4個(gè)小燒杯中,分別加水1、1.5、1.8和1.9 ml,搖勻,分別作為靈敏度實(shí)驗(yàn)溶液(1)、(2)、(3)和(4),再按2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果靈敏度實(shí)驗(yàn)溶液(1)~(3)均生成明顯的白色致密沉淀,而靈敏度實(shí)驗(yàn)溶液(4)生成比較少量的白色沉淀(見(jiàn)圖1)。因此,膦甲酸鈉原料的焦銻酸鈉沉淀法鈉鹽鑒別的靈敏度為5 mg(按膦甲酸鈉原料計(jì))。
2.3.2 專屬性實(shí)驗(yàn) 稱取空白基質(zhì)3.58 g,置石英坩堝中,按2.1項(xiàng)下方法制備空白溶液,再按2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),結(jié)果未生成白色致密沉淀(見(jiàn)圖2)。另取空白基質(zhì)3.32 g和膦甲酸鈉原料0.102 1 g,置石英坩堝中,按2.1項(xiàng)下方法制備空白加樣溶液,再按2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),結(jié)果生成致密的白色沉淀(見(jiàn)圖2)。說(shuō)明空白基質(zhì)無(wú)干擾,方法專屬性良好。
圖1 靈敏度實(shí)驗(yàn)中溶液(4)的俯視圖和側(cè)面圖A:俯視圖;B:側(cè)面圖
2.3.3 耐用性實(shí)驗(yàn) 取批號(hào)為180403的膦甲酸鈉乳膏樣品,分別稱取1.66、3.36和6.80 g,分別置石英坩堝中,按2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液,再按2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),結(jié)果均生成致密的白色沉淀,說(shuō)明樣品的取樣量在50%~200%的范圍內(nèi),均呈正反應(yīng),耐用性良好。另取批號(hào)為180403的樣品,分別稱取3.43、3.36和3.38 g,分別置石英坩堝中,按2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液,熾灼溫度分別設(shè)為600 ℃、700 ℃和800 ℃,再按2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果在600 ℃的熾灼溫度下,樣品不能完全灰化(見(jiàn)圖3A),對(duì)結(jié)果造成干擾;700 ℃和800 ℃的熾灼溫度均能使樣品完全灰化(見(jiàn)圖3B、C),結(jié)果均生成致密的白色沉淀,說(shuō)明本方法的熾灼溫度在700 ℃~800 ℃的范圍內(nèi),耐用性良好。
圖2 專屬性實(shí)驗(yàn)中空白溶液和空白加樣溶液的俯視圖和側(cè)面圖A:空白溶液的俯視圖;B:空白溶液的側(cè)面圖;C:空白加樣溶液的俯視圖;D:空白加樣溶液的側(cè)面圖
圖3 膦甲酸鈉乳膏經(jīng)熾灼后的照片A:熾灼溫度為600 ℃;B:熾灼溫度為700 ℃;C:熾灼溫度為800 ℃
2.4 樣品檢測(cè) 分別取批號(hào)為180403、181001和181101的膦甲酸鈉乳膏樣品3.36、3.36和3.54 g,分別按2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液,再按2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),結(jié)果均生成致密的白色沉淀,即鈉鹽鑒別(2)均呈正反應(yīng)。
9.0版歐洲藥典[9]和42版美國(guó)藥典[10]均收載了膦甲酸鈉原料,其中鈉鹽鑒別均采用焦銻酸鈉沉淀法,且均將樣品直接溶于水后制備供試品溶液,無(wú)需熾灼。因此,作者曾考慮將乳膏直接用水分散后離心,取水層作為供試品溶液進(jìn)行鈉鹽鑒別(2)的實(shí)驗(yàn)。但由于水層為下層,不易獲取澄清的下層溶液,且渾濁的下層溶液對(duì)結(jié)果造成干擾。另嘗試取水層濾過(guò),取濾液作為供試品溶液,分別使用濾紙以及孔徑為0.45和0.22 μm的濾膜過(guò)濾。結(jié)果用0.45 μm的濾膜過(guò)濾較困難,不易獲得鑒別實(shí)驗(yàn)需要的2 ml體積,且濾液不澄清;用0.22 μm的濾膜雖濾液澄清,但極難過(guò)濾,不具可操作性。綜上,用水直接分散樣品后離心、過(guò)濾制備供試品溶液的方法不可行。
2015年版藥典四部通則中鈉鹽鑒別(1)采用焰色反應(yīng)法,即觀察鈉元素特征的鮮黃色火焰。作者曾采用空白基質(zhì)對(duì)焰色反應(yīng)法的專屬性進(jìn)行考察,結(jié)果多種處理方法下的空白基質(zhì)或空白溶液經(jīng)灼燒后均能產(chǎn)生鮮黃色火焰,對(duì)該乳膏劑的焰色法鈉鹽鑒別產(chǎn)生干擾(見(jiàn)表1)。因此藥典通則鈉鹽鑒別(1),即焰色反應(yīng)法鑒別不適用于膦甲酸鈉乳膏。
表1 空白基質(zhì)火焰法鑒別鈉鹽的干擾情況
本研究采用經(jīng)典的焦銻酸鈉沉淀法,解決了現(xiàn)行膦甲酸鈉乳膏國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)鈉鹽鑒別方法無(wú)法獲得試劑的問(wèn)題,且方法專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單,采用常規(guī)試劑和設(shè)備即可完成實(shí)驗(yàn),無(wú)需使用復(fù)雜的儀器,適合于該產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂。需注意的是,在熾灼裝有乳膏的石英坩堝時(shí),應(yīng)將加熱板溫度盡量調(diào)低,待乳膏漸漸融化并緩緩蒸干后,再將加熱板溫度調(diào)高進(jìn)行炭化,否則融化的乳膏在較高的加熱溫度下會(huì)濺出坩堝外,影響實(shí)驗(yàn)的實(shí)際取樣量。